程蘭芳

(鄭州市金水區(qū)總醫(yī)院病理科，河南 鄭州 450000)

胃癌屬臨床常見(jiàn)惡性腫瘤之一，發(fā)病率及死亡率均較高，且多以進(jìn)展期胃癌患者為主。病理學(xué)研究結(jié)果顯示，微小RNA(miR)在惡性腫瘤細(xì)胞的增殖及凋亡過(guò)程中具有重要調(diào)節(jié)作用，可通過(guò)調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄后水平參與腫瘤發(fā)生、發(fā)展及化療藥物耐藥等[1]。miR-95屬miRNA家族重要一員，參與肺癌、前列腺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌等多種惡性腫瘤病情進(jìn)展，可一定程度調(diào)控癌細(xì)胞增殖與凋亡[2]。但其在胃癌組織中的表達(dá)及與胃癌病情進(jìn)展的關(guān)系尚未明確。本研究選取我院行手術(shù)治療胃癌患者122例，旨在研究miR-95在胃癌組織及癌旁組織中的表達(dá)及臨床意義?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018-01～2019-12鄭州市金水區(qū)總醫(yī)院行手術(shù)治療胃癌患者122例，其中男76例，女46例；年齡39～74歲，平均(57.24±8.19)歲；腫瘤大小3.1～6.6cm，平均(4.82±0.82)cm；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期45例，Ⅲ～Ⅳ期77例；腫瘤分化程度：高、中分化97例，低、未分化25例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況：陽(yáng)性101例，陰性21例。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

(1)納入標(biāo)準(zhǔn)：均經(jīng)超聲內(nèi)鏡、病理學(xué)檢查等確診；患者各項(xiàng)生命體征均正常；均行胃癌根治術(shù)治療；術(shù)前均未采用放療、化療等抗腫瘤治療；患者及其家屬均知情本研究并簽署同意書(shū)。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他腫瘤；重要器官功能異常；存在手術(shù)相關(guān)禁忌證；合并血液、免疫系統(tǒng)疾病。

1.3 方法

術(shù)中腫瘤離體后，分別取新鮮腫瘤組織及距腫瘤邊緣>3cm癌旁正常胃黏膜組織各2份，大小為1.0cm×0.5cm×0.5cm，其中1份經(jīng)磷酸鹽緩沖液漂洗后轉(zhuǎn)入-80℃液氮速凍冰箱中凍存?zhèn)溆?，另外一份?h內(nèi)實(shí)施原代細(xì)胞培養(yǎng)。分別充分研磨術(shù)中切除的新鮮組織，以200目細(xì)胞篩過(guò)濾后制成單細(xì)胞懸液，將細(xì)胞株接種至細(xì)胞培養(yǎng)皿，細(xì)胞濃度為5×105個(gè)/mL，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中孵育，培養(yǎng)基為含10%胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL鏈霉素的RPMI 1640培養(yǎng)基，每1～2d對(duì)培養(yǎng)基實(shí)施換液，細(xì)胞融合至80%～90%時(shí)每3d以0.25%胰蛋白酶消化并傳代細(xì)胞，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行測(cè)定。以Trizol試劑(美國(guó)，Invitrogen)提取組織細(xì)胞總RNA，將RNA以反轉(zhuǎn)錄試劑盒(美國(guó)，Promega)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，將所獲取的反轉(zhuǎn)錄RNA與相應(yīng)靶基因引物、實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(qPCR)Master Mix混合建立反應(yīng)體系后進(jìn)行qPCR檢測(cè)，以94℃、30s(第1個(gè)步驟)-58℃、30s(第2個(gè)步驟)-30s，72℃(第3個(gè)步驟)為1個(gè)循環(huán)連續(xù)進(jìn)行40個(gè)循環(huán)反應(yīng)，于每個(gè)循環(huán)第3個(gè)步驟末期收集信號(hào)，U6為miRNA檢測(cè)內(nèi)參，β-actin為mRNA檢測(cè)內(nèi)參，以△Ct、△△Ct方法計(jì)算結(jié)果，獲取mRNA表達(dá)相對(duì)定量值，miR-95采用微小RNA檢測(cè)試劑盒(Gene Copoia公司)檢測(cè)。

1.4 觀察指標(biāo)

(1)手術(shù)標(biāo)本胃癌組織、癌旁組織中miR-95表達(dá)水平。(2)不同臨床病理特征(TNM分期、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況)患者胃癌組織中miR-95表達(dá)水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 胃癌、癌旁組織中miR-95表達(dá)水平

手術(shù)標(biāo)本qPCR檢測(cè)結(jié)果顯示，胃癌組織miR-95表達(dá)量為(0.110±0.016)，高于癌旁組織(0.045±0.022)(t=26.392，P<0.001)。

2.2 不同臨床病理特征患者胃癌組織miR-95表達(dá)水平

TNM分期Ⅰ～Ⅱ期患者胃癌組織miR-95表達(dá)量與TNM分期Ⅲ～Ⅳ期患者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，腫瘤高、中分化患者胃癌組織miR-95表達(dá)量低于腫瘤低、未分化患者，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性患者胃癌組織miR-95表達(dá)量高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性患者(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 不同臨床病理特征患者胃癌組織miR-95表達(dá)水平比較

3 討論

miRNA屬內(nèi)源性非編碼RNA分子，多由22個(gè)左右核苷酸組成，可與一個(gè)或多個(gè)mRNA靶向結(jié)合，阻斷蛋白編碼調(diào)節(jié)基因表達(dá)，與多種惡性腫瘤發(fā)生及發(fā)展密切相關(guān)[3]。

既往臨床研究發(fā)現(xiàn)，miRNA對(duì)靶基因轉(zhuǎn)錄后水平具有調(diào)節(jié)作用，進(jìn)而參與腫瘤發(fā)生、發(fā)展、抗輻射性及耐藥[4]。miR-95屬腫瘤細(xì)胞中常見(jiàn)miRNA，在結(jié)直腸癌、非小細(xì)胞肺癌、前列腺癌組織及細(xì)胞株中均呈高表達(dá)狀態(tài)，可一定程度影響患者化療敏感性及放療耐受性，抑制miR-95表達(dá)可有效阻礙癌細(xì)胞增殖。miR-95表達(dá)與多種癌細(xì)胞增殖存在密切聯(lián)系，可通過(guò)促進(jìn)DKK3使Wnt/β-catenin信號(hào)通路激活，進(jìn)而增強(qiáng)前列腺癌細(xì)胞增殖能力，同時(shí)可對(duì)蛋白p21產(chǎn)生一定調(diào)節(jié)作用，加速肝癌細(xì)胞增殖[5]。本研究為探討miR-95表達(dá)對(duì)胃癌患者病情進(jìn)展的影響，以qPCR法測(cè)定患者手術(shù)標(biāo)本中胃癌組織、癌旁組織miR-95表達(dá)情況，并進(jìn)行比較，結(jié)果顯示，胃癌組織miR-95表達(dá)量高于癌旁組織，腫瘤高、中分化患者胃癌組織miR-95表達(dá)量低于腫瘤低、未分化患者，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性患者胃癌組織miR-95表達(dá)量高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性患者(P<0.05)，不同TNM分期患者胃癌組織miR-95表達(dá)量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說(shuō)明與正常胃黏膜組織相比，胃癌組織miR-95表達(dá)水平較高，且miR-95在腫瘤低、未分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中表達(dá)增高。綜上可知，正常胃黏膜組織相比，胃癌組織miR-95表達(dá)水平較高，測(cè)定miR-95表達(dá)量可一定程度反映胃癌患者病情進(jìn)展情況。