楊莉，張藝，王琤韡

（江西科技師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，南昌 330013）

青皮（Citrus reticulata Blanco）為蕓香科植物橘及其變種的未成熟果實(shí)之外皮，是一種常用中藥。傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為其具有疏肝破氣、消積化滯的作用，可以有效治療胸脅脹痛、疝氣、乳核、乳痛、食積腹痛等一系列病癥[1]。青皮中主要含有黃酮類化合物、揮發(fā)油等成分，其中黃酮類化合物以橙皮苷、川青皮素、桔皮素為主[2-3]。在黃酮類化合物中，橙皮苷因其優(yōu)異的生理和藥理活性而在相關(guān)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)中作為衡量青皮質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分[4]。大量的研究表明橙皮苷具有抗氧化、抗炎、抗輻射、降血脂、調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)、保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)等多種生理活性，是一種綠色優(yōu)良的飼料添加劑，也可用于保健食品、化妝品等非醫(yī)用領(lǐng)域，具有很高的應(yīng)用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值[5-6]。我國(guó)的柑橘資源十分豐富，最主要的出口產(chǎn)品就是橘片罐頭，而加工廢棄的果皮大部分被丟棄，既浪費(fèi)資源又污染環(huán)境[7]。因此，生產(chǎn)一種提取方法簡(jiǎn)單，橙皮苷提取率高的粗制橙皮苷對(duì)天然物產(chǎn)資源合理利用，推進(jìn)橙皮苷的綜合應(yīng)用具有重要意義。但目前青皮中的橙皮苷提取轉(zhuǎn)移率普遍較低，因此，如何在低成本的基礎(chǔ)上高效地提取出橙皮苷就成為了一個(gè)研究熱點(diǎn)[8]。橙皮苷常見(jiàn)的提取方法有水回流法、堿提酸沉法、索式提取法、微波輔助提取法和超聲波輔助提取法等，其中堿提酸沉法是一種成本較低、工藝簡(jiǎn)單，而提取率又較高的提取方法。青皮的炮制方法、粉碎程度、提取溫度、堿的種類、提取時(shí)間及料液比等因素都會(huì)影響橙皮苷的提取率。本試驗(yàn)研究提取時(shí)間這一因素對(duì)堿提酸沉法提取橙皮苷的影響，為優(yōu)化青皮的提取工藝提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

1.1.1 試驗(yàn)材料

未成熟柑橘購(gòu)自云南省昆明市市場(chǎng)。

1.1.2 試驗(yàn)試劑

橙皮苷對(duì)照品（純度≥98%），購(gòu)自濟(jì)寧天之藍(lán)生物科技有限公司。氫氧化鈣、鹽酸、無(wú)水乙醇、硝酸鋁均為國(guó)產(chǎn)分析純，試驗(yàn)用水為純凈水。

1.1.3 試驗(yàn)儀器

電子天平（FA-1004），上海力辰邦西儀器科技有限公司；雙光束紫外分光光度計(jì)（UV-722），上海佑科儀器儀表有限公司；鼓風(fēng)恒溫干燥箱（101-2B），唯恒機(jī)械設(shè)備有限公司；予華牌循環(huán)水式真空泵（SHZ-DⅢ），長(zhǎng)沙明杰儀器有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精確稱取橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)品10mg，加入10%硝酸鋁溶液0.6mL，用70%乙醇定容至100mL容量瓶中。精確量取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL分別置10mL具塞試管中，并用70%乙醇將其補(bǔ)足至10.00mL，分別得到質(zhì)量濃度為0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)樣液。以70%乙醇溶液作為對(duì)照液，用雙光束紫外分光光度計(jì)在480.0nm測(cè)量各試管中溶液的吸光值。以橙皮苷質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明：橙皮苷在0.01～0.06mg/mL范圍內(nèi)濃度與吸光度呈良好線性關(guān)系，得到線性回歸曲線方程：Y=1.1X＋0.0123，R＝0.999。

1.2.2 橙皮苷提取工藝流程

柑橘皮晾干后切碎并用攪拌機(jī)粉碎至粉末狀，過(guò)60目篩，柑橘皮渣放干燥器中備用。取20g柑橘皮粉末平均分為4組，按液料比30:1加入蒸餾水，再加入0.3g氫氧化鈣調(diào)節(jié)pH至堿性，室溫提取0.5、1、1.5、2h。減壓抽濾，潤(rùn)洗殘?jiān)喜V液。濾液用0.1mol/LHCl調(diào)節(jié)至酸性，靜置12h結(jié)晶，用循環(huán)水式真空泵減壓抽濾，用無(wú)水乙醇洗滌至洗滌液無(wú)色，70℃鼓風(fēng)恒溫干燥箱烘干，稱重得橙皮苷粗提物。分別將所得橙皮苷粗提物加入10%硝酸鋁溶液，分別用70%乙醇溶液定容至10mL，搖勻。用雙光束紫外分光光度計(jì)在480nm測(cè)定各試管中溶液的吸光值，將所測(cè)吸光值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線得出浸提液橙皮苷質(zhì)量濃度，根據(jù)提取率計(jì)算公式可得不同浸提時(shí)間橙皮苷的提取率。重復(fù)3次取平均值。

1.3 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.3提取率

將所測(cè)吸光值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線得出浸提液橙皮苷質(zhì)量濃度，再根據(jù)以下公式計(jì)算提取率：

式中：C為測(cè)定橙皮苷質(zhì)量濃度，mg/mL；V為提取液體積，mL；N為稀釋倍數(shù)；W為樣品重量，g。

1.4 數(shù)據(jù)處理

使用SPSS 20.0軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行初步處理。

2 結(jié)果與分析

在不同的浸提時(shí)間下，橙皮苷的提取率見(jiàn)表1。由表1可知：青皮在浸提時(shí)間為0.5h與1h的橙皮苷提取率均值差異達(dá)到了顯著水平，表明浸提時(shí)間對(duì)橙皮苷提取率有顯著性影響。橙皮苷的提取率隨著浸提時(shí)間的增長(zhǎng)，呈先上升再下降的趨勢(shì)（見(jiàn)圖1）。由圖1可知，當(dāng)提取時(shí)間為1h時(shí)，橙皮苷提取率最高，達(dá)到了1.06%，而超過(guò)1h后，橙皮苷提取率開(kāi)始降低，表明堿提酸沉法提取橙皮苷的最佳浸提時(shí)間為1h。

3 討論

本試驗(yàn)采用傳統(tǒng)的堿提酸沉法研究浸提時(shí)間對(duì)青皮中橙皮苷提取率的影響，堿提酸沉法的原理是利用橙皮苷含有酚羥基的特點(diǎn)，其在堿性條件下酚羥基開(kāi)環(huán)生成鹽，其水溶性增大溶解，進(jìn)而在酸性條件下閉環(huán)沉淀進(jìn)行分離。本研究在前期試驗(yàn)中對(duì)溶解橙皮苷的試劑進(jìn)行了篩選，探究了傳統(tǒng)工藝中2種常用溶劑甲醇、乙醇對(duì)橙皮苷提取率的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，使用甲醇溶解可在一定程度上提高橙皮苷提取率，但甲醇存在成本較高、毒性較強(qiáng)、環(huán)境不友好等缺點(diǎn)，因此本試驗(yàn)采用環(huán)境更友好的乙醇溶解提取橙皮苷。在溶解橙皮苷的試劑選擇上，李繼偉[9]等對(duì)石灰水、NaOH和70%乙醇三種常見(jiàn)溶劑提取柑橘皮中黃酮提取率進(jìn)行比較，結(jié)果表明用石灰水提取法的黃酮提取率較高，與NaOH提取法相當(dāng)，還可以有效降低雜質(zhì)果膠的提取率?？紤]到若將該提取工藝應(yīng)用于工廠的實(shí)際生產(chǎn)中，NaOH提取法將增加操作時(shí)間以及成本，這將導(dǎo)致設(shè)備與操作成本高于該提取工藝可獲得的收益，故選擇石灰水作為提取溶劑。在增加提取輔料的選擇上，有研究表明，添加提取輔料如表面活性劑（吐溫80[10]、十二烷基磺酸鈉）、果膠酶[11]與纖維素酶[12]等能夠有效提高橙皮苷提取率，但增加輔料會(huì)大大增加生產(chǎn)成本和操作難度，且現(xiàn)在相關(guān)技術(shù)并不十分成熟，故本試驗(yàn)不添加提取輔料進(jìn)行提取。本方法成本較低，操作簡(jiǎn)單，提取效率較高，所用有機(jī)溶劑量較少，適合工業(yè)生產(chǎn)中提高生產(chǎn)率降低成本。

表1 橙皮苷的提取率

圖1堿提酸沉法浸提不同時(shí)間的橙皮苷提取率

青皮和陳皮中均含有橙皮苷，研究表明陳皮中橙皮苷的提取率高于青皮，最高不超過(guò)30%。目前關(guān)于青皮中橙皮苷的提取工藝研究較少，而關(guān)于陳皮中橙皮苷的提取工藝文獻(xiàn)較多。青皮中橙皮苷的提取率與橙皮苷的炮制方法、粉碎程度、提取溫度、堿的種類、提取時(shí)間及料液比等因素都有關(guān)聯(lián)。趙琴等[13]在研究橙皮苷的傳統(tǒng)制作工藝時(shí)發(fā)現(xiàn)，通過(guò)適當(dāng)增加乙醇濃度、提高浸提溫度或合理延長(zhǎng)浸提時(shí)間可以使橙皮苷更充分地游離出來(lái)，從而提高提取率。鄧敏敏等[14]用超聲強(qiáng)化堿熱浸提取柚皮中橙皮苷，通過(guò)正交試驗(yàn)，結(jié)果表明，顯著影響橙皮苷提取率的因素大小依次為：液料比＞提取溫度＞提取時(shí)間＞提取次數(shù)。本試驗(yàn)研究結(jié)果表明，堿提酸沉提取橙皮苷的最佳浸提時(shí)間是1h，在此條件下橙皮苷提取率是1.06%。這可能是因?yàn)閴A液中的橙皮苷查爾酮對(duì)氧氣較為敏感，提取的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致大量橙皮苷查爾酮被氧化，從而降低其產(chǎn)品收率。本研究只對(duì)堿提酸沉法的浸提時(shí)間與橙皮苷提取率的關(guān)系做出探究，并未全面考察影響橙皮苷提取率的其他因素。其他因素對(duì)橙皮苷提取率的影響及粗制橙皮苷的抗氧化能力以及活性氧自由基的清除能力還有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)研究表明，堿提酸沉法的浸提時(shí)間會(huì)顯著影響橙皮苷提取率，最佳浸提時(shí)間為1h，橙皮苷提取率可達(dá)1.06%。