吳和弟 許麗娃 吉家釵 陳訓(xùn)春 王少津 (海口市人民醫(yī)院老年病科，海南 海口 570208)

冠心病致殘率、致死率均較高，是導(dǎo)致老年人殘疾、死亡的主要原因〔1〕。冠心病作為一種多因素疾病，其發(fā)生發(fā)展與遺傳、環(huán)境等因素密切相關(guān)，探討冠心病相關(guān)易感基因，早預(yù)防、早干預(yù)是當(dāng)前基礎(chǔ)研究領(lǐng)域之熱點(diǎn)。近年研究表明〔2,3〕，乙醛脫氫酶(ALDH)2作為人體內(nèi)乙醇代謝的關(guān)鍵酶，其基因多態(tài)性與空腹血糖受損存在明顯相關(guān)性，其可能通過影響血糖代謝水平，而影響冠心病的發(fā)生發(fā)展。還有研究發(fā)現(xiàn)，ALDH2基因突變參與了冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的病理過程，是心血管疾病的危險(xiǎn)因素〔4〕，但目前ALDH2在體內(nèi)的作用機(jī)制尚未完全闡明，ALDH2基因多態(tài)性與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系尚有爭(zhēng)議，且不同人群基因遺傳存在地區(qū)差異，需要區(qū)域性研究分析。本研究擬探討ALDH2基因多態(tài)性與海南地區(qū)漢族老年人群冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象 2017年1月至2020年12月在?？谑腥嗣襻t(yī)院老年病科住院患者800例，其中經(jīng)冠脈造影檢查確診為冠心病462例(冠心病組)，包括穩(wěn)定型心絞痛184例，不穩(wěn)定型心絞痛182例，心肌梗死96例；經(jīng)冠脈造影檢查排除冠心病338例(對(duì)照組)。冠心病診斷標(biāo)準(zhǔn)參照1979年世界衛(wèi)生組織(WHO)診斷標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①漢族，本地區(qū)常住居民；②年齡≥60歲；③接受冠狀動(dòng)脈造影檢查。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴嚴(yán)重肝腎功能不全、血液系統(tǒng)疾病者；②惡性腫瘤患者；③自身免疫性疾病者；④伴嚴(yán)重感染性疾病者。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，研究對(duì)象入組前均簽署知情同意書。

1.2ALDH2基因多態(tài)性檢測(cè) 收集患者空腹靜脈血2 ml，放置于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中，然后置于-80℃環(huán)境下保存?zhèn)溆?。?yīng)用DNA提取試劑盒(北京鑫諾美迪基因檢測(cè)技術(shù)有限公司)提取全血基因組DNA，利用紫外分光光度計(jì)對(duì)DNA濃度進(jìn)行測(cè)定，光密度260/280=1.8～2.0表明樣品達(dá)標(biāo)；DNA含量要求：所提取的標(biāo)本≥50 ng/μl；基因組RNA提取完成后，立即應(yīng)用ALDH2基因突變檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。目的DNA片段擴(kuò)增引物：上游引物為5′-GTCAACTGCTATGATGTGTTTGG-3′，下游引物為5′-CCACCAGCAGACCCTCAAG-3′。反應(yīng)體系50 μl，模板DNA 2 μg，2×Master Mix 25 μl，上下游引物各2 μl。反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性3 min后進(jìn)入循環(huán)，94℃變性45 s，然后60℃退火30 s，再以72℃延伸45 s，共進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，72℃延伸5 min，于4℃下保存。PCR擴(kuò)增引物在2%瓊脂糖凝膠下行電泳處理，應(yīng)用溴乙啶染色，紫外燈下觀察結(jié)果。

1.3臨床基本資料收集 包括性別、年齡、體重指數(shù)、吸煙史、飲酒史、既往病史、冠心病家族史等。并進(jìn)行常規(guī)生化指標(biāo)檢測(cè)，包括空腹血糖(FPG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)等；生化指標(biāo)均由?？谑腥嗣襻t(yī)院檢驗(yàn)科按標(biāo)準(zhǔn)流程完成檢測(cè)。并對(duì)冠心病患者進(jìn)行Gensini評(píng)分。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS24.0軟件進(jìn)行t、χ2檢驗(yàn)、Logistic回歸模型分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組臨床特征比較 冠心病組體重指數(shù)、吸煙史及高血壓、糖尿病、有冠心病家族史的比例均明顯高于對(duì)照組，且冠心病組糖脂代謝指標(biāo)FPG、TC、TG、LDL-C水平均明顯高于對(duì)照組(P<0.01，P<0.001)；兩組性別、年齡、飲酒史等資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組一般臨床資料比較

2.2ALDH2基因多態(tài)性與海南地區(qū)老年人群冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性 所有對(duì)象ALDH2基因型包括3種，即純合野生型(GG型)、純合突變型(AA型)和雜交突變型(GA)型；且各組ALDH2基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡分布(P>0.05)，有著良好群體代表性。冠心病組GG基因型頻率明顯低于對(duì)照組，AA基因型頻率明顯高于對(duì)照組(均P<0.001)；冠心病組G等位基因分布頻率明顯低于對(duì)照組，A等位基因分布頻率明顯高于對(duì)照組(P<0.001)。見表2。

表2 兩組ALDH2基因型和等位基因分布頻率比較〔n(%)〕

Logistic回歸分析顯示，海南地區(qū)老年人群中ALDH2基因位點(diǎn)AA基因型相比GG基因型患者冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增高(OR=2.213，95%CI：1.125～4.274，P=0.009)；進(jìn)一步經(jīng)冠心病相關(guān)的危險(xiǎn)因素校正后，結(jié)果仍顯示ALDH2基因AA等位基因攜帶者相比GG等位基因攜帶者冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增高(OR=2.587，95%CI：1.269～5.121，P=0.004)。

2.3ALDH2基因多態(tài)性與冠心病嚴(yán)重程度的相關(guān)性 根據(jù)Gensini評(píng)分將冠心病患者分為Gensini評(píng)分<43分、43分≤Gensini評(píng)分<72分、Gensini評(píng)分≥72分3個(gè)亞組，對(duì)ALDH2基因多態(tài)性與冠心病嚴(yán)重程度的相關(guān)性進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，各組ALDH2基因型分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 ALDH2基因多態(tài)性與冠心病嚴(yán)重程度關(guān)系〔n(%)〕

3 討 論

研究表明〔5,6〕，基因多態(tài)性在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用，研究基因多態(tài)性對(duì)于早期篩查高危人群有著重要意義。本研究發(fā)現(xiàn)，ALDH2基因多態(tài)性與海南地區(qū)漢族老年人群冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)具有相關(guān)性，但與疾病嚴(yán)重程度無相關(guān)性。ALDH2是酒精代謝的關(guān)鍵酶，還參與著其他醛類的氧化，兼具脫氫酶活性和酯酶活性。近年研究發(fā)現(xiàn)〔7〕，ALDH2可能通過氧化解毒醛類等來發(fā)揮心肌保護(hù)作用。線粒體ALDH2基因突變后，其酶活性顯著降低，致使醛解毒作用減弱，導(dǎo)致醛類物質(zhì)代謝減慢，誘導(dǎo)氧化應(yīng)激和凋亡信號(hào)傳導(dǎo)途徑，在缺血后損傷過程對(duì)心肌產(chǎn)生不利影響〔8〕。

多項(xiàng)研究表明〔9,10〕，ALDH2基因突變是心血管疾病的危險(xiǎn)因素。You等〔3〕研究認(rèn)為，ALDH2能夠通過抑制解毒4-羥基壬烯酸(HNE)途徑，下調(diào)活性氧生成，進(jìn)而減輕心肌細(xì)胞損傷。Adeniji等〔11〕研究表明，ALDH2表達(dá)增高可有效抑制動(dòng)脈粥樣硬化損傷，同時(shí)對(duì)心肌細(xì)胞凋亡有抵抗作用。He等〔12〕報(bào)道，ALDH2基因與2型糖尿病患者心腦血管并發(fā)癥密切相關(guān)。ALDH2基因突變存在明顯種族、地區(qū)差異。本研究結(jié)果提示，海南地區(qū)漢族老年人群中ALDH2基因位點(diǎn)AA基因型相比GG基因型患者冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增大2.213倍，進(jìn)一步經(jīng)冠心病相關(guān)的危險(xiǎn)因素校正后，結(jié)果仍顯示ALDH2基因AA等位基因攜帶者相比GG等位基因攜帶者冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增高。這與本課題組前期報(bào)道〔13〕及Liu等〔4〕報(bào)道一致。但江玲等〔14〕研究顯示，ALDH2基因多態(tài)性與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)。不同的研究結(jié)果可能與種族、地區(qū)差異有關(guān)。

關(guān)于ALDH2基因多態(tài)性影響冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的可能機(jī)制在于〔15～18〕：①ALDH2基因的A等位基因突變，可影響糖脂代謝及血壓異常，進(jìn)而促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程；②血液中高乙醛水平不利于心血管功能健康。ALDH2基因發(fā)生突變后，其解毒作用減弱，進(jìn)而使得其心肌保護(hù)作用降低；③ALDH2基因突變還可能通過氧化應(yīng)激、炎癥失衡等影響血管內(nèi)皮功能，而血管內(nèi)皮功能損傷與動(dòng)脈粥樣硬化有著緊密聯(lián)系，是導(dǎo)致心血管事件的危險(xiǎn)因素。目前，ALDH2在人體的作用機(jī)制仍未完全闡明，ALDH2基因多態(tài)性在冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)中的作用機(jī)制仍需通過動(dòng)物或細(xì)胞試驗(yàn)來研究。

本研究結(jié)果與江玲等〔14〕報(bào)道一致。本研究存在不足，首先樣本量較小，其結(jié)果難免與真實(shí)世界存在偏差；其次未對(duì)納入人群的他汀類藥物使用情況加以考慮，難免存在一定的混雜偏倚；再次，納入對(duì)象均為疑似冠心病患者，難免存在選擇偏倚。為更好地闡明基因多態(tài)性在冠心病發(fā)生發(fā)展中的作用，仍需更大樣本量的多中心研究、更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)难芯吭O(shè)計(jì)來驗(yàn)證，同時(shí)還需進(jìn)一步開展基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究，來闡明ALDH2基因多態(tài)性在冠心病發(fā)病中的作用機(jī)制。

綜上，本研究發(fā)現(xiàn)，ALDH2基因多態(tài)性與海南地區(qū)漢族老年人群冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)，ALDH2基因位點(diǎn)AA基因型相比GG基因型患者冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增大，但ALDH2基因多態(tài)性與冠心病嚴(yán)重程度無相關(guān)性。