林偉雄,鄧李紅,李美洲,陳仕妍,鐘文峰,黃貴發(fā),程學仁

(1.廣東一方制藥有限公司,廣東 佛山 528244;2.廣東省中藥配方顆粒企業(yè)重點實驗室,廣東 佛山 528244;3.中國中藥控股有限公司,廣東 佛山 528303)

女貞子為木犀科植物女貞LigustrumlucidumAit.的干燥成熟果實,具有滋補肝腎,明目烏發(fā)的功效,用于眩暈耳鳴,腰膝酸軟,須發(fā)早白等肝腎陰虛證[1]。2020年版《中國藥典》收錄了女貞子和酒女貞子2種飲片,女貞子經(jīng)酒蒸或酒燉為酒女貞子后,“形如女貞子,表面黑褐色或灰黑色,常附有白色粉霜,微有酒香氣”[1]。中醫(yī)理論認為,女貞子生品性涼,以清肝明目、滋陰潤燥為主,多用于肝熱目眩、陰虛腸燥便秘等癥;而酒能活血通絡、祛風散寒,故炮制后的酒女貞子寒涼之性減弱,滋補肝腎作用增強,臨床更多用于肝腎陰虛等證,現(xiàn)代臨床亦可用于治療慢性肝炎、高血脂等癥[2-4]。

現(xiàn)代研究表明,女貞子主要包含環(huán)烯醚萜苷類、苯乙醇苷類、黃酮類、萜類、揮發(fā)油、脂肪酸等化學成分[5-6],其中最具活性和藥用價值的屬環(huán)烯醚萜苷類化合物,含量較高的有特女貞苷、女貞苷、女貞苷G13和橄欖苦苷等裂環(huán)環(huán)烯醚萜苷類,這類化合物具有抗氧化、增強免疫、抑制腫瘤、抗血脂等作用[7-8];另外苯乙醇類中的紅景天苷和酪醇等具有抗菌、抗炎、抗肝損傷等多種生物活性[9-10]。女貞子經(jīng)過酒蒸或酒燉等不同炮制方法以及在不同的炮制程度下,其活性成分會發(fā)生不同程度的分解與轉化,與炮制品酒女貞子藥性與藥效的改變密切相關,進而影響其臨床療效。紀鑫等[11]測定了女貞子中非三萜類成分,與同批次女貞子相比,酒女貞子中5-羥甲基糠醛和紅景天苷的含量大幅升高,而女貞子酒蒸后環(huán)烯醚萜苷類成分的含量普遍降低,因其分子結構中的環(huán)烯醚萜部分大多通過其裂環(huán)上的酯鍵與紅景天苷或酪醇或羥基酪醇等苯乙醇類化合物相連,在高溫高濕環(huán)境下易發(fā)生裂解[12-14]。在2020年版《中國藥典》中僅規(guī)定了女貞子含量項下特女貞苷不得少于0.7%,酒女貞子中紅景天苷含量不得少于0.2%的單指標含量限度要求,缺少女貞子藥材及其炮制品酒女貞子的整體質量控制方法,因此有必要對酒蒸或酒燉不同炮制方法及不同炮制程度下的酒女貞子進行化學成分種類及含量變化的研究[1]。本研究建立女貞子炮制前后UPLC特征圖譜,同時測定紅景天苷、特女貞苷及女貞苷G13的含量,并運用聚類分析、主成分分析(PCA)與正交偏最小二乘法-判別分析(OPLS-DA)等多模式識別方法對UPLC特征圖譜中多指標變量進行統(tǒng)計分析,可有效監(jiān)控女貞子不同炮制方法及不同炮制程度下的主要共性和差異性化學成分,為其藥效物質基礎及質量控制研究奠定基礎。

1 材料

1.1 儀器

Waters H-Class型超高效液相色譜儀(美國Waters公司);ME204E型萬分之一天平、XP26百萬分之一天平(瑞士METTLER TOLEDO公司);KQ-500DE型數(shù)控超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);111B型二兩裝高速中藥粉碎機(浙江瑞安市永歷制藥機械有限公司);MiliQ Direct 8型超純水機(德國Merck公司)。

1.2 藥品與試劑

5-羥甲基糠醛對照品(純度≥98%,批號：wkq20041311)購自四川省維克奇生物科技有限公司);紅景天苷(純度99.4%,批號：110818-201507)、松果菊苷(純度91.8%,批號：111670-201907)、特女貞苷(純度95.0%,批號：111926-201906)對照品均購自中國食品藥品檢定研究院;女貞苷G13對照品(純度95.0%,批號：8857)購自上海詩丹德標準技術服務有限公司。乙腈為色譜級,其余試劑為分析純,水為超純水。

11批女貞子藥材(編號S1～S11)經(jīng)廣東一方制藥有限公司魏梅主任藥師鑒定為木犀科植物女貞LigustrumlucidumAit.的干燥成熟果實,來源信息詳見表1。

表1 11批女貞子來源信息Table 1 Source information of 11 batches of Ligustri Lucidi Fructus

2 方法與結果

2.1 酒女貞子飲片炮制

取女貞子藥材,除去雜質,均分3份,1份壓破,得女貞子壓破飲片,另2份為女貞子不壓破飲片;取女貞子飲片置于容器中,用相當于黃酒質量1倍的飲用水稀釋黃酒,每100 kg女貞子飲片用黃酒20 kg,悶潤2～4 h后,取出,女貞子壓破飲片酒蒸8.0 h,另2份女貞子不壓破飲片分別酒蒸和酒燉8.0 h,每隔0.5 h取樣，于烘箱中烘干,即得不同炮制方式和不同炮制時間下的酒女貞子飲片。

2.2 特征圖譜的建立

2.2.1 色譜條件 色譜柱:ACQUITY UPLC BEH Shield RP18柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm);流動相A:乙腈,流動相B:水,梯度洗脫(0～5 min,2%～10%A;5～9 min,10%～18%A;9～11 min,18%～24%A;11～24 min,24%～28%A;24～25 min,28%～2%A);檢測波長:0～3 min為284 nm,3～25 min為224 nm;流速:0.3 mL·min-1;柱溫:30 ℃;進樣量:1 μL。

2.2.2 對照品溶液的制備 取5-羥甲基糠醛、紅景天苷、松果菊苷、特女貞苷、女貞苷G13對照品適量,精密稱定,加甲醇制成含量均為0.1 mg·mL-1的混合溶液,作為混合對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 取樣品粉末(過3號篩)約0.3 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入70%甲醇25 mL,稱定質量,超聲(功率:500 W,頻率:40 kHz)處理60 min,放冷,再稱定質量,以70%甲醇補足減失質量,搖勻,采用0.22 μm濾膜濾過,取續(xù)濾液,即得。

2.2.4 精密度試驗 精密稱取酒女貞子樣品,按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液,按“2.2.1”項下色譜條件重復進樣6次,記錄色譜圖。以7號特女貞苷色譜峰為參照峰(S),計算各特征峰相對保留時間和相對峰面積RSD分別為0.01%～0.09%和0.10%～0.78%,表明儀器精密度良好。

2.2.5 重復性試驗 精密稱取酒女貞子樣品6份,按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液,按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定,記錄色譜圖。以7號特女貞苷色譜峰為參照峰(S),計算各特征峰相對保留時間和相對峰面積RSD分別為0.01%～0.23%和0.19%～1.35%,表明該方法重復性良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗 精密稱取酒女貞子樣品,按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液,分別于室溫放置0、2、4、8、12、24 h時,按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定,記錄色譜圖。以7號特女貞苷色譜峰為參照峰(S),計算各特征峰相對保留時間和相對峰面積RSD分別為0.01%～0.34%和0.31%～2.96%,表明供試品溶液在室溫下24 h內穩(wěn)定。

2.2.7 女貞子UPLC特征圖譜的建立 按“2.2.3”項下方法分別制備11批女貞子供試品溶液,按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定,記錄色譜圖。采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)(2012版)》對女貞子色譜圖進行匹配,建立女貞子的特征圖譜。以S1圖譜作為參照,設置時間窗寬度為0.1 min,通過多點校正、全譜峰匹配生成11批女貞子的共有特征圖譜,同時采用中位數(shù)法生成對照特征圖譜。11批女貞子共有特征圖譜中共標定了10個共有峰,女貞子共有特征圖譜及對照圖譜(R)詳見圖1。計算11批次女貞子UPLC特征圖譜及生成的共有對照特征圖譜的相似度,相似度均大于0.90,表明女貞子不同批次樣品間質量一致性較好。

圖1 女貞子的UPLC特征圖譜及對照圖譜(R)Fig.1 UPLC characteristic chromatogram and reference characteristic chromatogram (R)of Ligustri Lucidi Fructus

2.2.8 酒女貞子炮制過程的UPLC特征圖譜評價 按“2.2.3”項下方法分別制備不同炮制工藝下的酒女貞子供試品溶液,按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定,記錄色譜圖。采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)(2012版)》對飲片壓破后酒蒸(編號Y1～Y16)、飲片不壓破酒蒸(編號Z1～Z16)及飲片不壓破酒燉(編號D1～D16)8.0 h,每隔0.5 h取樣的酒女貞子樣品進行特征圖譜炮制過程分析。不同炮制時間下飲片壓破后酒蒸、飲片不壓破酒蒸及飲片不壓破酒燉的特征圖譜如圖2～4。通過與對照品比對(圖5),確認3號峰為紅景天苷,4號峰為松果菊苷,7號峰為特女貞苷,9號峰為女貞苷G13,11號峰為5-羥甲基糠醛。

圖5 混合對照品色譜圖Fig.5 Chromatogram of mixed reference substances

由圖2～4可知，隨著炮制時間的延長,3號峰的峰面積呈較明顯的上升趨勢,10號峰則呈較明顯的下降趨勢,其余各特征峰的峰面積整體趨于穩(wěn)定；另外不同炮制時間下可新增1～4個特征峰,新增峰快慢順序為11號峰>13號峰>12號峰>14號峰;飲片壓破后酒蒸1.5 h(即Y3)、飲片不壓破酒蒸2.5 h(即Z5)、飲片不壓破酒燉8.0 h(即D16)即完成4個特征峰的新增,此時炮制的酒女貞子樣品均已符合《中國藥典》中“形如女貞子,表面黑褐色或灰黑色,常附有白色粉霜,微有酒香氣”[1]的性狀要求,表明新增4個特征峰可作為不同炮制方式下酒女貞子的炮制終點判斷。飲片壓破后酒蒸、飲片不壓破酒蒸樣品在蒸制約6 h后易出現(xiàn)“傷水”狀態(tài),不建議長時間酒蒸。隨著炮制時間的延長,酒女貞子顏色逐漸變深后表面呈黑褐色,推測炮制后女貞子環(huán)烯醚萜類及苯乙醇苷類等主要活性成分發(fā)生了不同程度的分解與轉化,且不同炮制方式及不同炮制時間下的分解與轉化程度不同,高濕高熱條件下的酒蒸方式會加快女貞子環(huán)烯醚萜類成分裂環(huán)上的酯鍵斷裂生成紅景天苷等苯乙醇苷類結構單元,酒燉在隔絕水蒸氣的條件下化學成分的分解與轉化則較緩慢[14-15]。

圖2 女貞子壓破后酒蒸炮制飲片的UPLC特征圖譜Fig.2 UPLC characteristic chromatogram of Ligustri Lucidi Fructust with processing procedure of wine-steaming after crushing

圖3 女貞子不壓破酒蒸炮制飲片的UPLC特征圖譜Fig.3 UPLC characteristic chromatogram of Ligustri Lucidi Fructust with processing procedure of wine-steaming without crushing

圖4 女貞子不壓破酒燉炮制飲片的UPLC特征圖譜Fig.4 UPLC characteristic chromatogram of Ligustri Lucidi Fructust with processing procedure of wine-stewing without crushing

2.3 化學模式識別分析

2.3.1 聚類分析 聚類分析是一種無監(jiān)督模式識別方法,將酒女貞子炮制過程中各個時間點樣品的單位峰面積(缺峰的記為0)輸入至SIMCA14.0軟件中進行聚類分析,得圖6。

圖6 酒女貞子不同炮制過程樣品聚類分析樹狀圖Fig.6 Dendrogram of hierarchical cluster analysis of wine-processed Ligustri Lucidi Fructust with different processing procedure

圖6顯示,聚類分析將酒女貞子炮制過程中的樣品分成了2大類,其中女貞子壓破蒸制3.5～8.0 h和女貞子不壓破蒸制8.0 h歸為第Ⅰ類,其余女貞子壓破酒蒸和女貞子不壓破酒蒸以及酒燉樣品歸為第Ⅱ類;在第Ⅱ類下又可分為3小類,女貞子壓破蒸制0.5～3.0 h歸為第Ⅱa類,女貞子不壓破酒蒸0.5～2.0 h和女貞子不壓破酒燉0.5～4.0 h歸為第Ⅱb類,女貞子不壓破酒蒸2.5～7.5 h和女貞子不壓破酒燉4.5～8.0 h歸為第Ⅱc類。從歸類結果可知女貞子飲片壓破后蒸制對化學成分影響較大,即直接暴露在高濕高熱條件下會加快女貞子環(huán)烯醚萜類及苯乙醇苷類等化學成分的分解與轉化[12-13],且隨著炮制時間的延長,壓破酒蒸、不壓破酒蒸和不壓破酒燉的樣品都會發(fā)生部分交叉,即在達到一定炮制時間點時,無論酒蒸或酒燉均可炮制出相似度高的酒女貞子樣品,與2020年版《中國藥典》酒女貞子炮制中“酒蒸或酒燉”一致,同時可將新增4個特征峰作為不同炮制方式下酒女貞子的炮制終點的判斷。

2.3.2 PCA與OPLS-DA分析 在聚類分析的基礎上,進一步采用PCA對酒女貞子不同炮制過程樣品進行比較,通過數(shù)學降維的原理,從酒女貞子不同炮制過程樣品原數(shù)據(jù)中提取幾個具代表的綜合性指標來代替多個原始變量。PCA分析結果中提取到3個特征值>1的主成分(PC),可用于反映酒女貞子不同炮制過程樣品UPLC特征圖譜93.91%以上的信息,其中PC1貢獻率為58.8%,貢獻率最大,PC2貢獻率為22.7%。由前2個PC建立坐標系,得到酒女貞子不同炮制過程樣品的PCA得分圖(圖7)。

圖7 酒女貞子不同炮制過程樣品的PCA得分圖Fig.7 PCA score scatter plot of wine-processed Ligustri Lucidi Fructust with different processing procedures

由圖7可見,女貞子壓破酒蒸的樣品能夠較集中地聚集在一起,與不壓破酒蒸或酒燉的樣品有較明顯的距離,而不壓破酒蒸或酒燉的樣品則交叉在一起,區(qū)分不明顯。推測形成這種距離的主要原因為女貞子壓破種皮后,直接暴露在高濕高熱條件下,加快了環(huán)烯醚萜類及苯乙醇苷類等化學成分分解與轉化的速度和程度。

圖8 酒女貞子不同炮制過程樣品的OPLS-DA得分圖Fig.8 OPLS-DA score plot of wine-processed Ligustri Lucidi Fructust with different processing procedures

以模型變量投影(VIP)值為指標對引起酒女貞子不同炮制過程樣品間差異的成分進行分析,篩選貢獻較大的5個變量(以VIP值>1為標準),分別為10號峰(VIP=1.183)、1號峰(VIP=1.126)、9號女貞苷G13峰(VIP=1.064)、7號特女貞苷峰(VIP=1.059)和5號峰(VIP=1.047),提示上述5個成分是引起酒女貞子不同炮制過程樣品間成分差異的主要標志性成分,其余峰VIP值<1,對樣品的區(qū)分影響較小。詳見圖9。

圖9 酒女貞子不同炮制過程樣品14個共有峰的VIP值Fig.9 VIP values of 14 common peaks of wine-processed Ligustri Lucidi Fructust with different processing procedures

2.4 含量測定

2.4.1 色譜條件 同“2.2.1”項下。

2.4.2 對照品溶液的制備 分別取紅景天苷、特女貞苷、女貞苷G13對照品適量,精密稱定,分別加甲醇制成質量濃度為200 μg·mL-1的紅景天苷對照品溶液,200 μg·mL-1的特女貞苷對照品溶液,200 μg·mL-1的女貞苷G13對照品溶液。

2.4.3 供試品溶液的制備 同“2.2.3”項。

2.4.4 專屬性考察 取上述供試品溶液、陰性對照溶液(70%甲醇)和“2.4.2”項下的對照品溶液各適量,按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定,記錄色譜圖。結果見圖10,女貞子供試品及對照品色譜圖的基線均平穩(wěn),色譜峰分離度、對稱性良好,供試品中各色譜峰與對照品各對應色譜峰的保留時間基本相同,且陰性對照無干擾。

圖10 女貞子專屬性考察的UPLC色譜圖Fig.10 UPLC characteristic chromatogram of the exclusive investigation of Ligustri Lucidi Fructust

2.4.5 線性關系考察 分別精密稱取紅景天苷,特女貞苷,女貞苷G13對照品適量,分別加甲醇制成質量濃度為301.18、120.47、60.24、30.22、12.13 μg·mL-1的紅景天苷,247.76、100.13、49.59、24.70、9.88 μg·mL-1的特女貞苷,271.13、101.08、59.28、27.17、10.83 μg·mL-1的女貞苷G13系列對照品溶液,按“2.2.1”項下色譜條件進樣分析。以進樣質量濃度(X，μg·mL-1)為橫坐標,峰面積(Y)為縱坐標進行線性回歸,得回歸方程,結果見表2。

表2 3個成分的線性回歸方程與線性范圍Table 2 Linear regression equations with linear ranges for the three components

2.4.6 精密度試驗 精密稱取酒女貞子樣品,按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液,按“2.2.1”項下色譜條件重復進樣6次,記錄峰面積。紅景天苷、特女貞苷、女貞苷G13峰面積的RSD分別為0.60%、0.30%、0.23%(n=6),表明儀器精密度良好。

2.4.7 重復性試驗 精密稱取酒女貞子樣品6份,按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液,按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定,記錄峰面積并按外標法計算樣品中各待測成分的含量。紅景天苷、特女貞苷、女貞苷G13含量的RSD分別為0.62%、0.73%、0.76%(n=6),表明該方法重復性良好。

2.4.8 穩(wěn)定性試驗 精密稱取酒女貞子樣品,按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液,分別于室溫放置0、2、4、8、12、24 h,按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定,記錄峰面積。紅景天苷、特女貞苷、女貞苷G13峰面積的RSD分別為4.84%、2.94%、2.43%(n=6),表明供試品溶液在24 h內穩(wěn)定。

2.4.9 加樣回收率試驗 精密稱取含量已知的酒女貞子樣品0.15 g,置具塞錐形瓶中,按樣品中紅景天苷、特女貞苷、女貞苷G13含量的50%、100%和150%分別加入相應的對照品,每個指標成分設計3組實驗,每組平行3份。按“2.2.3”項下方法制備供試溶液,在“2.2.1”項色譜條件下進行測定,計算加樣回收率,結果見表3。

表3 3個成分的加樣回收率試驗結果(n=9)Table 3 Results of additional sample recovery test for three components (n=9)

2.4.10 樣品測定 取不同炮制工藝下酒女貞子樣品,按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液,再按照“2.2.1”項下色譜條件進行測定,計算各成分含量,結果見圖11。由含量測定結果可知紅景天苷含量隨著炮制時間的延長而呈上升趨勢,上升趨勢快慢為女貞子壓破酒蒸>女貞子不壓破酒蒸>女貞子不壓破酒燉,其可能與女貞子壓破種皮后,直接暴露在高濕高熱條件下,加快了其他化合物分解轉化成紅景天苷結構單元的速率有關。特女貞苷和女貞苷G13均為女貞子中裂環(huán)環(huán)烯醚萜類的代表成分,在8.0 h炮制時間內,不同炮制條件下隨著炮制時間的延長2種成分都趨于穩(wěn)定;但與炮制0 h(即女貞子藥材)相比,壓破酒蒸樣品含量稍有升高,而不壓破酒蒸和酒燉樣品含量均稍有下降,可能與取樣過程中樣品存在差異有關,也可能是由于未壓破的女貞子在炮制過程中受到種皮的保護作用,避免了與水蒸氣的直接接觸,炮制初始裂環(huán)環(huán)烯醚萜成分的降解速率大于閉環(huán)環(huán)烯醚萜類物質裂解為裂環(huán)環(huán)烯醚萜類成分的速率,后隨著炮制時間的延長兩者降解速率相近[14]。

3 討論

本實驗考察了提取溶劑(甲醇、70%甲醇、50%甲醇、30%甲醇、50%乙醇、70%乙醇),提取方式(超聲,回流),提取溶劑用量(10、25、50、75 mL),提取時間(30、45、60 min)等供試品制備條件,結果發(fā)現(xiàn),選擇乙醇系統(tǒng)作為提取溶劑時,存在2號峰和11號5-羥甲基糠醛峰缺失的情況,以純甲醇作為提取溶劑時3號紅景天苷峰的峰型不對稱,易變形,故優(yōu)選了各色譜峰峰形對稱、分離效果好且響應值高的70%甲醇作為提取溶劑;另優(yōu)選了超聲提取方式、提取溶劑25 mL和提取時間60 min的供試品制備條件,得到的UPLC特征圖譜各色譜峰能夠滿足分析要求。

本研究通過采用合適的UPLC色譜條件能夠同時建立女貞子和酒女貞子的特征圖譜,除標定了女貞子特征圖譜的10個共有峰外,還能夠直觀地監(jiān)控酒女貞子炮制過程中新增的1～4個特征峰的變化情況。對酒女貞子炮制過程中的樣品進行無監(jiān)督模式聚類分析和PCA,其分析結果均將女貞子壓破酒蒸與女貞子不壓破酒蒸、酒燉區(qū)分為2大類,而女貞子不壓破酒蒸、酒燉樣品間則隨著炮制時間的不同部分交叉聚在一起?？赡芤驗榕懽訅浩品N皮后,直接暴露在高濕高熱條件下,會加快其環(huán)烯醚萜類及苯乙醇苷類等化學成分的分解與轉化的速度和程度,從而造成女貞子壓破酒蒸和女貞子不壓破酒蒸、酒燉樣品間的差異。通過監(jiān)督模式識別法進一步進行OPLS-DA,能將原始數(shù)據(jù)X中與因變量Y中不相關的信息去除,提高類內聚集性,使類與類之間的差異性得到最大化,結果顯示女貞子壓破酒蒸、女貞子不壓破酒蒸和女貞子不壓破酒燉明顯區(qū)分為3類,且1、5、7、9、10號峰是引起酒女貞子不同炮制樣品間成分差異的主要標志性成分,表明聚類分析和PCA中交叉聚在一起的樣品,可通過OPLS-DA進一步區(qū)分出來,其差異或體現(xiàn)在化學成分種類、含量及化學成分的比例關系上,可能是炮制后的酒女貞子滋補肝腎作用增強,寒涼之性減弱的主要原因[16]。

注:YP-JZ.壓破后酒蒸;BYP-JZ.不壓破酒蒸;BYP-JD.不壓破酒燉圖11 酒女貞子炮制過程中含量變化趨勢圖Fig.11 Trend chart of the changing contents of the wine-processed Ligustri Lucidi Fructust during the different processing procedure

本研究建立的UPLC特征圖譜及主要指標成分的篩選能夠對女貞子藥材及其炮制品中的紅景天苷、特女貞苷和女貞苷G13這3種指標成分進行定量,彌補了2020年版《中國藥典》未能同時檢測女貞子藥材及其炮制品中特女貞苷含量和紅景天苷含量的空白,還增加了含量較高的裂環(huán)環(huán)烯醚萜類成分女貞苷G13的含量測定,其含量結果表明紅景天苷隨著炮制時間的延長含量顯著增加,提示很可能是由于女貞子中環(huán)烯醚萜類化學成分在加水、加熱的條件下,其裂環(huán)上的酯鍵和環(huán)烯醚萜部分的氧苷鍵水解斷裂,生成次級苷或者苷元紅景天苷等[15];在8.0 h炮制時間內,特女貞苷和女貞苷G13含量則隨著炮制時間的延長稍有下降,但整體趨于穩(wěn)定。前人研究結果表明，炮制后環(huán)烯醚萜類成分含量呈下降趨勢可能體現(xiàn)在炮制時間、溫度及濕度等差異上,即炮制時間越長、溫度及濕度越高,環(huán)烯醚萜類成分含量可能下降得越明顯[12,14]。本研究建立的UPLC特征圖譜和含量測定方法能較全面地反映女貞子藥材及其不同炮制工藝下的酒女貞子質量,可為女貞子藥材及酒女貞子炮制過程的質量控制提供科學的檢測和鑒別方法。