龐美玲 周心意 陸祖軍

摘 要 利用選擇性培養(yǎng)基篩選獲得目標(biāo)菌株，并鑒定其分類屬性;采用單因素試驗設(shè)計，篩選最適產(chǎn)酶條件;再將該菌株作為飼料添加劑飼養(yǎng)雞群，探明其對雞飼料粗纖維降解效率及雞群體重的影響，旨在篩選黑葉猴（Trachypithecus francoisi）腸道高效纖維素降解菌，為人體腸道益生菌群或畜牧業(yè)飼料添加劑擴(kuò)大菌譜。結(jié)果：鑒定出黑葉猴腸道的纖維素降解菌株為芽孢桿菌屬的一種（Bacillus sp.），并命名為GXNQ-1;其最適產(chǎn)酶條件為：溫度40 ℃，pH值6，培養(yǎng)時間為24 h，底物濃度（CMC-Na）為0.94%，此時該菌株酶活力值達(dá)48 U;在40日齡前每隔10日給雞群灌服500 μL（OD540=0.86）的試驗菌液取得明顯的增重效果。

關(guān)鍵詞 黑葉猴;纖維素降解菌;酶學(xué)特征;粗纖維消化率;雞群體重

中圖分類號：S816.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2022.07.001

纖維素是地球上最豐富的可再生資源之一，但動物腸道內(nèi)很少有相應(yīng)的降解酶能將其降解為單體葡萄糖，只有少部分真菌和細(xì)菌能產(chǎn)生相應(yīng)降解酶將其降解利用[1]。

酶解和微生物降解使纖維素轉(zhuǎn)變?yōu)槠咸烟欠肿?，是纖維素開發(fā)利用的基礎(chǔ)和前提[1]。王安以纖維素復(fù)合酶作為青貯添加劑，提高了玉米秸稈飼用價值，為纖維素復(fù)合酶在飼料中合理利用提供依據(jù)[2]。施力光等揭示了纖維分解菌在反芻動物營養(yǎng)代謝中的重要作用[3]。劉幼強(qiáng)以甘蔗渣為唯一碳源，篩選出可高效分解甘蔗渣的復(fù)合菌群并應(yīng)用于固態(tài)發(fā)酵，實現(xiàn)了以甘蔗渣為原料生產(chǎn)燃料酒精的目標(biāo)[4]。李旺等在雞飼料中添加可產(chǎn)生纖維素降解酶的菌株，顯示其有助于粗纖維的消化、轉(zhuǎn)化[5]。

黑葉猴（Trachypithecus francoisi）屬于國家一級保護(hù)動物，主要分布于廣西、云南、貴州部分喀斯特地區(qū)，以葉食性為主[7]。根據(jù)適應(yīng)進(jìn)化學(xué)說，黑葉猴體內(nèi)（腸道）微生物應(yīng)該存在適應(yīng)其生存環(huán)境（食物）的相應(yīng)菌群，且有可能進(jìn)化成具有特異功能的菌群，如高效降解利用纖維素的菌株，但目前尚無相關(guān)研究報道。靈長類動物與人類親緣關(guān)系近，遺傳背景相似，挖掘并開發(fā)利用該猴腸道內(nèi)具有降解纖維素的微生物，是對人體腸道纖維素降解菌篩選、畜牧業(yè)飼料添加劑菌譜擴(kuò)大、珍稀瀕危動物保護(hù)與利用的一種有益嘗試。

1 ?材料與方法

1.1 ?試驗材料

1.1.1 ?菌株

2019年11月于廣西梧州黑葉猴保護(hù)基地隨機(jī)采集黑葉猴新鮮糞便。利用已滅菌采樣棒采集排放到地面上不足5 min的新鮮黑葉猴糞便內(nèi)里部分，并迅速放入已備好的滅菌采樣管中，放入實驗室-4 ℃冰箱內(nèi)儲藏，12 h內(nèi)分離純化目標(biāo)菌株。

1.1.2 ?培養(yǎng)基

1.1.2.1 ? ?富集培養(yǎng)基

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：蛋白胨8 g，牛肉膏4 g，可溶性淀粉1.6 g，NaCl 4 g，瓊脂16 g，蒸餾水800 mL，pH值為7。

1.1.2.2 ? ?分離篩選培養(yǎng)基

1）CMC-Na固體培養(yǎng)基：K2HPO4 0.25 g，MgSO4 0.125 g，瓊脂10 g，羧甲基纖維素鈉0.94 g，NH4NO3 0.3 g，剛果紅0.1 g，蒸餾水500 mL，pH值為7。

2）CMC-Na液體培養(yǎng)基：在CMC-Na固體培養(yǎng)基基礎(chǔ)上減除10 g瓊脂，其余同。

1.1.3 ?試劑

1 mol·L-1的鹽酸溶液（AR，上海尚寶生物科技有限公司，下同），1%氫氧化鈉溶液，DNS試劑，1 mg·mL-1葡萄糖溶液，1%羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）溶液，1 g·L-1剛果紅溶液，30%甘油溶液。

1.1.4 ?飼料

飼養(yǎng)雞的飼料購自南寧漓江源糧油飼料有限公司，生產(chǎn)廠家標(biāo)注的主要成分如表1所示;委托青島正信檢測公司對該飼料進(jìn)行粗纖維素含量測定，得到其粗纖維素含量為6.7%。

1.2 ?試驗方法

1.2.1 ?纖維素降解菌株的分離、篩選

1.2.1.1 ? ?糞便懸液和梯度稀釋液制備、涂布和富集

稱取相當(dāng)于1.0 g干燥糞便的新鮮糞便（120 ℃加熱至恒重時含水量為84.8%）樣品1.17 g溶于99 mL生理鹽水中，充分振蕩20 min，使糞便樣品中的細(xì)菌分散，制成糞便懸液。參照文獻(xiàn)[8]制成0、10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6不同稀釋度的糞便溶液。取各梯度稀釋菌懸液0.2 mL，用無菌涂布器均勻涂布牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板，36 ℃倒置培養(yǎng)48 h分離單菌落。每個梯度設(shè)置3個重復(fù)，共21個平板。

1.2.1.2 ? ?目標(biāo)菌株分離、培養(yǎng)和保存

將牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板形成的所有單菌落用牙簽點接于CMC-Na固體培養(yǎng)基平板上，設(shè)置3個重復(fù)。培養(yǎng)皿封口后37 ℃倒置培養(yǎng)96 h，將有透明圈的菌落同時分別移接2套CMC-Na固體培養(yǎng)基平板（網(wǎng)格化點接標(biāo)記），培養(yǎng)皿封口后再37 ℃倒置培養(yǎng)96 h。以每皿 1 mL剛果紅溶液（1 g·L-1）對其中1套CMC-Na固體培養(yǎng)基平板染色，20 min后，緩慢傾棄剛果紅溶液。從另一套CMC-Na固體培養(yǎng)基平板上選取剛果紅溶液染色后透明圈最大的菌落為目標(biāo)菌株。挑取目標(biāo)菌株于液體培養(yǎng)基內(nèi)37 ℃培養(yǎng)8 h，以30%甘油和菌液等體積混合并參照文獻(xiàn)[8]進(jìn)行菌種保藏。

1.2.2 ?目標(biāo)菌株的鑒定

在觀察菌落形態(tài)、顏色、質(zhì)地基礎(chǔ)上，以革蘭氏染色法初步確定菌株的微生物類別[8];以16S rDNA擴(kuò)增子測序方法進(jìn)行菌株的分子鑒定[9]。CTAB抽提法提取目標(biāo)菌種基因組后，以引物（7F：5′-CAGAGTTT GATCCTGGCT-3′;1540R：5′-AGGAGGTGATCCAG CCGCA-3′）PCR擴(kuò)增（退火溫度：55 ℃）及電泳檢定擴(kuò)增片段的單一性及長度（1 500 bp左右）。將PCR單一片段產(chǎn)物直接送上海生工公司測序。測序結(jié)果于NCBI網(wǎng)站（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/）上進(jìn)行BLASTN比對，同時利用軟件（MEGA7）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹，確定目標(biāo)菌株的分類屬性。3B36E9D2-FCB4-4A94-84CC-AB2374FBC5B7

1.2.3 ?胞外纖維素酶活性測定

參照文獻(xiàn)[10]進(jìn)行酶活性測定。酶活力單位（U）規(guī)定為每分鐘水解CMC-Na產(chǎn)生1 μg葡萄糖所需酶量。

1.2.3.1 ? ?溫度對酶活性的影響

將37 ℃培養(yǎng)24 h的目標(biāo)菌株菌液置于不同溫度中進(jìn)行培養(yǎng)，探究不同溫度對產(chǎn)生的胞外纖維素酶酶活性的影響[9]。具體為4 ℃、轉(zhuǎn)速6 000 r·min-1條件下離心3 min后，取0.5 mL上清液（粗酶液）與1.5 mL CMC-Na溶液混合（冰上），另取0.5 mL無菌水與1.5 mL CMC-Na溶液混合作為對照（冰上）。分別在20 ℃、30 ℃、40 ℃、50 ℃、60 ℃下水浴加熱30 min，隨后立即加1.5 mL DNS試劑（顯示劑），并在100 ℃下水浴加熱10 min，取出后立即冰上冷卻，用無菌蒸餾水定容至25 mL，測定OD540吸光值并記錄。

1.2.3.2 ? ?pH值對酶活性的影響

將37 ℃培養(yǎng)24 h的目標(biāo)菌株菌液置于不同pH的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，探究不同pH對產(chǎn)生的胞外纖維素酶酶活性的影響[11]。具體為用1 mol·L-1鹽酸溶液、1%氫氧化鈉溶液將CMC-Na溶液的pH值分別調(diào)至2、4、6、8、10、12、14。取各pH值的CMC-Na溶液1.5 mL與0.5 mL粗酶液（目標(biāo)菌液在4 ℃、轉(zhuǎn)速6 000 r·min-1條件下離心3 min后取上清液）混合（冰上），另取1.5 mL CMC-Na溶液與0.5 mL無菌水混合作為對照組（冰上）[9]。在最適溫度（通過1.2.3.1確定）下水浴加熱30 min，隨后立即加1.5 mL DNS試劑（顯示劑），并在100 ℃下水浴加熱10 min，取出后立即冷卻，用無菌蒸餾水定容至25 mL，測定OD540吸光值并記錄。

1.2.3.3 ? ?CMC-Na濃度對酶活性的影響

將CMC-Na作為唯一碳源制備成CMC-Na含量不同的液體培養(yǎng)基（CMC-Na含量不同，其余成分含量相同），CMC-Na含量分別是0.07%、0.13%、0.19%、0.25%、0.31%。分別加入1 mL的目標(biāo)菌液（OD540=0.86），在最適溫度（通過1.2.3.1確定）、最適pH值（通過1.2.3.2確定）下?lián)u床培養(yǎng)10 h，以粗酶液進(jìn)行CMC-Na糖化力測定，明確CMC-Na底物濃度對胞外纖維素酶酶活性的影響[13]。

1.2.3.4 ? ?目標(biāo)菌株培養(yǎng)時間對酶活性的影響

目標(biāo)菌株在最佳CMC-Na濃度（通過1.2.3.3確定）、最適溫度（通過1.2.3.1確定）、最適pH值（通過1.2.3.2確定）培養(yǎng)基中培養(yǎng)不同時間，探究目標(biāo)菌株培養(yǎng)時間對胞外纖維素酶酶活性的影響。將目標(biāo)菌株接種于培養(yǎng)基中，共2瓶，編號為1、2。搖床培養(yǎng)條件下（37 ℃，120 r·min-1），每隔12 h隨機(jī)取出1瓶，在超凈工作臺上取1 mL菌液于已滅菌的離心管中（取完菌液后立即將已接菌的培養(yǎng)基放回?fù)u床中繼續(xù)搖床培養(yǎng)），并測定胞外纖維素酶酶活性[14]。以培養(yǎng)時間（h）為橫坐標(biāo)，酶活力（U）為縱坐標(biāo)，確定菌株產(chǎn)出的胞外纖維素酶酶活性最高的培養(yǎng)時間。

1.2.4 ?市售肉雞飼料粗纖維制取

采用濾袋技術(shù)分離飼料中的粗纖維[12]。先將1 g肉雞飼料裝入濾袋（鹽城晨星環(huán)保科技有限公司生產(chǎn)的2號袋，規(guī)格180 mm×810 mm）并進(jìn)行酸堿消煮（先加入150 mol·L-1硫酸并煮沸20 min，脫水并用蒸餾水處理至中性，再脫水3 min;后加入150 mol·L-1 KOH并煮沸20 min，使用相同方法恢復(fù)中性并脫水），再用丙酮脫脂，120 ℃烘干至恒重、稱量。

1.2.5 ?應(yīng)用試驗

試驗選用20日齡的黃羽肉雞，隨機(jī)分為4組，即1個對照組和3個處理組，每組10只。不同處理組每隔10日灌服不同劑量（灌服量分別為300、400、500 μL·只-1）的目標(biāo)菌液（OD540=0.86），試驗周期為40 d;規(guī)定前20 d為前期，后20 d為后期。每飼養(yǎng)20 d，以全收糞法收集雞糞，測定各組雞糞中粗纖維含量，同時檢定飼養(yǎng)時段各組雞群的存活、體重增長情況（體重取每組雞群平均值）。通過比較灌服目標(biāo)菌液前后雞糞中纖維素含量差別，確定前、后期最適灌服菌液劑量[12]。

1.3 ?數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2017軟件對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示;P值<0.05表示差異顯著，P值<0.01表示差異極顯著。

粗纖維消化率參照文獻(xiàn)[15]計算。

粗纖維消化率=（采食量×飼料粗纖維含量-糞重×糞樣粗纖維含量）/（采食量×飼料粗纖維含量）×100%。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?目標(biāo)菌株的分離與鑒定

2.1.1 目標(biāo)菌株的篩選與分離

在CMC-Na固體培養(yǎng)基上篩選到呈最大透明圈的菌落1個，其長勢較好，正面為淡黃色，中心隆起，邊緣整齊，命名為GXNQ-1;經(jīng)革蘭氏染色后，呈紫色，可判定為革蘭氏陽性細(xì)菌。

2.1.2 ?GXNQ-1的16S rDNA擴(kuò)增子測序鑒定

2.1.2.1 ? ?GXNQ-1的16S rDNA的PCR擴(kuò)增

以提取的GXNQ-1基因組DNA為模板，利用細(xì)菌通用引物（7F、1540R）進(jìn)行PCR擴(kuò)增，取5 μL PCR產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果見圖1，單一擴(kuò)增子長度約為1 500 bp的核苷酸片段，與預(yù)期相符。

2.1.2.2 ? ?GXNQ-1的16S rDNA擴(kuò)增子序列及系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹3B36E9D2-FCB4-4A94-84CC-AB2374FBC5B7

將GXNQ-1的16S rDNA擴(kuò)增片段送上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司測序，顯示擴(kuò)增子序列長度為1 490 bp（核苷酸序列登錄號為SUB10687086 GXNQ-1OL545364）。將該核苷酸序列與NCBI網(wǎng)站上的GenBank基因序列進(jìn)行在線BLAST，發(fā)現(xiàn)其與Bacillus sp.同源性達(dá)100%。同時利用軟件（MEGA7）對GXNQ-1的16S rDNA擴(kuò)增子序列和相近物種者在線構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹，結(jié)果如圖2。結(jié)合該菌的形態(tài)特征與培養(yǎng)特性，鑒定該菌為芽孢桿菌屬的一種（Bacillus sp.）。

2.2 ?胞外纖維素酶酶活性測定結(jié)果

GXNQ-1胞外纖維素酶酶活性測定所用曲線的回歸方程為y=0.987 5x-0.015 1（R2=0.999 1），說明曲線擬合程度較好，具有可信度。

2.2.1 ?GXNQ-1胞外纖維素酶酶活性最適溫度

由圖3可知，GXNQ-1菌所產(chǎn)的胞外纖維素酶酶活性最適反應(yīng)溫度為40 ℃，此時酶活力高達(dá)97.42 U;在20～40 ℃時，其酶活力隨溫度升高而升高，但高于40 ℃時，酶活力隨溫度升高而降低。

2.2.2 ?GXNQ-1胞外纖維素酶酶活性最適pH值

由圖4可知，GXNQ-1胞外纖維素酶酶活性最適pH值為6，此時酶活力高達(dá)184.51 U;在pH值2～6時，其酶活力隨pH升高而升高，但pH值超過6以后，其酶活力隨pH升高而降低。

2.2.3 ?CMC-Na濃度對GXNQ-1胞外纖維素酶酶活性的影響

從圖5可以看出，GXNQ-1菌在CMC-Na質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.19%的培養(yǎng)基中產(chǎn)生的胞外纖維素酶酶活力最高，達(dá)46.79 U。

2.2.4 ?培養(yǎng)時間對GXNQ-1菌株胞外纖維素酶酶活性的影響

由圖6可知，培養(yǎng)時間為24 h時的GXNQ-1菌所產(chǎn)胞外纖維素酶酶活力最高，達(dá)48.81 U;培養(yǎng)時間超過24 h后，其所產(chǎn)胞外纖維素酶酶活力下降。

2.3 ?雞群灌服GXNQ-1菌液對其所食用飼料粗纖維降解效果的影響

2.3.1 飼養(yǎng)前期雞群灌服GXNQ-1菌液對粗纖維素降

解效果的影響

飼養(yǎng)前期雛雞群灌服GXNQ-1菌液對粗纖維素降解效果的影響如表2所示。灌服GXNQ-1菌液的3個處理組（灌服量分別為300、400、500 μL·只-1）對粗纖維的消化率都顯著高于對照組（提高10%以上）（P<0.05），但是3個處理組之間差異不顯著（P>0.05）。

2.3.2 ?飼養(yǎng)后期雞群灌服GXNQ-1菌液對粗纖維降解的影響

飼養(yǎng)后期雞群灌服GXNQ-1菌液對粗纖維降解的影響如表3所示。灌服GXNQ-1菌液的3個處理組對粗纖維的消化率與對照組之間差異不顯著（P>0.05），表明飼養(yǎng)后期雞群灌服GXNQ-1菌液對粗纖維降解無顯著影響。

2.3.3 ?灌服GXNQ-1菌液對雞群體重的影響

試驗雞群只有對照組中有1只雞于飼養(yǎng)第10日死亡。飼養(yǎng)至20 d、40 d時（40日齡、60日齡），記錄雞群體重變化，結(jié)果如圖7～圖9所示。

結(jié)果表明，當(dāng)每只雞灌服GXNQ-1菌液為300 μL、400 μL時，無論是飼養(yǎng)前期還是后期，處理組和對照組無顯著差異;當(dāng)灌服量為500 μL·只-1時，飼養(yǎng)40 d（60日齡）的雞群體重較對照增加了33.4%。

3 ?小結(jié)與討論

3.1 ?纖維素降解菌的篩選

纖維素降解菌的篩選方法主要有纖維素剛果紅培養(yǎng)基法、纖維素選擇培養(yǎng)基法、半固體纖維素天青試管法、濾紙底物法等，其中纖維素剛果紅培養(yǎng)基法應(yīng)用得較多[5]。纖維素降解菌在纖維素剛果紅培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時間后可產(chǎn)生透明圈，以透明圈直徑大小判定菌株纖維素降解能力的強(qiáng)弱。透明圈出現(xiàn)的主要原因在于纖維素降解菌將菌株周圍的纖維素分解成葡萄糖，葡萄糖不與剛果紅形成紅色復(fù)合物，但纖維素與剛果紅可形成紅色復(fù)合物，故出現(xiàn)以纖維素降解菌為中心的透明圈。由于纖維素剛果紅培養(yǎng)基法呈現(xiàn)的結(jié)果明顯，且易操作，目前普遍認(rèn)為這是初步篩選纖維素分解菌的較好方法[5]?；诖?，本試驗采用纖維素剛果紅培養(yǎng)基法檢定黑葉猴腸道高效降解纖維素的GXNQ-1菌株。

經(jīng)過菌株形態(tài)判定、革蘭氏染色鑒定，初步鑒定GXNQ-1菌為革蘭氏陽性細(xì)菌。通過目前常用的16S rDNA擴(kuò)增子測序后進(jìn)行序列同源性比對、構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，從而確定細(xì)菌種屬。周新萍等從朽木中篩選、分離到1株高產(chǎn)纖維素酶的NC-7菌株，經(jīng)形態(tài)觀察和生理生化試驗，再以16S rDNA擴(kuò)增子測序后序列同源性比對，確定該菌株為放線菌鏈霉菌屬生二素鏈霉菌（Streptomyces ambofaciens）[16]。本試驗采用16S rDNA擴(kuò)增子測序方法鑒定出黑葉猴腸道的纖維素降解菌株為芽孢桿菌屬的一種（Bacillus sp.），并命名為GXNQ-1。

3.2 ?纖維素降解菌GXNQ-1的產(chǎn)酶條件優(yōu)化

菌株不同，其最適產(chǎn)酶條件也有所差異。如何優(yōu)化產(chǎn)酶條件，是菌株應(yīng)用于生產(chǎn)實踐的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。錢文佳等優(yōu)化了纖維素降解菌的產(chǎn)酶條件，進(jìn)一步提高了該菌株纖維素酶的活性[17]。GXNQ-1分解利用纖維素的最佳條件為：溫度40 ℃，pH值為6，培養(yǎng)時間24 h，培養(yǎng)基中的CMC-Na含量為0.19%，此條件下的酶活性達(dá)48 U。此條件溫和，生產(chǎn)實踐中易實現(xiàn)，說明本研究篩選到的菌株具有一定的應(yīng)用價值。

3.3 ?纖維素降解菌GXNQ-1的應(yīng)用試驗

李旺等在雞飼料中添加可產(chǎn)生纖維素降解酶的菌株，顯示其有助于粗纖維的消化、轉(zhuǎn)化[5]。孫元烽等從不同畜糞及三種商品微生物堆肥劑中篩選高效纖維素降解菌并在羊糞堆肥中初步應(yīng)用，發(fā)現(xiàn)該菌能夠有效提升纖維素降解效果[6]。王安等在蛋雞日糧中加入纖維素酶，結(jié)果較大地提高了日糧纖維素消化率，說明雞日糧中添加纖維素酶可有效提升纖維素降解效果，從而提高飼料粗纖維的消化率[3]。3B36E9D2-FCB4-4A94-84CC-AB2374FBC5B7

有學(xué)者以20日齡雛雞為試驗對象，發(fā)現(xiàn)其肝臟和消化道遠(yuǎn)未發(fā)育完全，腸道內(nèi)微生物形成的微生態(tài)系統(tǒng)未達(dá)到穩(wěn)定階段[18]。房興堂等通過對1～7周齡肉雞的消化器官重量及消化道各部分長度進(jìn)行測量，結(jié)果表明消化器官的變化隨體重同步變化[19]。程郁昕等以AA肉雞商品為試驗材料，測量不同肉雞的消化道各部分長度，得出消化道的生長勢在28日齡以前最強(qiáng)[20]。

將GXNQ-1菌液作為飼料添加劑飼養(yǎng)雞群的試驗表明，飼養(yǎng)前期（前20 d，日齡20～40 d）灌服試驗菌液使雞群對纖維素的分解效率顯著增加，但不同的灌服劑量（300 μL·只-1、 400 μL·只-1、500 μL·只-1）對纖維素的消化率并無顯著差異;飼養(yǎng)后期（后20 d，日齡40～60 d），灌服GXNQ-1菌液對雞的粗纖維素消化率無顯著影響，僅有灌服菌液（500 μL·只-1）飼養(yǎng)40 d（日齡60 d）的雞群體重較對照增加了33.4%;這顯然是菌液改善了飼養(yǎng)前期雛雞的營養(yǎng)供給（纖維素降解效率提高15.48%左右）所致，因為4周齡前是雛雞消化器官（肝臟和消化道等）生長旺盛階段[19]。

本試驗通過給雞群灌服GXNQ-1菌液，能較快地在飼養(yǎng)前期的雞群腸道內(nèi)建立以GXNQ-1為優(yōu)勢菌群的新微生態(tài)平衡，提高纖維素的降解效率，改善試驗條件下的養(yǎng)分供給，提高試驗組雞群的代謝效率，使其體重快速增加。飼養(yǎng)后期的雞群肝臟和消化道發(fā)育較完全，腸道內(nèi)微生物形成的微生態(tài)系統(tǒng)接近穩(wěn)定狀態(tài)，使GXNQ-1難以成為優(yōu)勢菌群從而提高飼料中粗纖維的降解效率，使試驗組雞群體重沒法快速增加，但由于有飼養(yǎng)前期的代謝效率優(yōu)勢作基礎(chǔ)，處理組雞群在試驗時間結(jié)束時仍有體重較對照組增加33.4%的明顯效果。因此，以GXNQ-1菌株作為飼料添加劑飼養(yǎng)肉雞時，40日齡前每隔10日灌服500 μL（OD540=0.86）的目標(biāo)菌液將取得明顯的增重效果。

參考文獻(xiàn)：

[1] ? 李瓊芳，劉明學(xué)，徐志鵬.纖維素分解菌的分離及產(chǎn)酶條件研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008（18）：7518-7520.

[2] ? 王安.纖維素復(fù)合酶在飼料中的作用及其應(yīng)用的研究[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，1998（3）：29-44.

[3] ? 施力光，荀文娟，岳文斌.纖維素分解菌在反芻動物營養(yǎng)代謝中的研究進(jìn)展[J].飼料廣角，2008（21）：23-24，27.

[4] ? 劉幼強(qiáng).降解纖維素復(fù)合菌群的研究[D].廈門：廈門大學(xué)，2009.

[5] ? 李旺，孫二剛，劉永磊，等.添加纖維素酶產(chǎn)生菌對雞飼料養(yǎng)分消化率的影響[J].飼料博覽，2013（5）：1-4.

[6] ? 孫元烽，鐘杰，鄭娟，等.高效纖維素降解菌篩選鑒定及在羊糞堆肥中的初步應(yīng)用[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2019（24）：57-61，174.

[7] ? 劉秀菊，吳茜，黃中豪，等.弄崗黑葉猴旱季食物營養(yǎng)組分及其對食物選擇的影響[J].獸類學(xué)報，2016，36（2）：241-247.

[8] ? 張龍翔.生化實驗方法和技術(shù)（第2版）[M].北京：高等教育出版社，1997.

[9] ? 邢力，王經(jīng)偉，沙俊男.一株纖維素降解真菌的篩選與鑒定[J].飼料研究，2019，42（9）：83-86.

[10] 李蘭曉，杜金華，李軍訓(xùn)，等.CMC糖化力法測定纖維素酶活性條件的研究[J].飼料工業(yè)，2006（24）：49-52.

[11] 李蘭曉，杜金華，李軍訓(xùn)，等.CMC糖化力法測定纖維素酶活性條件的研究[J].飼料工業(yè)，2006（24）：49-52.

[12] 劉勝男，孫燕.濾袋法測定飼料粗纖維的操作流程及注意要點[J].飼料與畜牧，2017（15）：55-56.

[13] 魏微，劉兆普，王琳，等.青霉菌B01產(chǎn)菊粉酶特性的研究及菊粉酶系分析[J].食品科學(xué)，2009，30（5）：179-183.

[14] 何仁春，熊建明，楊家晃，等.粗纖維及纖維素酶對1～2月齡肉兔能量消化率和生長性能的影響[J].糧食與飼料工業(yè)，2011（12）：58-61.

[15] 劉記強(qiáng)，曹向陽，亢娟娟，等.全收糞和指示劑法測定固始雞粗纖維消化率的差異性比較[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，37（6）：173-175.

[16] 周新萍，徐爾尼，汪金萍.高產(chǎn)纖維素酶生二素鏈霉菌的鑒定與選育研究[J].中國釀造，2007 （168）：20-24.

[17] 錢文佳，闞光鋒，徐仲.產(chǎn)低溫纖維素酶南極細(xì)菌的篩選、生長特性及酶學(xué)性質(zhì)的初步研究[J].食品科技，2010，35（1）：15-18.

[18] 吳敏峰.產(chǎn)纖維素酶兼性厭氧芽孢桿菌的分離篩選及在動物生產(chǎn)上的初步應(yīng)用[D].雅安：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007.

[19] 房興堂，王景明，雷叢，等.肉雞消化器官生長規(guī)律的研究[J].四川動物，1999（1）：37-39.

[20] 程郁昕，馬昭文，陳浩，等.AA肉雞生長期消化道各部分長度變化規(guī)律的探討[J].當(dāng)代畜牧，2006（5）：3-4.

（責(zé)任編輯：易 ?婧）

收稿日期：2021-12-15

基金項目：2020年廣西壯族自治區(qū)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目“黑葉猴高效纖維降解菌的飼料降解效率研究”（202010602055）。

作者簡介：龐美玲（1997—），女，廣西玉林人，廣西大學(xué)林學(xué)專業(yè)2021級在讀碩士研究生，主要研究方向為森林保護(hù)學(xué)。E-mail： 2919341698@qq.com。

*為通信作者，E-mail： luzujun2002@aliyun.com。3B36E9D2-FCB4-4A94-84CC-AB2374FBC5B7