黃翔

摘要：目的：探究不同微生物檢驗(yàn)法對(duì)結(jié)核桿菌檢驗(yàn)效果。方法：將肺結(jié)核患者作為本次研究對(duì)象，對(duì)患者采用半巢式實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增法、抗酸染色直接涂片法、結(jié)核菌固體培養(yǎng)基（羅氏）培養(yǎng)法三種檢測(cè)方法，將病理診斷作為金標(biāo)準(zhǔn)，分析上述三種方法的檢出陽(yáng)性率。結(jié)果：半巢式實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增法檢出陽(yáng)性率高于抗酸染色直接涂片法、結(jié)核菌固體培養(yǎng)基（羅氏）培養(yǎng)法陽(yáng)性率（P<0.05）。結(jié)論：在結(jié)核桿菌的檢驗(yàn)方法中，半巢式實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增法的敏感度和特異度更高，能夠利于疾病的早期治療，值得研究和推廣。

關(guān)鍵詞：不同微生物檢驗(yàn)法;結(jié)核桿菌;檢驗(yàn)效果

結(jié)核桿菌作為導(dǎo)致結(jié)核病的病原體，其傳播途徑較多，比如消化道、皮膚和呼吸道等，導(dǎo)致機(jī)體受到侵犯，引起多種組織器官的結(jié)核病，其中以通過呼吸道引起的肺結(jié)核最為常見。目前臨床對(duì)于結(jié)核桿菌的檢出陽(yáng)性率是診斷結(jié)核病的標(biāo)準(zhǔn)，能夠?yàn)榧膊〉脑缙谠\斷和治療提供重要參考依據(jù)，但在實(shí)驗(yàn)室檢查過程中，由于分枝桿菌屬的細(xì)菌細(xì)胞壁脂質(zhì)含量十分高，導(dǎo)致大量的分枝桿菌酸在肽聚糖層的外層圍繞，對(duì)染料的穿入造成影響。目前臨床一般選擇傳統(tǒng)的抗酸染色法進(jìn)行檢驗(yàn)，但檢出陽(yáng)性率較低，并且還可出現(xiàn)漏診情況，而隨著實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)的不斷提高，新的診斷方式也不斷出現(xiàn)。本文目的在于探究不同微生物檢驗(yàn)法對(duì)結(jié)核桿菌檢驗(yàn)效果，具體內(nèi)容見下文。

1.資料/方法

1.1基線資料

本次研究對(duì)象為肺結(jié)核患者，共82例，研究起始時(shí)間在2021年5月、終止時(shí)間在2022年1月。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）經(jīng)影像學(xué)診斷確診為肺結(jié)核;（2）患者和家屬在參加研究前均簽署知情同意書;（3）此次研究獲得醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并其他肺部感染疾病，比如肺炎、支氣管擴(kuò)張、肺癌、支氣管異物癥;（2）伴有精神異常?；颊吣挲g在18～94歲之間，平均年齡（56.51±2.31）歲，其中男性38例、女性44例。

1.2方法

半巢式實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增法：將1mL痰液置入試管內(nèi)，將2mL Xpert消化液加入試管中，并搖震15到30秒鐘，將其置于室溫內(nèi)15分鐘，保存待檢。用無(wú)菌吸管取2mL代檢樣本加入反應(yīng)盒內(nèi)，再將反應(yīng)盒放置在美國(guó)Cepheid公司所產(chǎn)的Xpert儀反應(yīng)艙內(nèi)，提取DNA，實(shí)施檢測(cè)和擴(kuò)增操作，并選擇專用軟件對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析。

抗酸染色直接涂片法：按照痰涂片鏡檢實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)手冊(cè)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行涂片，選擇改良?jí)A性復(fù)紅法進(jìn)行染色操作，最后實(shí)施抗酸桿菌鏡檢，按照鏡檢結(jié)果分級(jí)報(bào)告、標(biāo)準(zhǔn)報(bào)告結(jié)果。

結(jié)核菌固體培養(yǎng)基（羅氏）培養(yǎng)法;將4%NAOH消化液加入痰液中，使用振蕩器進(jìn)行振蕩促進(jìn)痰液化，處理時(shí)間應(yīng)在15-20分鐘。選擇前處理消化后痰液0.1mL，實(shí)施無(wú)菌操作，將其接種在培養(yǎng)基斜面上，保證每份標(biāo)本均同時(shí)接種2支酸性改良羅氏培養(yǎng)基，將其放置在37攝氏度的溫箱內(nèi)，每周對(duì)菌落生長(zhǎng)情況進(jìn)行觀察1次，對(duì)于存在菌落生長(zhǎng)的標(biāo)本，需采用抗酸染色明確是否為分枝桿菌。

1.3觀察指標(biāo)

分析三種檢測(cè)方法的檢測(cè)陽(yáng)性率。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

在本研究數(shù)據(jù)中，計(jì)量資料用（x±s）形式表示，用T值進(jìn)行檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以（%）的形式表示，并以X2檢驗(yàn)，核算軟件：SPSS28.00，P<0.05，說明以上數(shù)據(jù)存在明顯差異。

2. 結(jié)果

半巢式實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增法檢出陽(yáng)性率為95.12%、抗酸染色直接涂片法檢出陽(yáng)性率為63.41%、結(jié)核菌固體培養(yǎng)基（羅氏）培養(yǎng)法檢出陽(yáng)性率為74.39%，前者檢出率高于后兩者（P<0.05）。如表1：

3.討論

肺結(jié)核的發(fā)病現(xiàn)已成為嚴(yán)重的防治問題，故應(yīng)更加重視該疾病的早期診斷，并獲得結(jié)核病的病原體。對(duì)于肺結(jié)核疾病的診斷而言，結(jié)核分枝桿菌作為診斷金標(biāo)準(zhǔn)，但由于其實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，導(dǎo)致患者延誤治療或無(wú)法得到正確治療。故此，尋求更為簡(jiǎn)捷、快速、方便的診斷方式十分重要。

目前臨床對(duì)于結(jié)核桿菌的診斷方式較多，包括羅氏固體培養(yǎng)、熒光染色顯微鏡檢查、液體培養(yǎng)基培養(yǎng)檢查、分子生物學(xué)檢查、涂片檢查、半巢式實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增法檢查等，其中半巢式實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增法作為分子生物學(xué)檢查方法，隨著分子診斷技術(shù)的不斷提高，其主要是使用基于GeneXpert檢測(cè)系統(tǒng)的半巢式全自動(dòng)實(shí)時(shí)熒光體外檢測(cè)技術(shù)，其通過對(duì)rpoB的突變狀態(tài)進(jìn)行檢測(cè)，從而對(duì)患者的狀態(tài)進(jìn)行判斷。在本次結(jié)果中，將三種檢測(cè)方法進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)半巢式實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增法的檢出率最高，究其原因：傳統(tǒng)的痰涂片染色法過程較為簡(jiǎn)陋，并且涂片質(zhì)量、顯微鏡標(biāo)本質(zhì)量均可受到外界因素的干擾，一般需要大量的菌數(shù)目標(biāo)本才能獲得陽(yáng)性結(jié)果，疾病檢出率較低;而結(jié)核菌固體培養(yǎng)基（羅氏）培養(yǎng)法的步驟十分復(fù)雜，在操作過程中容易受到液體懸浮問題的干擾，導(dǎo)致有效樣本丟失。而PCR法具有較強(qiáng)的敏感性，并且特異度較高，能夠早期發(fā)現(xiàn)結(jié)核病。

綜上所述，半巢式實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增法能夠有效檢出結(jié)核桿菌，為疾病的治療提供重要參考依據(jù)，值得進(jìn)一步推廣與探究。

【參考文獻(xiàn)】：

[1]吳聯(lián)朋.RNA恒溫?cái)U(kuò)增實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)痰標(biāo)本結(jié)核分枝桿菌對(duì)肺結(jié)核診斷的應(yīng)用價(jià)值[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2021，31（20）：2469-2472.

[2]肖傳宇，侯文華，郭傳龍.Xpert Mtb/RIF檢測(cè)對(duì)肺結(jié)核診斷的價(jià)值探討[J].現(xiàn)代科學(xué)儀器，2021，38（5）：157-160.

[3]林律，平國(guó)華，車洋，等.PCR熒光探針技術(shù)在寧波地區(qū)結(jié)核快速診斷中的應(yīng)用價(jià)值分析[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2021，31（19）：2345-2347.

[4]楊眉，陳昱，唐源.巴氏染色后的涂片褪色行抗酸染色在結(jié)核診斷中的應(yīng)用[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2021，37（6）：745-746.

[5]田海兵，盧大儒.基層醫(yī)院應(yīng)用GeneXpert MTB/RIF檢測(cè)診斷早期肺結(jié)核的價(jià)值分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2021，18（17）：2475-2478.