雷舒雯，侯 艷,2，陳德洪，龔加順,*

（1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院，云南 昆明 650201；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)茶學(xué)院，云南 昆明 650201；3.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650201）

衰老是指機(jī)體的結(jié)構(gòu)、功能的代謝及適應(yīng)性逐漸衰退的總現(xiàn)象[1]。機(jī)體的衰老與其生理機(jī)能及各種病理過程密切相關(guān)。我國已經(jīng)進(jìn)入老齡化嚴(yán)重階段，截至2019年底，中國60歲以上老年人口約2.54億，占總?cè)丝诘?8.1%。隨著人口老齡化加快，由衰老導(dǎo)致的慢性病（如帕金森病、阿爾茲海默癥、癌癥、糖尿病等）已成為人們關(guān)注和研究的熱點(diǎn)。有研究報(bào)道，人類的健康、衰老和長壽與腸道微生物群有關(guān)[2]。當(dāng)人們處于衰老期，腸道生理功能隨著時(shí)間的推移，其免疫功能逐漸減退，加之多種外因（生活方式、飲食習(xí)慣、運(yùn)動(dòng)情況、藥物使用等）使腸道菌群發(fā)生質(zhì)和量的變化，導(dǎo)致腸道微生物群多樣性降低[3-4]。已有研究表明生活在腸道中的微生物或能改變機(jī)體的老化進(jìn)程[5]。

普洱茶是我國云南特有名茶，深受消費(fèi)者喜愛?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，普洱茶具有調(diào)節(jié)腸道菌群、抗衰老、抗氧化、增強(qiáng)免疫、減肥降脂等功效[6-9]，對人體起到保健的作用。普洱茶能夠避免氧化劑造成的氧化損傷，改善體內(nèi)氧化還原狀態(tài)，進(jìn)而發(fā)揮抗衰老作用[10]。普洱熟茶對腸道菌群失調(diào)小鼠有改善作用，并在一定程度上能夠調(diào)節(jié)腸道內(nèi)的菌群結(jié)構(gòu)使其趨于多樣性，從而使腸道微生態(tài)系統(tǒng)更加健康穩(wěn)定，維持機(jī)體的健康[11]。目前有關(guān)普洱熟茶通過調(diào)節(jié)腸道菌群來改善機(jī)體衰老的研究鮮見報(bào)道。因此，本研究采用D-半乳糖（D-galactose，D-gal）致衰老模型小鼠，以普洱熟茶水提物為受試物對衰老小鼠進(jìn)行干預(yù)，通過16S rDNA測序技術(shù)分析衰老小鼠腸道菌群的變化，探究普洱熟茶能否通過改善小鼠的腸道菌群而達(dá)到延緩衰老的作用，以期為普洱熟茶保健功效進(jìn)一步的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

SPF級雄性C57BL/6小鼠，5～6周齡，體質(zhì)量為（20±2）g，購自常州卡文斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司（許可證號：SCXK（蘇）2016-0010）；動(dòng)物飼料 江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限責(zé)任公司。

大益牌普洱熟茶（‘嘜號7262’，批次1801，2018年7月5日生產(chǎn)） 勐海茶廠；D-gal 美國Sigma-Aldrich公司；0.9%生理鹽水 山東齊都藥業(yè)有限公司；超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）試劑盒、丙二醛（malondialdehyde，MDA）試劑盒、二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）蛋白濃度檢測試劑盒上海酶聯(lián)生物科技有限公司；4%多聚甲醛通用型組織固定液 廣州賽國生物科技有限公司；無水乙醇、二甲苯、中性樹膠 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；蘇木素-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染液套裝 賽維爾生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠；RT-6100酶標(biāo)儀 濟(jì)南駿馳生物科技有限公司；TG16W離心機(jī) 長沙湘智離心機(jī)儀器有限公司；JJ-12J脫水機(jī)、JB-P5包埋機(jī) 武漢俊杰電子有限公司；RM2016病理切片機(jī) 上海徠卡儀器有限公司；GFL-230烤箱 天津市萊玻瑞儀器設(shè)備有限公司；Nikon Eclipse E100正置光學(xué)顯微鏡、NIKON DS-U3成像系統(tǒng) 日本尼康公司。

1.3 方法

1.3.1 普洱熟茶水提物制備

普洱熟茶磨碎80目過篩，將茶樣按1∶50（m/V）茶水比于沸水浸提10 min，趁熱過濾，重復(fù)5次，茶湯減壓低溫（（60±1）℃）濃縮至1 g/mL，裝瓶滅菌（120 ℃、15 min），4 ℃低溫冷藏。

1.3.2 普洱熟茶水提物組分的測定

蛋白質(zhì)含量測定采用考馬斯亮藍(lán)法[12]，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=0.531 3x+0.025 2，R2=0.990 4（x為牛血清白蛋白質(zhì)量濃度/（mg/mL）、y為595 nm波長處吸光度）。氨基酸含量測定采用茚三酮比色法[13]，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=1.118 5x－0.035 2，R2=0.996 7（x為谷氨酸質(zhì)量濃度/（mg/mL）、y為570 nm波長處吸光度）?？偺恰⒍嗵呛繙y定采用蒽酮-硫酸法[14]，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=1.762 7x+0.036 6，R2=0.998 9（x為葡萄糖質(zhì)量濃度/（mg/mL）、y為625 nm波長處吸光度）?？偠喾?、總黃酮含量測定采用福林-酚比色法[15]，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=5.667 7x+0.064 4，R2=0.999 0（x為沒食子酸質(zhì)量濃度/（mg/mL）、y為765 nm波長處吸光度）?？們翰杷睾繙y定采用香蘭素比色法[16]，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=2.136 8x+0.056 0，R2=0.991 7（x為表兒茶素質(zhì)量濃度/（mg/mL）、y為500 nm波長處吸光度）。茶色素（茶黃素、茶紅素和茶褐素）含量測定采用Roberts萃取比色法[17]。

1.3.3 動(dòng)物分組、建模與取樣

將30只小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)2周后，隨機(jī)分為對照組、衰老組和普洱熟茶組，每組各10只。對照組頸背部皮下注射10 mL/kgmb0.9%生理鹽水；其他組頸背部皮下注射500 mg/kgmbD-gal溶液，持續(xù)8周建立小鼠衰老模型。在建模的第9周開始，普洱熟茶組灌胃3 g/kgmb普洱熟茶水提物（根據(jù)日本東京桑野研究所推薦成人每日平均用茶量6 g，按人體標(biāo)準(zhǔn)體質(zhì)量60 kg計(jì)算得成人每日用茶量為0.1 g/kgmb。小鼠與人的等效劑量約為10 倍，即每只小鼠正常的劑量為1 g/kgmb水提物。同時(shí)結(jié)合課題組前期研究結(jié)果，本實(shí)驗(yàn)采用3 g/kgmb水提物作為灌胃劑量），對照組和衰老組灌胃等量蒸餾水。實(shí)驗(yàn)期間每7 d稱質(zhì)量1次，按體質(zhì)量變化調(diào)整注射及灌胃劑量。

18周采集小鼠的新鮮糞便（約0.5 g）于滅菌離心管中，－80 ℃凍存待測。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將小鼠脊椎脫臼處死，冰上取出肝臟組織，在冰浴條件下加入一定量的磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）（pH 7.4）制成組織勻漿液，3 000 r/min離心20 min，取上清液，置于－80 ℃凍存待測。同時(shí)冰上取出完整腸道，分離出空腸，于空腸中段剪下約1 cm長的腸段放入4%多聚甲醛組織固定液固定。

1.3.4 小鼠抗氧化指標(biāo)測定

采用相對應(yīng)的試劑盒對肝臟組織勻漿中SOD、GSH-Px活力以及MDA含量進(jìn)行檢測，再根據(jù)BCA蛋白濃度檢測試劑盒測定勻漿蛋白質(zhì)量濃度，抗氧化指標(biāo)均以蛋白質(zhì)量計(jì)。

1.3.5 小鼠小腸病理切片

空腸組織→石蠟包埋→切片→脫蠟至水→HE染色→脫水封片→顯微鏡鏡檢→圖像采集分析。

應(yīng)用Image-Pro Plus 6.0軟件以右下角100 倍和200 倍標(biāo)尺為標(biāo)準(zhǔn)，100 倍視野下，每張切片從3個(gè)視野中選取5 根最高最完整的絨毛，分別測量絨毛高度、隱窩深度和肌層厚度。

1.3.6 16S rDNA高通量測序

采用Qubit?dsDNA Assay Kit試劑盒提取糞便樣品中菌群總DNA，以提取的DNA為模板，使用帶有barcode的特異引物（341F：CCTACGGGRBGCASCAG、806R：GGACTACNNGGGTATCTAAT）擴(kuò)增16S rDNA的V3～V4區(qū)，運(yùn)用Illumina NovaSeq測序平臺測序。經(jīng)過Reads拼接過濾，分類單元（operational taxonomic units，OTUs）聚類進(jìn)行物種注釋及豐度分析?；贠TU對測序進(jìn)行物種多樣性指數(shù)分析以及深度檢測；基于分類學(xué)信息在各個(gè)分類水平上進(jìn)行群落結(jié)構(gòu)的統(tǒng)計(jì)分析。在上述分析的基礎(chǔ)上，對多樣本的群落組成和系統(tǒng)發(fā)育信息進(jìn)行多元分析和差異顯著性檢驗(yàn)等一系列深入的統(tǒng)計(jì)學(xué)和可視化分析。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

2 結(jié)果與分析

2.1 普洱熟茶水提物組分

由表1可知，普洱熟茶水提物中蛋白質(zhì)含量為70.64 g/kg、氨基酸含量為24.86 g/kg、總糖含量為178.34 g/kg、多糖含量為11.28 g/kg、總多酚含量為62.69 g/kg、總黃酮含量為40.61 g/kg、總兒茶素含量為18.85 g/kg，茶色素中茶黃素含量為1.61 g/kg，茶紅素未檢測到，茶褐素含量最高，為249.96 g/kg。

表1 普洱熟茶水提物組分Table 1 Composition of Pu-erh tea infusion

2.2 小鼠衰老模型判定

小鼠衰老模型是否構(gòu)建成功，是后期實(shí)驗(yàn)進(jìn)行的基礎(chǔ)。衰老模型的評價(jià)初步通過觀察小鼠在實(shí)驗(yàn)過程中毛色、精神狀態(tài)、活躍度、攝食量、行動(dòng)的靈活度等來判定[18-19]。建模8周后，對照組小鼠活躍，毛色光滑，精神狀態(tài)良好；衰老模型組小鼠行動(dòng)較遲緩，毛色、胡須變白并有所脫落，精神狀態(tài)較差（圖1）。由此看出，衰老模型建立成功。

圖1 建模8周后小鼠外觀Fig. 1 Mice appearance after eight weeks of modeling

2.3 普洱熟茶對小鼠體質(zhì)量的影響

體質(zhì)量常用于反映機(jī)體的健康狀況，作為衡量小鼠生長發(fā)育的重要指標(biāo)之一[20]。由圖2可知，前10周（主要為建模期）小鼠體質(zhì)量增長較快，衰老組小鼠體質(zhì)量增加量比對照組多，說明注射D-gal影響了小鼠正常發(fā)育；第10周后（干預(yù)期），普洱熟茶組小鼠體質(zhì)量逐漸下降。與對照組相比，衰老組小鼠最終體質(zhì)量略有減輕；與衰老組相比，普洱熟茶組小鼠最終體質(zhì)量減輕，這可能是普洱熟茶具有減肥效果，對體質(zhì)量增長有一定的抑制作用。

圖2 普洱熟茶對小鼠體質(zhì)量的影響Fig. 2 Effect of ripe Pu-erh tea on body mass of mice

2.4 普洱熟茶對小鼠抗氧化指標(biāo)的影響

表2 普洱熟茶對小鼠抗氧化指標(biāo)的影響Table 2 Effect of ripe Pu-erh tea on antioxidant indexes in mice

由表2可知，與對照組相比，衰老組小鼠的肝臟組織中SOD和GSH-Px活力均顯著降低（P＜0.05），MDA含量顯著升高（P＜0.05）；與衰老組相比，普洱熟茶組小鼠的肝臟組織中SOD和GSH-Px活力均顯著升高（P＜0.05），MDA含量顯著降低（P＜0.05）。這表明D-gal持續(xù)攝入會(huì)導(dǎo)致小鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激，促進(jìn)脂質(zhì)過氧化，普洱熟茶干預(yù)后可提高衰老小鼠肝臟組織的抗氧化能力，清除體內(nèi)過多的自由基，抑制脂質(zhì)過氧化，降低MDA含量。

2.5 小鼠小腸組織病理結(jié)果的分析

2.5.1 普洱熟茶對小鼠小腸組織形態(tài)的影響

由圖3可知，對照組小腸組織結(jié)構(gòu)完整，絨毛均勻細(xì)長，呈指狀排列，上皮細(xì)胞未見脫落，腸腺排列緊密；衰老組小腸絨毛缺損，腫脹肥大，組織黏膜層損傷，局部黏膜上皮細(xì)胞脫落，固有層腸腺排列疏松，間隙增寬；普洱熟茶組小腸絨毛長度較衰老組明顯增長，無肥大現(xiàn)象，黏膜層及上皮細(xì)胞未見脫落，固有層腸腺排列緊密。

圖3 普洱熟茶對小鼠小腸組織形態(tài)的影響Fig. 3 Effect of ripe Pu-erh tea on small intestinal morphology of mice

2.5.2 普洱熟茶對小鼠小腸組織絨毛長度、隱窩深度及肌層厚度的影響

小腸是機(jī)體營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的主要部位，其結(jié)構(gòu)完整是保證營養(yǎng)物質(zhì)能夠正常消化吸收的基礎(chǔ)[21]。絨毛長度、隱窩深度及肌層厚度等是衡量小腸消化吸收能力的相關(guān)指標(biāo)[22]。由表3可以看出，與對照組相比，衰老組絨毛長度、隱窩深度和肌層厚度顯著降低（P＜0.05）。與衰老組相比，普洱熟茶組絨毛長度、隱窩深度和肌層厚度顯著升高（P＜0.05）。說明D-gal對小鼠的小腸形態(tài)結(jié)構(gòu)有一定影響，而普洱熟茶可以改善衰老小鼠的小腸形態(tài)結(jié)構(gòu)。

表3 普洱熟茶對小鼠小腸絨毛長度、隱窩深度及肌層厚度的影響Table 3 Effect of ripe Pu-erh tea on villus length, crypt depth and muscle layer thickness of small intestine in mice

2.6 普洱熟茶對小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響

2.6.1 物種多樣性分析

Shannon指數(shù)不僅反映了樣本中物種的數(shù)量（即豐富度），還反映了樣本中各物種的豐度分布情況（即均勻度）。由圖4可知，與對照組相比，衰老組Shannon指數(shù)顯著升高（P＜0.05），這說明D-gal致衰老小鼠的腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生了顯著變化。當(dāng)衰老小鼠攝入普洱熟茶后，腸道菌群Shannon指數(shù)顯著降低（P＜0.05），提示普洱熟茶干預(yù)有助于改善衰老小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)。

圖4 小鼠腸道微生物多樣性指數(shù)Fig. 4 Diversity index of gut microflora in mice

2.6.2 物種組成分析

2.6.2.1 物種Venn圖分析

Venn圖可用于統(tǒng)計(jì)多個(gè)樣品中所共有和獨(dú)有的OTU數(shù)目。通常情況下，分析時(shí)選用相似水平為97%的OTU樣品表。由圖5可知，衰老組中的OTU數(shù)目最多，達(dá)到779個(gè)，對照組OTU數(shù)目最少，有608個(gè)，普洱熟茶組OTU數(shù)目有695個(gè)。對照組特有29個(gè)OTU，衰老組特有179個(gè)OTU，普洱熟茶組特有106個(gè)OTU。各組樣品中共有的OTU是496個(gè)，僅對照組與衰老組共有的OTU數(shù)目是47個(gè)，僅衰老組與普洱熟茶組共有的OTU 數(shù)目是57個(gè)。

圖5 各組物種Veen圖Fig. 5 Venn diagram between groups species

2.6.2.2 基于門水平的物種組成分析

選取每個(gè)組別在門水平上最大豐度排名前10的物種，制作生成物種相對豐度柱形累加圖，以便直觀查看各組別在門水平上相對豐度較高的物種及其比例。由圖6可知，對照組、衰老組和普洱熟茶組小鼠的腸道菌群門水平都以厚壁菌門（Firmicutes）（分別為40.23%、49.65%和33.39%）和擬桿菌門（Bacteroidetes）（分別為54.22%、32.19%和58.94%）為主。

圖6 小鼠腸道菌群門水平相對豐度柱狀圖（豐度前10的菌門）Fig. 6 Relative abundance of top ten most dominant intestinal bacterial phyla in mice

2.6.2.3 基于屬水平的物種組成分析

選取每個(gè)組別在屬水平上最大豐度排名前30的物種，制成生成物種相對豐度柱形累加圖。由圖7可知，在屬水平上，與對照組相比，衰老組乳桿菌屬（Lactobacillus）、擬桿菌屬（Bacteroides）、擬普雷沃菌屬（Alloprevotella）、另枝菌屬（Alistipes）相對豐度降低，杜氏乳桿菌屬（Dubosiella）相對豐度升高；與衰老組相比，普洱熟茶組擬桿菌屬（Bacteroides）、擬普雷沃菌屬（Alloprevotella）、另枝菌屬（Alistipes）、丁酸弧菌屬（Butyrivibrio）、勞特氏菌屬（Blautia）相對豐度升高，乳桿菌屬（Lactobacillus）和Dubosiella菌屬相對豐度降低。

圖7 小鼠腸道菌群屬水平相對豐度柱狀圖（豐度前30的菌屬）Fig. 7 Relative abundance of top 30 most dominant intestinal bacterial genus in mice

2.6.3 物種特征性差異分析

由圖8可知，與對照組相比，衰老組小鼠腸道的擬桿菌門與厚壁桿菌門數(shù)量比（Bacteroidetes/Firmicutes，B/F）值降低，但差異不顯著（P＞0.05）；與衰老組相比，普洱熟茶組B/F值顯著升高（P＜0.05）。說明在門水平上，衰老組的腸道菌群出現(xiàn)了衰老特征，并且普洱熟茶通過提高B/F值明顯改善了衰老小鼠在門水平上的菌群紊亂現(xiàn)象。

圖8 普洱熟茶對小鼠腸道菌群B/F值的影響Fig. 8 Effect of ripe Pu-erh tea on B/F ratio in mice

圖9 各組小鼠腸道菌群物種線性判別分析值分布圖Fig. 9 Differences in relative abundance of intestinal bacteria between groups species in mice

圖10 各組小鼠腸道菌群科水平相對豐度直方圖Fig. 10 Relative abundance of intestinal bacterial families between groups in mice

圖11 各組小鼠腸道乳桿菌屬水平相對豐度直方圖Fig. 11 Relative abundance of intestinal Lactobacillus between groups in mice

線性判別分析差異貢獻(xiàn)分析（linear discriminant analysis effect size，LEfSe）強(qiáng)調(diào)統(tǒng)計(jì)意義和生物相關(guān)性，能夠在組與組之間尋找具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的生物標(biāo)志物，識別不同豐度的特征以及相關(guān)聯(lián)的類別[23]。圖9展示出各組微生物群落在各分類水平下存在明顯差異的物種，衰老組物種豐度顯著差異的科為乳桿菌科（Lactobacillaceae），普洱熟茶組物種豐度顯著差異的科為瘤胃菌科（Ruminococcaceae）。乳桿菌科中僅包括乳桿菌屬（Lactobacillus）1個(gè)屬。由圖9得到圖10、11特征性菌群的相對豐度直方圖，與對照組相比，衰老組小鼠腸道中Lactobacillaceae和Lactobacillus相對豐度顯著降低（P＜0.05），Ruminococcaceae相對豐度顯著升高（P＜0.05）；與衰老組相比，普洱熟茶組小鼠腸道中Lactobacillaceae和Lactobacillus相對豐度顯著降低（P＜0.05），Ruminococcaceae相對豐度顯著升高（P＜0.05）。

3 討 論

小鼠長期注射D-gal可導(dǎo)致自然衰老，并造成動(dòng)物體內(nèi)代謝紊亂，產(chǎn)生大量自由基，打破氧化與抗氧化的動(dòng)態(tài)平衡，從而導(dǎo)致氧化應(yīng)激、認(rèn)知障礙等衰老相關(guān)病理現(xiàn)象的發(fā)生[24]。研究發(fā)現(xiàn)普洱茶水提取物能減少M(fèi)DA產(chǎn)生，保護(hù)自由基引起的細(xì)胞損傷，增加SOD和GSH-Px活性[25]。本研究發(fā)現(xiàn)在普洱熟茶干預(yù)下，D-gal致衰老小鼠肝臟組織中的SOD和GSH-Px抗氧化酶活力得到顯著改善，同時(shí)脂質(zhì)過氧化物MDA的水平含量顯著降低，說明普洱熟茶可以增強(qiáng)抗氧化系統(tǒng)活性，這可能與普洱熟茶的茶色素含有大量的具有極強(qiáng)清除自由基和抗氧化作用的活性酚羥基等活性因子有關(guān)。

小腸在機(jī)體衰老的過程中會(huì)出現(xiàn)退行性變化。腸絨毛能夠增加小腸吸收面積，提高營養(yǎng)物質(zhì)的消化利用率；隱窩深度反映小腸細(xì)胞的生成率；肌層厚度則反映小腸運(yùn)動(dòng)狀態(tài)[26-28]。組織結(jié)構(gòu)完整是腸道正常發(fā)揮消化吸收功能及免疫機(jī)能的基本保證。本研究發(fā)現(xiàn)衰老小鼠絨毛長度、隱窩深度和肌層厚度降低，這與彭秀穎等[29]的研究結(jié)果一致，普洱熟茶干預(yù)的衰老小鼠小腸絨毛長度、隱窩深度和肌層厚度顯著升高，表明普洱熟茶對小腸退行性變化具有保護(hù)作用，提高對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收力，增強(qiáng)小腸運(yùn)動(dòng)力，緩解衰老導(dǎo)致的小腸黏膜組織損傷，從而保護(hù)小腸黏膜免疫功能。

人體腸道微生物群是一個(gè)巨大的生態(tài)系統(tǒng)，為宿主發(fā)育，正常免疫系統(tǒng)的形成新陳代謝均需要菌群的參與。B/F值是衡量機(jī)體衰老進(jìn)程的一個(gè)重要指標(biāo)，老年人的B/F比值低于年輕成年人[30-31]。本研究發(fā)現(xiàn)普洱熟茶干預(yù)后，小鼠腸道優(yōu)勢菌群為Bacteroidetes和Firmicutes這兩個(gè)細(xì)菌門，同時(shí)B/F值也顯著上升，與趙祎[32]的研究結(jié)果一致。Bacteroidetes可將糖類物質(zhì)轉(zhuǎn)化為對身體有益的產(chǎn)物[33]。同時(shí)，普洱熟茶干預(yù)的衰老小鼠Bacteroides相對豐度上升，這表明普洱熟茶可調(diào)節(jié)衰老小鼠腸道中Bacteroidetes和Firmicutes的相對豐度，調(diào)整腸道菌群結(jié)構(gòu)，從而延緩衰老進(jìn)程。

腸道菌群組成隨衰老發(fā)生改變，但未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)一的老年菌群特征[34]。Lachnospiraceae中的Blautia、Lachnospira以及Ruminococcaceae中的Faecalibacterium、Oscillospir等被證明是與短鏈脂肪酸（short-chain fatty acids，SCFAs）產(chǎn)生相關(guān)的菌屬[35]。SCFAs能夠穩(wěn)定腸道內(nèi)環(huán)境，改善衰老過程中腸道微生物菌群的失衡狀態(tài)，進(jìn)而起到延緩衰老的作用[36]。Blautia具有防止炎癥發(fā)生、維持腸道穩(wěn)態(tài)的功能，具有潛在益生菌特性[37]。Ruminococcaceae是厚壁菌門中產(chǎn)生丁酸鹽的一類菌群，丁酸鹽被證實(shí)能夠調(diào)節(jié)腸道免疫反應(yīng)，緩解腸道炎癥和氧化損傷[38]。本研究發(fā)現(xiàn)普洱熟茶干預(yù)的衰老小鼠腸道Blautia相對豐度上升和Ruminococcaceae相對豐度顯著上升，這表明普洱熟茶在一定程度上增加了衰老小鼠腸道內(nèi)有益菌，調(diào)節(jié)了腸道微生物結(jié)構(gòu)。Lactobacillus是健康成人腸道內(nèi)普遍存在的細(xì)菌，具有調(diào)節(jié)腸道菌群、增強(qiáng)免疫力、改善腸道功能、抗氧化等作用[39]。路曉杰[40]通過高通量測序分析發(fā)現(xiàn)普洱茶提取物降低了高脂飲食條件下Lactobacillus等與肥胖呈正相關(guān)的菌在相應(yīng)分類水平上的豐度。本研究發(fā)現(xiàn)D-gal致衰老小鼠Lactobacillus的相對豐度顯著下降，普洱熟茶干預(yù)后其相對豐度也下降，這是否與攝入普洱熟茶小鼠的體質(zhì)量減輕有關(guān)，還需要進(jìn)一步地深入研究分析。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明普洱熟茶在正常的3 倍高劑量條件下能夠增強(qiáng)衰老小鼠肝臟組織的抗氧化酶活性，保護(hù)衰老小鼠的小腸形態(tài)結(jié)構(gòu)及小腸黏膜免疫功能，改善衰老小鼠的腸道微生物菌群組成結(jié)構(gòu)，一定程度上增加了腸道內(nèi)有益菌的相對豐度，維持腸道平衡與穩(wěn)定，從而延緩衰老。