蘇貴森，肖國(guó)強(qiáng)，蔡景波，張 翔，黃曉林，蔡西栗，蔡逸龍，柴雪良*

(1.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)科學(xué)國(guó)家級(jí)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心，上海 201306; 2. 浙江省海洋水產(chǎn)養(yǎng)殖研究所; 浙江省近岸水域生物資源開發(fā)與保護(hù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;溫州市海洋生物遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 溫州 325005; 3.平陽縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，浙江 溫州 325400)

引 言

擬穴青蟹(Scyllaparamamosain)簡(jiǎn)稱青蟹，屬于甲殼綱(Crustacea)，十足目(Detapoda)，梭子蟹科(Portunidae)，青蟹屬(Scylla)。2019年養(yǎng)殖產(chǎn)量超過16萬t，占海水養(yǎng)殖蟹類的一半以上[1]。在我國(guó)，青蟹養(yǎng)殖的種類主要是擬穴青蟹，其養(yǎng)殖產(chǎn)量占青蟹養(yǎng)殖產(chǎn)量的90%以上[2]。目前，我國(guó)青蟹的養(yǎng)殖模式仍以池塘養(yǎng)殖為主，因大量冰鮮餌料的投喂導(dǎo)致水域環(huán)境惡化。近年來，蟹公寓等集約化、高密度的設(shè)施化養(yǎng)殖方式開始出現(xiàn)。因設(shè)施化養(yǎng)殖可以實(shí)現(xiàn)環(huán)境調(diào)控，降低外部風(fēng)險(xiǎn)，提高養(yǎng)殖效率，具有立體化、規(guī)?；?、集約化等優(yōu)點(diǎn)，因此是青蟹綠色高效養(yǎng)殖的發(fā)展方向。

傳統(tǒng)養(yǎng)殖模式下擬穴青蟹配合飼料開發(fā)與替代的研究已有報(bào)道，例如，周凡等[3]的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明了配合飼料在擬穴青蟹池塘養(yǎng)殖中具有可行性。董蘭芳等針對(duì)擬穴青蟹的配合飼料進(jìn)行了大量的水桶養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)，得出了青蟹配合飼料中蛋白質(zhì)[4]，碳水化合物[5]，脂肪[6]，鐵[7]等重要元素的適宜添加水平。王悅等[8]在循環(huán)水單體養(yǎng)殖條件下進(jìn)行青蟹蛋白質(zhì)和脂肪需求的研究，結(jié)果顯示青蟹飼料中最適蛋白質(zhì)和脂肪水平分別為42%～46%和6%～10%，對(duì)后續(xù)設(shè)施化條件下全價(jià)飼料的開發(fā)具有重要意義。

本研究以兩種配合飼料(青蟹配合飼料、鰻魚飼料)及常用動(dòng)物性餌料(雜魚和縊蟶)投喂擬穴青蟹，在“蟹公寓”設(shè)施化條件下，比較不同餌料對(duì)其生長(zhǎng)性能及消化酶活力的影響，為設(shè)施化條件下的青蟹養(yǎng)殖提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及養(yǎng)殖設(shè)施

實(shí)驗(yàn)在浙江省海洋水產(chǎn)養(yǎng)殖研究所清江基地進(jìn)行。室內(nèi)組裝4棟蟹公寓，每棟蟹公寓由60個(gè)蟹盒組成。蟹盒尺寸為40 cm×30 cm×20 cm，每個(gè)蟹盒養(yǎng)殖一只青蟹。每棟蟹公寓獨(dú)立進(jìn)出水，進(jìn)水水質(zhì)保持一致。擬穴青蟹采自浙江省樂清市清江鎮(zhèn)，平均質(zhì)量(52.9±4.9) g，于蟹公寓暫養(yǎng)1周。每日18時(shí)前換水，清理殘餌糞便；18時(shí)，投喂鮮活低值貝類；21時(shí)半至次日6時(shí)，開啟進(jìn)水閥門，保持常流水，水流速0.2 L·min-1；6時(shí)至18時(shí)靜水養(yǎng)殖，減少青蟹的應(yīng)激。暫養(yǎng)期間，水溫為23.9±1.2℃，pH 7.8±0.2，鹽度22.1±0.5，溶解氧7.8±0.3 mg L-1。每天觀察青蟹的攝食情況和活動(dòng)情況。

1.1.2 餌料制備

實(shí)驗(yàn)設(shè)置4種餌料(見表1)：青蟹配合飼料(天邦全熟化配合飼料，crab compound feed，CF)、活縊蟶(Sinonovaculaconstricta，SC)、雜魚(鰱，Hypophthalmichthysmolitrix，HM)、鰻魚飼料(健馬牌幼鰻配合飼料，eel feed， EF)。根據(jù)擬穴青蟹幼蟹的攝食特點(diǎn)，飼料應(yīng)為粒徑≤3 mm的沉性顆粒飼料。將鰻魚飼料加水和羧甲基纖維素鈉，放入小型電動(dòng)擠壓顆粒機(jī)，制成鰻魚飼料顆粒，之后放入烘箱60 ℃烘干至含水量小于10%，自然冷卻后密封冷藏備用。

表1 四種餌料的常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及養(yǎng)殖管理

選取規(guī)格相近、活力較好的擬穴青蟹240只(雄蟹120只，雌蟹120只)，隨機(jī)分成4組，每組投喂1種餌料。每種餌料實(shí)驗(yàn)組設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20只青蟹，共計(jì)60只(雄蟹30只，雌蟹30只)。養(yǎng)殖管理同暫養(yǎng)期間一致。養(yǎng)殖于2019年9月7日開始，共進(jìn)行56 d。每天觀察青蟹的攝食情況和活動(dòng)情況，記錄褪殼及死亡情況。

1.2.2 樣品收集與分析

8周的養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，記錄每組的存活數(shù)及質(zhì)量。每個(gè)餌料組在每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)各取4只蟹(2只雄蟹，2只雌蟹)，共12只蟹。將蟹放置于解剖盤中，用酒精進(jìn)行體表消毒。用抗凝劑潤(rùn)洗過的無菌注射器從第三步足基關(guān)節(jié)處取血，將血淋巴與抗凝劑1∶1混勻，4 ℃下8000 r/min離心10 min[12]，取上清液用于血清生化指標(biāo)及SOD測(cè)定。解剖蟹體取肝胰腺、鰓及肌肉，液氮速凍后于-80 ℃保存，其中肝胰腺用于肝胰腺生化指標(biāo)及消化酶活力測(cè)定，鰓用于Na+K+-ATP酶活力測(cè)定。

生化酶活測(cè)定：胃蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活性測(cè)定均按照試劑盒(南京建成生物工程研究所)操作步驟準(zhǔn)確測(cè)定。超氧化物歧化酶(SOD)和Na+K+-ATP酶采用索萊寶生物試劑盒，按照廠家提供的說明書進(jìn)行測(cè)定。 血清生化指標(biāo)及肝胰腺生化指標(biāo)采用邁瑞生化分析儀(邁瑞，BS390)進(jìn)行測(cè)定。

1.3 數(shù)據(jù)分析

生長(zhǎng)性能計(jì)算公式如下：

特定生長(zhǎng)率(SGR,% ·d-1)=100×(lnWt-lnW0)/t

(1)

肝胰腺指數(shù)(HSI,%)=100×Wh/Wt

(2)

成活率(SR,%)=100×Nt/N0

(3)

式中，W0為初始平均質(zhì)量，g；Wt代表青蟹的終末平均質(zhì)量，g；N0代表青蟹初始數(shù)量;Nt代表青蟹的終末數(shù)量；t為實(shí)驗(yàn)天數(shù)，d。

采用SPSS 22.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以單因素方差分析方法檢驗(yàn)不同餌料投喂對(duì)擬穴青蟹生長(zhǎng)、生理生化等指標(biāo)的差異顯著性，以Pearson方法分析相關(guān)性，取P<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 不同餌料對(duì)擬穴青蟹生長(zhǎng)性能的影響

不同餌料投喂56 d后，擬穴青蟹的特定生長(zhǎng)率、肝胰腺指數(shù)及成活率結(jié)果見表2。在整個(gè)養(yǎng)殖期間，縊蟶組的特定生長(zhǎng)率最大，為(1.15±0.12) %·d-1，顯著大于其他3組(P<0.05)，其余3組之間無顯著差異。肝胰腺指數(shù)則是配合飼料組最高，4個(gè)餌料組之間無顯著差異。成活率則是雜魚組最高(55.00%)，鰻魚飼料組(53.33 %)次之，縊蟶組(48.33%)和配合飼料組(48.33%)最低。各餌料組之間，青蟹的成活率無顯著差異。

表2 不同餌料對(duì)擬穴青蟹特定增長(zhǎng)率、肝胰腺指數(shù)的影響

2.2 不同餌料對(duì)擬穴青蟹肝胰腺及血清生化指標(biāo)的影響

擬穴青蟹血清生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果顯示(表3)，總蛋白(TP)含量雜魚組最高，其次是縊蟶組、配合飼料組、鰻魚飼料組，其中鰻魚飼料組的總蛋白含量顯著低于其他三組(P<0.05)。無機(jī)磷(P)含量，縊蟶組和鰻魚飼料組顯著高于雜魚組和配合飼料組(P<0.05)。鐵(Fe)、鎂(Mg)、白蛋白(ALB)和鈣(Ca)含量，各組之間無顯著差異(P>0.05)。

表3 不同餌料對(duì)擬穴青蟹血清生化指標(biāo)的影響

擬穴青蟹肝胰腺生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果顯示(表4)，總蛋白(TP)、葡萄糖(Glu)及鎂(Mg)含量各組之間無顯著差異。白蛋白含量鰻魚飼料組最低，為0.64 g·L-1，顯著低于其余3組(P<0.05)?？偰懝檀?TC)含量也是鰻魚飼料組最低，顯著低于雜魚組(P<0.05)，其余各組之間差異不顯著(P>0.05)。甘油三酯(TG)含量，鰻魚飼料組顯著低于其余3組(P<0.05)。無機(jī)磷(P)含量，縊蟶組和配合飼料組顯著高于雜魚組(P<0.05)；鐵離子(Fe)含量，雜魚組顯著低于其他3個(gè)養(yǎng)殖組(P<0.05)。

表4 不同餌料對(duì)擬穴青蟹肝胰腺生化指標(biāo)的影響

2.3 不同餌料對(duì)擬穴青蟹生化酶活的影響

不同餌料對(duì)擬穴青蟹SOD和Na+-K+-ATP酶活力的影響見圖1，圖2?？O蟶組SOD酶活力顯著高于雜魚組(P<0.05)，其余各組之間差異不顯著(P>0.05)?？O蟶組Na+-K+-ATP酶活力顯著高于鰻魚飼料組(P<0.05)，其余各組之間差異不顯著(P>0.05)。

圖1 不同餌料對(duì)擬穴青蟹超氧化物歧化酶活力的影響

圖2 不同餌料對(duì)擬穴青蟹Na+K+-ATP酶活力的影響

對(duì)擬穴青蟹肝胰腺消化酶活力測(cè)定后發(fā)現(xiàn)(圖3)，縊蟶組胃蛋白酶(Protease)活力最高，但各組之間差異不顯著(P>0.05)。脂肪酶活力(LPS)，雜魚組最高，其余三組依次為縊蟶組、鰻魚飼料組、配合飼料組，其中雜魚組脂肪酶活力顯著高于其他各組(P<0.05)。雜魚組淀粉酶(AMS)活力最高，但各組之間差異不顯著(P>0.05)。

圖3 不同餌料對(duì)擬穴青蟹蛋白酶(a)、脂肪酶(b)及淀粉酶(c)活力的影響

2.4 相關(guān)性分析

表5列出各組胃蛋白酶與特定生長(zhǎng)率的相關(guān)性指數(shù)。雜魚組特定生長(zhǎng)率與胃蛋白酶活力之間存在顯著相關(guān)性(R=0.767,P<0.05)，其余各組特定生長(zhǎng)率和消化酶之間均無顯著相關(guān)性(P>0.05)。

表5 胃蛋白酶與特定生長(zhǎng)率的相關(guān)性分析

3 討論

3.1 不同餌料對(duì)擬穴青蟹生長(zhǎng)性能的影響

縊蟶組的擬穴青蟹特定生長(zhǎng)率最高，這與養(yǎng)殖期間縊蟶組擬穴青蟹的攝食情況與營(yíng)養(yǎng)輸入相吻合?？O蟶組的蛋白質(zhì)攝入量較高，使得擬穴青蟹生長(zhǎng)較快。但肝胰腺指數(shù)則是青蟹配合飼料組和鰻魚飼料組較高，可能是因?yàn)榍嘈放浜巷暳虾亡狋~飼料脂肪水平較高，促進(jìn)了肝胰腺的脂肪積累，這與楊麗麗[13]的研究結(jié)果相似，即高蛋白質(zhì)的餌料能促進(jìn)擬穴青蟹生長(zhǎng)，但肝胰腺脂肪儲(chǔ)存較低，肝胰腺指數(shù)偏低。雖然雜魚的蛋白質(zhì)含量較高[11]，但其適口性較差，導(dǎo)致雜魚組的攝食量較低，這可能是雜魚組青蟹生長(zhǎng)較慢的重要原因之一。

3.2 不同餌料對(duì)擬穴青蟹肝胰腺及血清生化指標(biāo)的影響

有研究表明，不同餌料會(huì)對(duì)動(dòng)物的血清血清生化指標(biāo)造成影響[14-15]。血清中TP、ALB含量升高是機(jī)體蛋白質(zhì)代謝旺盛的表現(xiàn)[16]?？O蟶組與雜魚組血清中的TP及ALB含量較高，表明這兩組青蟹蛋白質(zhì)代謝旺盛，結(jié)合其生長(zhǎng)情況及餌料營(yíng)養(yǎng)成分，我們認(rèn)為縊蟶組與雜魚組的情況不同：縊蟶組將更多的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化為自身營(yíng)養(yǎng)，而白鰱的碳水化合物含量很低，蛋白質(zhì)更多用于能量代謝，這也比較符合各組青蟹的生長(zhǎng)情況。有研究表明，水生甲殼動(dòng)物血淋巴中的糖類、脂類和總蛋白(TP)等代謝水平會(huì)對(duì)其離子轉(zhuǎn)運(yùn)供能產(chǎn)生影響，進(jìn)而影響滲透壓[17]；對(duì)三疣梭子蟹的研究也顯示，血清Glu、TG及TP均與滲透壓調(diào)節(jié)密切相關(guān)[18]。本研究中，鰻魚飼料組血清TP含量顯著低于其余各組，表明該組的滲透壓調(diào)節(jié)可能受到影響。

肝胰腺指標(biāo)中，TP和ALB則是青蟹配合飼料組最高。膽固醇(TC)是性激素、蛻皮激素腎上腺皮質(zhì)類固醇激素及維生素D等活性物質(zhì)的前體，在維持甲殼動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育、內(nèi)分泌及生殖中發(fā)揮重要作用。甘油三酯(TG)是青蟹幼體的主要脂類組成，是幼體能量?jī)?chǔ)存和利用的主要形式[19]。在本試驗(yàn)中，青蟹配合飼料組的TG含量最高，這與肝胰腺指數(shù)的測(cè)定結(jié)果一致，從另一個(gè)方面也說明配合飼料能促進(jìn)青蟹肝胰腺脂類的積累，這可能與青蟹配合飼料的脂肪酸含量及脂肪源有關(guān)。肝胰腺是大部分海洋蟹類的鈣儲(chǔ)存器[20]，三疣梭子蟹的肝胰腺在鈣儲(chǔ)存及蛻殼后的殼硬化中起重要作用[21]。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，縊蟶組青蟹的肝胰腺鈣含量最高，這可能與青蟹對(duì)縊蟶殼的攝食有關(guān)。

3.3 不同餌料對(duì)擬穴青蟹生化酶活力的影響

SOD可以清除生物體內(nèi)多余的自由基，保證動(dòng)物機(jī)體內(nèi)部的穩(wěn)態(tài)，還在抗衰抗炎方面有重要作用[22]。Na+和Cl-是廣鹽性蟹類血淋巴滲透壓形成的主要物質(zhì)[23]，而Na+-K+-ATP酶是轉(zhuǎn)運(yùn)Na+的重要酶類。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，雜魚組的SOD活力最低，說明其血清清除自由基的能力較弱，而該組Na+-K+-ATP酶活力卻較高，說明了雜魚組擬穴青蟹的免疫功能可能受到抑制。鰻魚飼料組Na+-K+-ATP酶活力最低，說明鰻魚飼料可能影響了擬穴青蟹的滲透壓調(diào)節(jié)機(jī)制，與血清TP指標(biāo)的結(jié)果一致，但具體原因尚不清楚。

消化酶活力是反應(yīng)蟹類對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化和吸收能力的重要指標(biāo)，可以間接反應(yīng)蟹類的生理狀態(tài)。餌料作為蟹類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的主要來源，是消化酶活力的重要影響因素[24-26]。有研究表明，在餌料營(yíng)養(yǎng)成分在一定范圍內(nèi)時(shí)，蟹類蛋白酶會(huì)隨餌料蛋白質(zhì)水平的升高而升高[27-28]。本研究中的縊蟶組、鰻魚飼料組和青蟹配合飼料組的蛋白酶活力較高，推斷可能是由于這幾種餌料的蛋白質(zhì)水平較高引起的。雖然雜魚組的蛋白酶活力也很高，但該實(shí)驗(yàn)組的原因與其他幾組不同，結(jié)合雜魚組殘餌較多的情況，可能是由于適口性差，導(dǎo)致青蟹攝食的蛋白質(zhì)較少，無法滿足青蟹的生長(zhǎng)發(fā)育需求，青蟹需要提高蛋白酶活力以從餌料中攝入更多的蛋白質(zhì)。在草魚[29]、日本囊對(duì)蝦[30]中也有類似發(fā)現(xiàn)，比如在日本囊對(duì)蝦研究中，鹵蟲無節(jié)幼體的蛋白質(zhì)含量高于角毛藻，而投喂角毛藻的日本囊對(duì)蝦幼體胰蛋白酶活力比投喂鹵蟲無節(jié)幼體的高出6倍以上。

脂肪酶方面，雜魚組脂肪酶活力顯著高于其他各組(P<0.05)。但對(duì)比各個(gè)餌料組的脂肪投喂水平，與蛋白質(zhì)相似，雜魚組攝入的脂肪較少，因此推斷可能較高的脂肪酶活力是對(duì)低脂肪餌料的一種適應(yīng)，以提高餌料脂肪的利用率。

一般來說，蟹類消化酶活力中，肝胰腺蛋白酶活性最高，淀粉酶活力高于纖維素酶，脂肪酶活力最低[31-33]。但本研究中消化酶活力的絕對(duì)值與之不同，具體表現(xiàn)在脂肪酶活力較高與淀粉酶活力較低。在十足類卵巢發(fā)育期間，肝胰腺儲(chǔ)存的脂肪，可能用于卵巢發(fā)育[34]?？紤]到取樣時(shí)，青蟹性腺開始發(fā)育，肝胰腺中的脂肪可能用于性腺的發(fā)育，所以肝胰腺脂肪酶活力較高。而淀粉酶活力較低則可能是因?yàn)樗疁亻_始降低，青蟹作為變溫動(dòng)物，水溫的降低使其代謝降低，對(duì)糖類的需求降低，使得淀粉酶活性較低。脂肪酶和淀粉酶活力的變化也說明，蟹類消化酶的活力與其生理代謝過程和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)需求密切相關(guān)。

3.4 相關(guān)性

本研究中，雜魚組特定生長(zhǎng)率與胃蛋白酶活力呈顯著正相關(guān)，結(jié)合該組胃蛋白酶活力及特定生長(zhǎng)率數(shù)據(jù)，進(jìn)一步說明雜魚組擬穴青蟹的蛋白質(zhì)攝入不足，蛋白質(zhì)的攝入量已經(jīng)成為決定雜魚組擬穴青蟹特定生長(zhǎng)率的重要因素。

4 小結(jié)

結(jié)合生長(zhǎng)性能、生化酶活力等參數(shù)，縊蟶投喂的效果最好；鰻魚飼料及雜魚會(huì)對(duì)擬穴青蟹的部分血清生化指標(biāo)及酶活力造成負(fù)面影響。青蟹配合飼料具有來源穩(wěn)定、質(zhì)量可控及保存方便等優(yōu)勢(shì)且在肝胰腺指數(shù)及肝胰腺TG含量方面的優(yōu)勢(shì)較大。本研究為蟹公寓養(yǎng)殖擬穴青蟹的餌料選擇提供了參考。