馬玉著，陳素玉，劉昱婕

妊娠期糖尿病是孕期女性常見并發(fā)癥之一，據(jù)統(tǒng)計(jì)，其發(fā)病率為1%～5%，并有逐年增高的趨勢(shì)[1]。該病以糖脂代謝紊亂等為主要特點(diǎn)，可對(duì)孕婦、胎兒及新生兒造成嚴(yán)重危害，已成為威脅母嬰健康的社會(huì)公共衛(wèi)生問題[2]。目前，臨床上多采用控制飲食、科學(xué)運(yùn)動(dòng)，必要時(shí)配合胰島素等藥物治療，但仍有部分患者出現(xiàn)不良妊娠結(jié)局。因此，探索影響妊娠期糖尿病母嬰不良結(jié)局的相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素以指導(dǎo)臨床早期干預(yù)對(duì)改善妊娠結(jié)局具有非常重要的意義。微小核糖核酸(microRNA，miR)屬于小分子非編碼RNA，在多種生物學(xué)過程中發(fā)揮重要作用，已有研究指出[3]，miR表達(dá)水平的異常與妊娠期糖尿病的發(fā)生密切相關(guān)。miR-15a是新發(fā)現(xiàn)的與血管生成相關(guān)的miR家族成員，有研究[4]表明，miR-15a表達(dá)水平變化在2型糖尿病病情發(fā)展中起重要作用。但目前關(guān)于miR-15a表達(dá)水平在妊娠期糖尿病的變化情況及其是否與不良母嬰結(jié)局相關(guān)尚未完全清楚。鑒于此，該研究擬通過檢測(cè)妊娠期糖尿病患者血清miR-15a表達(dá)水平，并分析其與不良妊娠結(jié)局的關(guān)系，以為臨床診治提供參考。

1 材料與方法

1.1 一般資料選取2018年8月～2020年8月中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科收治的妊娠期糖尿病患者143例為實(shí)驗(yàn)組，另選取同期孕檢健康的124例正常孕婦為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：實(shí)驗(yàn)組均符合婦產(chǎn)科學(xué)(第9版)[5]妊娠期糖尿病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且入院后給予常規(guī)治療(胰島素控制血糖、科學(xué)飲食及運(yùn)動(dòng)鍛煉等)；對(duì)照組均為孕檢正常孕婦；兩組均自然受孕，孕周≥24周，單胎；均知情同意，自愿參與；患者依從性良好，能配合完成隨訪。排除標(biāo)準(zhǔn)：伴妊娠期高血壓、子癇前期等其他妊娠期合并癥者；心肺肝腎等重要臟器功能不全者；妊娠前已存在糖尿病、甲狀腺疾病、腎上腺疾病等內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病者；惡性腫瘤者；血液系統(tǒng)疾病、自身免疫性疾病者；精神疾病患者；近期感染性疾病、子宮畸形者；瘢痕子宮；胎盤早剝、前置胎盤、胎位不正者；不良生活習(xí)慣如嗜酒、吸煙等。兩組受試者年齡、孕周等一般資料見表1，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組在孕婦年齡、孕周、孕前體質(zhì)量指數(shù)、生產(chǎn)史方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1 一般資料比較

1.2 方法

1.2.1血清miR-15a表達(dá)水平檢測(cè) 采用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)檢測(cè)血清miR-15a表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)組于治療前、對(duì)照組于體檢時(shí)，抽取受試者空腹靜脈血5 ml，3 000 r/min離心10 min，分離血清；按照TRIzol試劑盒(美國(guó)Invitrogen公司)說明書提取血清總RNA，以紫外分光光度計(jì)測(cè)量提取RNA的濃度與純度；參照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(TapMan Reverse Transcription Kit試劑盒，北京金福賽生物科技有限公司)將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA；擴(kuò)增cDNA，使用熒光定量試劑盒(SYBR Premix Ex Taq，杭州科聯(lián)美訊生物醫(yī)藥科技有限公司)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)試儀檢測(cè)，其中miR-15a引物由上海信帆生物科技有限公司設(shè)計(jì)，正向引物5′-TAGCAGCACATAATGGTTTGTG-3′，反向引物5′-GCCTCTAACATTGAGACAGC-3′，均設(shè)置3復(fù)孔，反應(yīng)體系為50 μl，反應(yīng)條件為95 ℃10 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s，共40個(gè)循環(huán)，以U6作為內(nèi)參，以2-ΔΔct法計(jì)算血清中miR-15a表達(dá)水平，見圖1A、1B。對(duì)比實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組血清miR-15a表達(dá)水平。

圖1 RT-PCR檢測(cè)miR-15a、U6表達(dá)水平A: RT-PCR檢測(cè)miR-15a表達(dá)水平；B：RT-PCR檢測(cè)U6表達(dá)水平

1.2.2母嬰不良結(jié)局判斷 兩組均隨訪至分娩結(jié)束，觀察母嬰結(jié)局，其中母體不良結(jié)局包括流產(chǎn)、胎膜早破、羊水過多、產(chǎn)后出血、產(chǎn)后感染等；圍生兒不良結(jié)局包括早產(chǎn)兒、巨大兒、胎兒窘迫、死胎、新生兒窒息、新生兒呼吸窘迫綜合征、新生兒低血糖等。對(duì)比實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組母嬰不良結(jié)局發(fā)生情況。

1.2.3關(guān)系分析 整理可能影響妊娠期糖尿病患者母嬰不良結(jié)局的相關(guān)因素，如年齡、孕前體質(zhì)量指數(shù)、不良孕產(chǎn)史(既往妊娠胎兒畸形、停育、死胎、死產(chǎn)及產(chǎn)后大出血等)、生產(chǎn)史、血糖控制情況(血糖控制在正常范圍為控制良好，否則為控制不良)、血清miR-15a表達(dá)水平等，將以上指標(biāo)設(shè)為自變量，另將母嬰不良結(jié)局設(shè)為因變量，賦值(表2)，進(jìn)行多因素Logistic回歸性分析。分析miR-15a表達(dá)水平與妊娠期糖尿病患者母體不良結(jié)局、圍生兒不良結(jié)局的關(guān)系：比值比(OR值)、95%可信區(qū)間(95%CI)。

表2 指標(biāo)賦值情況

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)分析采用SPSS 24.0軟件，計(jì)量資料以表示，采用t檢驗(yàn)進(jìn)行比較；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，若理論頻數(shù)為1～5，則校正卡方值，理論頻數(shù)<1則用Fisher精確檢驗(yàn)；血清miR-15a表達(dá)水平與妊娠期糖尿病患者母嬰不良結(jié)局的關(guān)系分析采用多因素Logistic回歸性分析法，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清miR-15a表達(dá)水平比較實(shí)驗(yàn)組血清miR-15a表達(dá)水平(3.78±0.71)高于對(duì)照組(1.69±0.32)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 兩組母嬰不良結(jié)局發(fā)生情況比較實(shí)驗(yàn)組流產(chǎn)、胎膜早破、羊水過多、產(chǎn)后出血、產(chǎn)后感染、早產(chǎn)兒、巨大兒、胎兒窘迫、新生兒窒息、新生兒呼吸窘迫綜合征、新生兒低血糖發(fā)生率及母體、圍生兒不良結(jié)局總發(fā)生率均高于對(duì)照組(P<0.05)，實(shí)驗(yàn)組死胎發(fā)生率與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表3、4。

表3 兩組母體不良結(jié)局發(fā)生情況[n(%)]

表4 兩組圍生兒不良結(jié)局發(fā)生情況[n(%)]

2.3 血清miR-15a表達(dá)水平與妊娠期糖尿病患者母體不良結(jié)局的關(guān)系母體結(jié)局不良組年齡>35歲、孕前體質(zhì)量指數(shù)≥24.0 kg/m2、不良孕產(chǎn)史、血糖控制不良占比及血清miR-15a表達(dá)水平與母體結(jié)局良好組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，以上均是妊娠期糖尿病患者母體不良結(jié)局的危險(xiǎn)因素(P<0.05)，見表5、6。

表5 可能影響妊娠期糖尿病患者母體不良結(jié)局的因素分析[n(%)]

表6 妊娠期糖尿病患者母體不良結(jié)局的危險(xiǎn)因素分析

2.4 血清miR-15a表達(dá)水平與妊娠期糖尿病患者圍生兒不良結(jié)局的關(guān)系圍生兒結(jié)局不良組年齡>35歲、孕前體質(zhì)量指數(shù)≥24.0 kg/m2、不良孕產(chǎn)史、血糖控制不良占比及血清miR-15a表達(dá)水平與圍生兒結(jié)局良好組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，以上均是妊娠期糖尿病患者圍生兒不良結(jié)局的危險(xiǎn)因素(P<0.05)，見表7、8。

表7 可能影響妊娠期糖尿病患者圍生兒不良結(jié)局的因素分析[n(%)]

表8 妊娠期糖尿病患者圍生兒不良結(jié)局的危險(xiǎn)因素分析

3 討論

妊娠期糖尿病是威脅孕婦及圍生產(chǎn)兒健康的主要妊娠合并癥，經(jīng)飲食、運(yùn)動(dòng)及藥物積極干預(yù)后，多數(shù)患者血糖水平能夠得到有效控制，可獲得良好的母兒結(jié)局，但有部分患者即使經(jīng)治療后血糖控制良好，其發(fā)生不良妊娠結(jié)局的風(fēng)險(xiǎn)仍較高。本研究中，實(shí)驗(yàn)組母體與圍生兒不良結(jié)局發(fā)生率均較對(duì)照組高，此與Kim et al[6]研究結(jié)果基本符合，證實(shí)了妊娠期糖尿病患者母嬰不良結(jié)局發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)顯著增加。因此，尋找能夠有效評(píng)估妊娠期糖尿病母嬰結(jié)局的相關(guān)生物學(xué)指標(biāo)以指導(dǎo)臨床工作對(duì)減少母嬰不良結(jié)局的發(fā)生很有必要。

本研究結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組血清miR-15a表達(dá)水平較對(duì)照組高，提示妊娠期糖尿病患者血清miR-15a表達(dá)水平異常升高。miR-15a位于人染色體13q14，為miR重要類型，已有研究[7-8]表明，miR-15a在2型糖尿病、糖尿病性視網(wǎng)膜病變中表達(dá)異常。另有研究[9]表明，在高糖環(huán)境下，可刺激苗勒細(xì)胞過表達(dá)miR-15a，參與糖尿病發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程。劉林平 等[10]研究顯示，單純白內(nèi)障患者血清中miR-15a表達(dá)水平低于2型糖尿病伴白內(nèi)障者、非增生性糖尿病視網(wǎng)膜病變者、增生性糖尿病視網(wǎng)膜病變者，進(jìn)一步說明miR-15a可能與糖尿病及其相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)生有關(guān)。此外，有研究[11]顯示，miR-15a表達(dá)可對(duì)胰島素的分泌與敏感性產(chǎn)生一定的影響。miR-15a表達(dá)水平異常與糖尿病的發(fā)生存在一定的相關(guān)性，結(jié)合本研究結(jié)果，表明血清miR-15a表達(dá)水平可能參與了妊娠期糖尿病的發(fā)病進(jìn)程。

另本研究結(jié)果表明，母體結(jié)局不良組與圍生兒結(jié)局不良組血清miR-15a表達(dá)水平分別高于母體結(jié)局良好組、圍生兒結(jié)局良好組，且多因素分析顯示血清miR-15a表達(dá)水平是妊娠期糖尿病母嬰不良結(jié)局的影響因素，提示血清miR-15a表達(dá)水平與妊娠期糖尿病母嬰不良結(jié)局的發(fā)生關(guān)系密切。相關(guān)研究[12]報(bào)道，部分miR與妊娠丟失密切相關(guān)；另有研究[13]指出，miR-222表達(dá)水平升高可引起妊娠期糖尿病患者新生兒早產(chǎn)、病理性黃疸，以上進(jìn)一步說明miR可能與新生兒不良結(jié)局存在一定的關(guān)系。有研究[14]表明，miR-15a與糖尿病的發(fā)生相關(guān)，可影響血糖代謝與胰島素抵抗等。妊娠期糖尿病患者miR-15a表達(dá)水平升高，可影響母體血糖調(diào)節(jié)，促進(jìn)妊娠期糖尿病進(jìn)展，加重母體糖代謝紊亂，則可增加母嬰不良結(jié)局發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。此外，本研究中孕婦年齡、孕前體質(zhì)量指數(shù)、不良孕產(chǎn)史、血糖控制情況亦是妊娠期糖尿病患者母嬰不良結(jié)局的影響因素，此可能是因高齡產(chǎn)婦生育能力下降，而孕前體質(zhì)量指數(shù)過高易引起肥胖，加重糖脂代謝紊亂，另既往不良孕產(chǎn)史可增加其精神與心理壓力，此外，若患者血糖控制不佳，則母體長(zhǎng)期高血糖環(huán)境可誘發(fā)不良妊娠結(jié)局。

綜上，妊娠期糖尿病患者血清miR-15a表達(dá)水平高于正常孕婦，母嬰不良妊娠結(jié)局發(fā)生率明顯增加，且血清miR-15a表達(dá)水平變化與妊娠期糖尿病母嬰不良妊娠結(jié)局的發(fā)生密切相關(guān)，可增加其發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。