王佳敏，沈浩鋒

（1.寧波中盛產(chǎn)品檢測有限公司，浙江 寧波 315000；2.浙江省寧波生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心，浙江 寧波 315000）

內(nèi)分泌干擾物（EDCS）也稱為環(huán)境雌激素，屬于新興污染物，是指經(jīng)過攝入與生物體內(nèi)富集作用，接入動物或人類體內(nèi)荷爾蒙的輸送、合成、結(jié)合、分泌、代謝與反應的過程，以雌激素方式對內(nèi)分泌系統(tǒng)造成干擾，能夠予以生物體異常影響，為外源性化學物質(zhì)，具有低劑量效應、憎水性、半衰期長的特征。目前在全球土壤中被廣泛檢測到，對環(huán)境帶來嚴重威脅。此類物質(zhì)會降低動物、人類生殖能力，危害健康和發(fā)育行為，即便為納克每升級別含量，也會造成生物體內(nèi)分泌失衡，產(chǎn)生異常影響，甚至引發(fā)癌癥。準確檢測內(nèi)分泌干擾物能夠預防環(huán)境中的危害，為后續(xù)治理與預防奠定基礎，可采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法，實現(xiàn)多類環(huán)境EDCS檢測，推動檢測工作規(guī)?；?。

1 實驗部分

1.1 材料和試劑

土壤：源自周圍農(nóng)業(yè)用地土壤及固體廢棄物、沉積物、建設用地土壤、活性污泥等；硅藻土，840 μm～2 000 μm，昊?；瘜W。

丙酮（C3H8O），色譜純，美國天地；二氯甲烷（CH2Cl2），色譜純，美國天地；正己烷（C6H14），色譜純，美國天地；壬基酚（C15H24O），純品型99%，山東旭晨化工；己二酸二異丁酯（C14H26O4），純品型99%，山東旭晨化工；己二酸二丁酯（C14H26O4），純品型99%，山東旭晨化工；鄰苯二甲酸戊基異戊酯（C18H26O4），純品型99%，山東旭晨化工；鄰苯二甲酸二庚酯（C22H34O4），純品型99%，山東旭晨化工；鄰苯二甲酸二癸酯（C28H46O4），純品型99%，山東旭晨化工；對正庚基苯酚（C13H20O），純品型98%，北京邁瑞達科技；二（1-丁基戊烷）己二酸（C24H46O4），純品型98%，北京邁瑞達科技；內(nèi)標：菲-d10 或五氯硝基苯，1 000 mg/L。

1.2 儀器

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，島津，QP2020 型，具有EI 源；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，東京理化，N-1300D-WB；自動定量平行濃縮儀，萊博泰科，MultiVap-10；粗稱天平，0.01 mg，江蘇宏力稱重設備有限公司；硅酸鎂柱，1 000 mg/6 mL，安譜；索氏提取裝置：含配套電熱套、冷凝管、燒瓶及索提管（250 mL）；微量進樣針：10、25、50、100 μL。其他玻璃器具和實驗室常見器具。

1.3 樣品前處理

1.3.1 提取

稱取新鮮樣品5.00 g，加入適量硅藻土拌勻，一起研磨至呈流沙顆粒狀，然后全部轉(zhuǎn)移至濾紙筒中。將濾紙筒裝入索氏提取裝置中。分別添加恰當丙酮-二氯甲烷混合溶劑，兩者混合體積比例1∶1，放置于底部燒瓶中，注意溶劑量在索提管中液面應能高過虹吸管頂部，保證能回流。然后開啟電熱套和冷卻水，讓索氏提取裝置循環(huán)提取樣品16 h，保證回流速度為4 次/h～6 次/h。

1.3.2 濃縮

將上述提取后的溶液轉(zhuǎn)移至旋蒸瓶中，用真空控制器設置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀到合適的真空度，保證溶劑以正常速度蒸發(fā)（不出現(xiàn)爆沸）。之后，濃縮溶液至1 mL，添加適量正己烷旋蒸，溶液濃縮至1 mL 后可置換溶劑為正己烷，等待凈化。

1.3.3 凈化

用10 mL 正己烷將硅酸鎂柱活化，然后將上述濃縮好的試樣上硅酸鎂柱，同時用少量正己烷潤洗，潤洗液一并上硅酸鎂柱，棄去流出相。利用二氯甲烷（50 mL）將凈化柱洗脫，收集相應洗脫液。

注意：需始終保持凈化柱頂部有液面。

1.3.4 濃縮定容

將凈化好的試樣，用平行定量濃縮儀（或氮吹裝置），濃縮，并定容至1 mL。加入與標準曲線等量的內(nèi)標，待上機分析。

1.4 上機分析

1.4.1 儀器工作條件

1.4.1.1 質(zhì)譜條件

電離方式EI；四級桿溫度150 ℃；離子源溫度230 ℃；采取選擇離子監(jiān)測和全掃描模式，掃描質(zhì)量范圍是45 amu～550 amu。

1.4.1.2 色譜條件

進樣口溫度280 ℃；不分流進樣，進樣體積1 μL；

色譜柱：選用填料95%甲基二硅氧烷-5%苯基，規(guī)格30 m×0.25 μm×250 μm；

柱流量：1.0 mL/min；

柱溫條件：維持1 min 柱溫60 ℃后，按照提升速率10 ℃/min，溫度升高至220 ℃，維持1 min 后，按照提升速率5 ℃/min，溫度升高為280 ℃，維持8 min 即可。

1.4.2 標準曲線

配制曲線質(zhì)量濃度分別為1.0、5.0、10.0、20.0、50.0 μg/mL 的8 種內(nèi)分泌干擾物溶液，分別加入適量內(nèi)標，使添加的內(nèi)標物質(zhì)量濃度為40.0 μg/mL。按上述條件上機分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 選擇提取溶劑

提取溶液分別使用正己烷、二氯乙烷、丙酮-正己烷（1∶1）、丙酮、丙酮-二氯甲烷（1∶1）對6 個平行樣品進行加標后提取，其余條件不變。開展多次平行實驗，確定丙酮-二氯甲烷（1∶1）溶劑的平均提取效率最高，能達到80%～90%。因此，選擇丙酮-二氯甲烷（1∶1）混合溶劑作為提取溶劑。

2.2 選擇提取時間

以丙酮-二氯甲烷（1∶1）混合溶劑作為提取溶劑，分別對樣品提取8、12、16、20、24 h。經(jīng)過驗證，發(fā)現(xiàn)提取時間低于16 h 時，回收率隨著提取時間增加有顯著提升。提取時間大于16 h 后，回收率提升不明顯。故將提取時間定為16 h。

2.3 標準曲線和檢出限

按照上文中標準曲線配制方法，將各曲線點上機分析。橫坐標是目標濃度和內(nèi)標濃度比值，縱坐標是目標響應值和內(nèi)標相應比值，以此進行標準曲線繪制。結(jié)果顯示，在質(zhì)量濃度1.0 mg/L～50.0 mg/L 范圍下，響應值比和質(zhì)量濃度比具有良好線性關系，取7 個空白樣品，按照《HJ 168—2020》中檢出限驗證方法進行8 種內(nèi)分泌干擾物的檢出限驗證實驗，上機測試，計算出檢出限，見表1。

2.4 加標回收率與精密度

分別稱取3 組（每組6 份）平行樣品，分別進行高、中、低3 個水平濃度的加標，每個水平開展平行試驗6 次，按照樣品處理步驟開展實驗，獲得平均加標回收率和相對標準偏差，見表2。

表2 加標回收率與精密度

2.5 實際樣品分析

根據(jù)上述實驗方式，檢測已經(jīng)采集的農(nóng)業(yè)土壤樣品20 份，結(jié)合特征離子及保留時間特征，以內(nèi)標法定量，結(jié)果表明，農(nóng)業(yè)土壤樣品內(nèi)檢測出己二酸二異丁酯、鄰苯二甲酸二癸酯、鄰苯二甲酸戊基異戊酯、二（1-丁基戊烷）己二酸等，測試結(jié)果見第96 頁表3。

表3 實際樣品檢測數(shù)據(jù)

3 討論與分析

土壤內(nèi)分泌干擾物對于土壤環(huán)境具有較大影響，本文針對土壤樣品采用索氏提取法，用丙酮-二氯甲烷（1∶1）溶液進行16 h 提取，經(jīng)濃縮與凈化后，利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，以內(nèi)標法完成測定。各組分曲線相關系數(shù)均＞0.995；檢出限為0.02 mg/kg～0.12 mg/kg；加標回收率范圍為74.6%～91.1%。同時，對采集的20 份實際土壤樣品進行檢測，能夠測出其中的相應目標物，有一定的重現(xiàn)性，檢測效果顯著，能夠為后續(xù)開展土壤治理，控制污染物排放提供參考的分析方法。

4 結(jié)論

綜上所述，土壤多類環(huán)境內(nèi)分泌干擾物中，使用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法，樣品提取利用索氏提取法，經(jīng)過合適濃縮、凈化方式，能夠獲得土壤試樣。從本文開展的驗證工作來看，該方法滿足土壤中8 種環(huán)境內(nèi)分泌干擾物測試要求，線性關系良好，且具有檢出限低、準確度高、重現(xiàn)性好的特點，建議推廣。