任軍凱，周曉勇，曾智勇，姚祥坦，陳銀根

（1.新昌縣種植業(yè)技術(shù)推廣中心，浙江，312599；2.新昌縣農(nóng)村經(jīng)營管理站；3.嘉興市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院）

傳統(tǒng)食用菌栽培以闊葉木屑為主要栽培基質(zhì)，但菇木林資源不足，菌林矛盾突出，因此，新型培養(yǎng)料的探索是確保食用菌產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要措施[1]。果樹木體積大且經(jīng)濟價值低，傳統(tǒng)處理方式是用作廉價燃料或長期堆疊放置，而果樹木中含有大量的木質(zhì)素、纖維素等營養(yǎng)成分，可用于栽培食用菌[2]。本研究利用桃樹、梨樹、葡萄和無花果木屑栽培玉木耳和灰樹花2種珍稀食用菌，探究4種果樹木屑對菌絲生長和原基形成的影響，初步篩選適合作為玉木耳和灰樹花的果樹木屑培養(yǎng)料，為進一步利用果樹木屑奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

①供試材料 果樹木屑包括桃樹、梨樹、葡萄、無花果，在新昌當(dāng)?shù)厥占Ｄ拘紡陌不召徣?，為食用菌栽培常用的闊葉木屑。將當(dāng)年采集的4個樹種木條曬干，經(jīng)網(wǎng)孔為8 mm的粉碎機粉碎成木屑備用。

②供試菌種 玉木耳[3]，由麗水市農(nóng)業(yè)科學(xué)院提供；灰樹花品種慶灰151，購于麗水慶元。

③母種和原種配方 將菌絲從菌種中分離，保存至試管中作為母種，母種培養(yǎng)基配方為馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂18 g，配制成1 L。將母種轉(zhuǎn)接為原種，原種培養(yǎng)基配方為木屑78%、麩皮21%、石膏1%，含水量60%。

④試驗設(shè)計 試驗于2019年10月至2020年4月在嘉興市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院實驗室進行。

a.木屑浸出液試驗。木屑浸出液的制備：稱取20.0 g各類木屑，加入1 L水，煮沸20 min，用紗布過濾掉木屑，收集濾液并加熱濃縮至100 mL備用。

木屑浸出液培養(yǎng)基的制備：設(shè)置4個木屑浸出液梯度處理，125 mL PDA培養(yǎng)基中分別含有0（對照）、5、20、35 mL木屑浸出液。取12 mL培養(yǎng)基放入90 mm培養(yǎng)皿中備用。

菌齡一致的菌絲塊：從母種中取菌絲塊，接種至裝有PDA培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中央，培養(yǎng)至菌絲剛長滿培養(yǎng)皿，用打孔器在菌落最外圍取直徑8 mm的菌絲塊。

接種及菌絲培養(yǎng)：取菌齡一致的菌絲塊接種至裝有木屑浸出液培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中央。使用恒溫培養(yǎng)箱在25℃下培養(yǎng)菌絲，每個處理重復(fù)5次，1個培養(yǎng)皿作為1次重復(fù)，每個培養(yǎng)皿1塊菌絲塊。

b.培養(yǎng)料配方試驗。木屑培養(yǎng)料配方及菌包的制備：試驗設(shè)置5個處理，使用葡萄木屑、無花果木屑、梨樹木屑、桃樹木屑和闊葉木屑（對照）配制培養(yǎng)料，培養(yǎng)料配方為木屑78%、麩皮21%、石膏1%，含水量60%。使用15 cm×30 cm的菌袋裝培養(yǎng)料，每袋培養(yǎng)料質(zhì)量600 g。

1.2 接種及菌絲培養(yǎng)

玉木耳于2019年10月9日接種，灰樹花于2019年12月4日接種，取玉木耳和灰樹花母種接至PDA培養(yǎng)基中活化菌絲，用打孔器取菌齡一致的菌絲塊5塊接種至菌棒中，放于25℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每個處理重復(fù)5次，1個菌棒作為1次重復(fù)。試驗方法如下。

①培養(yǎng)基菌絲生長速度測量 用打孔器取菌齡一致的菌絲塊接種至裝有木屑浸出液培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中央，接種后根據(jù)菌絲生長速度在相同時間點分2次測量菌絲直徑，2次間隔天數(shù)根據(jù)菌絲生長速度調(diào)節(jié)，間隔3～5 d，菌絲生長速度計算公式：菌絲生長速度（cm/d）=（第2次測量直徑－第1次測量直徑）/（生長天數(shù)×2）。

②培養(yǎng)料菌絲生長指標(biāo)測定 菌棒接種后10 d開始測定菌絲生長速度，用油性筆在菌袋上標(biāo)明菌絲邊緣，間隔10 d再用油性筆標(biāo)明菌絲邊緣，用直尺測量10 d的菌絲生長量，菌絲生長速度計算公式：菌絲生長速度（cm/d）=（第2次劃線長度-與第1次劃線長度）/生長天數(shù)。

③菌絲長勢的測定 將不同處理的培養(yǎng)皿和菌棒放置在一起，菌絲長勢測定參考宋盼盼等[4]的方法。

④原基數(shù)量和現(xiàn)蕾率測定待菌絲長滿后將菌包移出恒溫培養(yǎng)箱，放置在常溫下，使其自然產(chǎn)生子實體原基，統(tǒng)計各處理原基數(shù)量，玉木耳于2019年11月29日開始統(tǒng)計原基數(shù)量和現(xiàn)蕾率，灰樹花菌絲長滿后溫度不適宜出菇，因此于2020年4月20日統(tǒng)計原基數(shù)量和現(xiàn)蕾率，現(xiàn)蕾率計算公式：現(xiàn)蕾率（%）=現(xiàn)蕾菌棒數(shù)/菌棒總數(shù)×100。

⑤化學(xué)指標(biāo)測定 將供試木屑及麩皮烘干后經(jīng)粉碎機粉碎，過100目篩，混合均勻，各培養(yǎng)料碳氮比按照配方比例計算獲得。

總碳含量用重鉻酸鉀氧化法測定[5]；總氮含量采用全自動凱氏定氮儀測定。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行處理，各組間數(shù)據(jù)采用Duncan's新復(fù)極差法進行多重比較（P＜0.05）。采用Personal相關(guān)系數(shù)進行相關(guān)性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 果樹木屑浸出液對菌絲生長速度的影響

如表1所示，隨著葡萄和無花果木屑浸出液含量的增加，玉木耳菌絲生長速度逐漸提高，至含量到達35 mL時，玉木耳菌絲生長速度分別較對照（0 mL）提高35.3%和17.3%；玉木耳菌絲在桃樹木屑浸出液培養(yǎng)基中生長速度先加快后減弱，20 mL處理較35 mL處理菌絲生長速度減慢12.5%；不同含量的梨樹木屑和闊葉木屑浸出液對玉木耳菌絲生長速度沒有顯著影響。

表1 果樹木屑浸出液對菌絲生長速度的影響

不同含量的桃樹木屑浸出液會顯著降低灰樹花菌絲生長速度；高含量（20 mL和35 mL）的葡萄、梨樹木屑浸出液同樣顯著降低灰樹花菌絲生長速度；不同含量的無花果木屑浸出液和闊葉木屑浸出液處理下灰樹花菌絲生長速度與對照差異不顯著。

2.2 果樹木屑浸出液對菌絲長勢的影響

各類木屑浸出液對菌絲長勢有一定影響，由表2可見，隨著木屑浸出液含量的增加，玉木耳菌絲長勢在桃樹、梨樹和闊葉木屑浸出液的培養(yǎng)基中變強，在無花果木屑浸出液的培養(yǎng)基中變?nèi)?，在葡萄木屑浸出液中長勢無明顯變化。

表2 果樹木屑浸出液對菌絲長勢的影響

隨著木屑浸出液含量的增加，灰樹花菌絲在葡萄、無花果和闊葉木屑浸出液的培養(yǎng)基中長勢變強，在梨樹、桃樹木屑浸出液中無明顯變化。

2.3 果樹木屑培養(yǎng)料對菌絲生長和長勢的影響

如表3所示，將各類木屑配制成培養(yǎng)料，以闊葉木屑配方的碳氮比最高，達到40.88，梨樹木屑配方碳氮比最低，僅25.35。玉木耳在闊葉木屑培養(yǎng)料中生長速度最快，在無花果木屑培養(yǎng)料中不生長；灰樹花在闊葉木屑培養(yǎng)料中生長速度最快，在無花果木屑培養(yǎng)料中生長速度最慢。不同培養(yǎng)料對灰樹花菌絲長勢的影響較小，而葡萄木屑和桃樹木屑的會減弱玉木耳菌絲長勢。

表3 果樹木屑培養(yǎng)料對菌絲生長速度和長勢的影響

2.4 果樹木屑培養(yǎng)料對現(xiàn)蕾率原基發(fā)生的影響

由表4可知，梨樹木屑培養(yǎng)料和闊葉木屑培養(yǎng)料下的玉木耳現(xiàn)蕾率為100%，但梨樹木屑培養(yǎng)料下的原基數(shù)量較少；葡萄木屑培養(yǎng)料下的玉木耳現(xiàn)蕾率較低，為20%，原基數(shù)量較少；而無花果木屑培養(yǎng)料和桃樹木屑培養(yǎng)料下的玉木耳現(xiàn)蕾率為0。使用葡萄、桃樹和梨樹木屑培養(yǎng)料下的灰樹花現(xiàn)蕾率較高，分別是80%、80%和100%，較闊葉木屑培養(yǎng)料的現(xiàn)蕾率高，但梨樹木屑培養(yǎng)料中灰樹花原基顏色呈白色，桃樹木屑因為是從外地購入，成本相對較高，葡萄木屑相對更適宜作為灰樹花的培養(yǎng)料。

表4 果樹木屑培養(yǎng)料對現(xiàn)蕾率和原基發(fā)生的影響

3 討論與結(jié)論

研究表明，菌絲生長速度與菌絲呼吸消耗呈正相關(guān)[6]，而培養(yǎng)料的碳氮比也影響菌絲生長速度[7]，灰樹花菌絲生長最佳培養(yǎng)基碳氮比為30∶1[8]，而玉木耳菌絲生長的最佳碳氮比尚未有研究。葡萄木屑浸出液對灰樹花菌絲生長有抑制作用，但葡萄木屑制作成培養(yǎng)料后的碳氮比較合適灰樹花，這可能是灰樹花菌絲在葡萄木屑培養(yǎng)料中的生長速度稍快于其他木屑培養(yǎng)料的原因。

本試驗在菌絲培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)，使用闊葉木屑栽培的玉木耳菌絲最早出現(xiàn)原基分化，然后是梨樹木屑。葡萄和桃樹木屑培養(yǎng)的玉木耳菌絲僅在接種口附近出現(xiàn)原基，其原基出現(xiàn)位置還需進一步研究；灰樹花原基均出現(xiàn)在接種口，葡萄、桃樹和梨樹培養(yǎng)料的原基出現(xiàn)時間均早于闊葉木屑培養(yǎng)料，梨樹木屑培養(yǎng)料中灰樹花子實體原基為白色，無花果木屑培養(yǎng)料內(nèi)菌絲顏色變黃，并且無原基出現(xiàn)，目前尚未有對子實體原基顏色進行研究的文獻，果樹木屑對灰樹花子實體原基顏色的影響還需進一步驗證。

玉木耳菌絲在無花果木屑浸出液中生長良好，但在無花果木屑培養(yǎng)料中無法生長，可能是由于無花果樹汁液中含有許多藥用成分，例如黃酮類物質(zhì)[9]，它在植物抗菌防病等方面起著重要的作用[10]，而黃酮類物質(zhì)難溶于水，導(dǎo)致菌絲在木屑浸出液培養(yǎng)基中生長良好，而將花果樹木屑制作為培養(yǎng)料后菌絲生長受到抑制。

本研究結(jié)果表明，葡萄、無花果木屑浸出液能加快玉木耳菌絲生長速度，梨樹和桃樹木屑浸出液能增強玉木耳菌絲長勢。葡萄、梨樹、桃樹木屑浸出液則會減慢灰樹花的菌絲生長速度，葡萄和無花果木屑浸出液對菌絲長勢有促進作用。果樹木屑作為培養(yǎng)料會減慢2種食用菌的菌絲生長速度，玉木耳菌絲在梨樹木屑培養(yǎng)料中生長速度較快，灰樹花菌絲在葡萄木屑培養(yǎng)料中生長速度較快。2種食用菌在梨樹木屑培養(yǎng)料中的現(xiàn)蕾率較高。

綜合多項因素，下一步研究可嘗試使用梨樹木屑栽培玉木耳，使用葡萄木屑栽培灰樹花。