蘇峙宇 劉立紅 劉暢 陳方旭 艾浩 (錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院,遼寧 錦州 121001)
宮頸癌是女性常見(jiàn)的一種惡性腫瘤,研究顯示,宮頸癌的發(fā)病率近年來(lái)也呈現(xiàn)上升趨勢(shì)〔1~3〕。糖尿病也是臨床上老年人發(fā)病較多的慢性疾病,患者需要時(shí)刻并長(zhǎng)期控制血糖水平。宮頸癌合并糖尿病患者在進(jìn)行治療時(shí)更需要時(shí)刻注意相關(guān)因子及指標(biāo)是否達(dá)標(biāo),否則會(huì)對(duì)患者的生命安全、治療后生活質(zhì)量產(chǎn)生嚴(yán)重影響〔4~7〕。Fas是一種跨膜蛋白,屬于腫瘤壞死因子受體超家族成員,與FasL組成的信號(hào)通路在細(xì)胞凋亡中起重要作用〔8,9〕。Bcl-2是一種膜整合蛋白,可以阻止細(xì)胞色素c從線粒體釋放到細(xì)胞質(zhì)從而可以抑制細(xì)胞凋亡〔10〕。本研究旨在探討老年宮頸癌合并糖尿病患者細(xì)胞凋亡因子Fas、Bcl-2的表達(dá)及其臨床意義。
1.1一般資料 選取2020年6月至2021年6月錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院收治的200例老年宮頸癌合并糖尿病患者為研究組,年齡60~87歲,平均(69.83±7.07)歲,平均體重(68.25±11.96)kg。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)自愿參加本次研究;(2)發(fā)現(xiàn)腫瘤前存在明確的糖尿病史,且由宮頸刮片細(xì)胞學(xué)檢查、陰道鏡檢查等確診為宮頸癌的患者;(3)血常規(guī)其他指數(shù)正常;(4)患者臨床資料齊全,具有正常的閱讀及溝通能力,能夠與醫(yī)護(hù)人員正常理解及溝通。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)存在重要臟器功能不全者;(2)存在自身免疫性疾病及其他部位惡性腫瘤者;(3)有精神疾病,無(wú)法進(jìn)行正常溝通交流者;(4)發(fā)現(xiàn)宮頸癌后在治療過(guò)程中并發(fā)糖尿病者。選取同期在我院收治的186例老年宮頸癌患者(宮頸癌組)及進(jìn)行健康體檢的201例女性健康人群(對(duì)照組),平均年齡(70.52±7.03)歲,平均體重(66.08±13.16)kg。本研究中全部宮頸癌患者按照國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)病理分期標(biāo)準(zhǔn),其中宮頸癌組Ⅰ期40例,Ⅱ期65例,Ⅲ期68例,Ⅳ期13例,平均年齡(69.04±6.72)歲,平均體重(68.97±15.17)kg;研究組Ⅰ期37例,Ⅱ期73例,Ⅲ期81例,Ⅳ期9例;3組年齡、體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
1.2Fas、Bcl-2陽(yáng)性水平檢測(cè) 免疫組織化學(xué)SP法,取各組宮頸組織,制成石蠟切片,切片于60℃干燥箱中烘干過(guò)夜,常規(guī)二甲苯脫蠟,梯度酒精入水,使用0.01 mol/L檸檬酸鈉緩沖液微波加熱進(jìn)行切片的抗原修復(fù),使用10%羊血清室溫孵育30 min,分別加入Fas及Bcl-2的抗體,4℃孵育過(guò)夜,隔日用1倍TBS洗滌3次,每次5 min,隨后加入對(duì)應(yīng)二抗于37℃孵育1 h,隨后用1倍TBS洗滌3次,每次5 min,加入現(xiàn)配的二氨基聯(lián)苯胺(DAB)溶液,蘇木素復(fù)染1 min,用中性樹(shù)膠封片。本研究中以乳腺癌組織作為Fas、Bcl-2陽(yáng)性對(duì)照,以正常宮頸組織作為陰性對(duì)照,磷酸鹽緩沖液(PBS)為空白對(duì)照。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn):免疫組化染色以細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核染成黃色或棕褐色為陽(yáng)性;判斷標(biāo)準(zhǔn):每張切片選擇5個(gè)高倍視野(放大400倍)進(jìn)行觀察,對(duì)染色深淺評(píng)分,無(wú)色或藍(lán)色為0分,淺黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為3分。計(jì)數(shù)每張切片中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),每次計(jì)數(shù)200個(gè),共計(jì)數(shù)3次,取平均值,按照顏色計(jì)算分值,陽(yáng)性細(xì)胞比例≤5%為0分,6%~20%為1分,21%~50%為2分,≥51%為3分。按照陽(yáng)性細(xì)胞分值與染色分值的乘積進(jìn)行分類(lèi),0分為陰性(-),否則為陽(yáng)性。
1.3流式細(xì)胞技術(shù)測(cè)定細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI) 取宮頸組織,置于盛有PBS的小燒杯內(nèi),使用眼科剪及眼科鑷將其反復(fù)剪碎及撕扯后過(guò)濾(160目尼龍網(wǎng)篩)制成單細(xì)胞懸液,通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)板調(diào)整細(xì)胞濃度為1×109cells/L。取1 ml單細(xì)胞懸液,離心后去上清,加入1 ml PBS重懸細(xì)胞,并重復(fù)離心去上清,使用70%乙醇4℃固定細(xì)胞1~2 h,隨后800 r/min,離心5 min,棄上清后使用PBS漂洗1次,離心去上清,加入50 μg/ml碘化丙啶(PI)1 ml,4℃避光染色30 min,用流式細(xì)胞儀檢測(cè),計(jì)算AI。
1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)及方差分析。
2.1各組細(xì)胞凋亡因子Fas和 Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)水平比較 研究組、宮頸癌組中四期患者Fas、Bcl-2陽(yáng)性率與對(duì)照組有顯著差異(P<0.001)。研究組整體Fas、Bcl-2陽(yáng)性率與對(duì)照組陽(yáng)性率差異顯著(χ2=136.643、132.717,均P<0.001),與宮頸癌組有顯著差異(χ2=3.940、3.963,均P<0.05),見(jiàn)表1。
2.2各組AI比較 3組AI有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=601.987,P<0.05),其中宮頸癌組(6.15±3.05)顯著高于對(duì)照組(2.09±0.88;t=18.078,P<0.001),但明顯低于研究組(9.56±2.06;t=12.951,P<0.001)。
表1 各組Fas、Bcl-2陽(yáng)性率比較〔n(%)〕
宮頸癌是婦科常見(jiàn)惡性腫瘤之一,是女性癌癥死亡的主要原因之一,臨床表現(xiàn)為接觸性出血、陰道異常出血及陰道排液增多等癥狀。宮頸癌的發(fā)病高峰期一般在60周歲以上,老年婦女的性生活停止或減少,出現(xiàn)接觸性出血較少,即早期癥狀并不明顯,而確診時(shí)一般已處于中晚期〔1~3〕。宮頸癌治療常用的方法包括但不限于手術(shù)、放療、化療等綜合應(yīng)用。但由于老年患者年齡偏大、機(jī)體抵抗力差、合并疾病多、手術(shù)范圍大等一系列原因使得手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)增大〔2〕。糖尿病是一種多病因的代謝類(lèi)疾病,其特征是高血糖。老年患者一般是2型糖尿病,即非胰島素依賴(lài)型糖尿病,患者仍然分泌一定量的胰島素,但其降低血糖的能力降低,機(jī)體對(duì)葡萄糖的利用能力隨著年齡也呈下降趨勢(shì)。糖尿病患者需要通過(guò)控制脂肪、糖等成分的攝入來(lái)穩(wěn)定血糖水平,但合并宮頸癌患者,考慮其是一種消耗性疾病,不能對(duì)脂肪、糖進(jìn)行過(guò)度限制〔4,5,7〕,因此對(duì)老年宮頸癌合并糖尿病患者血清的相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定,有利于臨床上掌握對(duì)該類(lèi)患者治療及護(hù)理?xiàng)l件〔5,6〕。
細(xì)胞凋亡又稱(chēng)細(xì)胞程序性死亡,是一種與有絲分裂相反的方式調(diào)節(jié)細(xì)胞群體穩(wěn)定的重要方式。細(xì)胞凋亡對(duì)腫瘤的發(fā)生、抗癌藥物的治療及細(xì)胞間信息傳遞同樣有重要作用。有研究表明當(dāng)宮頸上皮細(xì)胞發(fā)生不典型增生時(shí),也會(huì)伴隨細(xì)胞凋亡的增加,而宮頸癌患者AI減少,表明宮頸癌的發(fā)生發(fā)展與細(xì)胞凋亡之間有密切相關(guān)性〔14~17〕。隨著疾病的進(jìn)展及細(xì)胞內(nèi)相關(guān)基因表達(dá)的變化,細(xì)胞凋亡受到抑制,導(dǎo)致宮頸上皮細(xì)胞平衡被破壞,從而引發(fā)癌變。Fas與Bcl-2均在細(xì)胞凋亡及宮頸組織發(fā)生癌變的過(guò)程中發(fā)揮了重要作用〔9~13〕。
有研究表明糖尿病患者更容易并發(fā)癌癥〔18,19〕,本研究結(jié)果表明Fas、Bcl-2不僅參與老年宮頸癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程,同時(shí)對(duì)宮頸癌組織細(xì)胞凋亡發(fā)揮一定影響作用,而Fas、Bcl-2在合并糖尿病的老年宮頸癌患者組織的細(xì)胞凋亡中參與度更高,但其具體機(jī)制還需要深入研究。