王 叢 楊 旭 唐艷芬

（南京中醫(yī)藥大學南通附屬醫(yī)院，江蘇 南通 226000）

急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）是排除心源性因素后出現(xiàn)頑固性低氧血癥和呼吸窘迫為特征的危重疾病[1]。ARDS的出現(xiàn)不僅僅是肺內(nèi)因素，外科手術(shù)、膿毒癥、大量輸血等肺外因素均可出現(xiàn)ARDS，核心病理改變是炎癥反應失衡、肺血管內(nèi)皮和肺泡上皮屏障受損[2-4]。隨著醫(yī)療水平越來越高，呼吸機支持、體外膜肺氧合等技術(shù)手段不斷進步，ARDS病死率較前下降，但仍高達30%～50%左右，因此ARDS的治療仍是臨床難題[5]。隨著研究的不斷深入，人們發(fā)現(xiàn)中醫(yī)藥在治療急危重癥中起到很大作用，尤其是能阻斷輕癥患者向重癥轉(zhuǎn)化，為中醫(yī)藥治療ARDS提供有力支持。本實驗繼續(xù)探索中藥制劑金蕎麥水劑對ARDS大鼠肺組織炎癥介質(zhì)釋放和肺水腫情況的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SPF級Wistar大鼠50只，雄性180～220 g，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，許可證號SCXK（京）2016-0006，溫度（22±4）℃、相對濕度40%～70%、自然光線、普通專用飼料喂養(yǎng)，24 h自由攝水、取食、適應性飼養(yǎng)7 d，動物倫理：S20210224-064。

1.2 實驗藥物 金蕎麥水劑由南通市中醫(yī)院藥劑科按照2005版《中國藥典》，應用金蕎麥單品嚴格進行制作，成品為紅棕色液體，具有清熱解毒、排膿祛瘀、止咳平喘的作用。生產(chǎn)批號20210113，規(guī)格500 mL/瓶，正常成人用量：40 mL/次。

1.3 試劑與儀器 脂多糖（LPS）購自上海源葉公司；腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）、白細胞介素-10（IL-10）ELISA試劑盒均購自Abcam公司；蘇木素、伊紅購自索萊寶公司；手術(shù)器械購自上海醫(yī)療器械有限公司；AF-800電子精密天平購自上海精密公司天平儀器廠；電熱恒溫箱購自上海一恒公司；實驗用微波爐格蘭仕公司（中國）；moticam3000顯微攝影成像系統(tǒng)（美國）。

1.4 模型制備 將50只Wistar雄性大鼠隨機分為空白組10只、模型組10只及金蕎麥高、中、低劑量組各10只。模型組、金蕎麥各組大鼠均氣管內(nèi)滴注3.00 mg/kg LPS 100 μL造模，翻轉(zhuǎn)大鼠使脂多糖溶液均勻分布于大鼠兩肺，留置6 h后大鼠出現(xiàn)呼吸急促，萎靡少動、豎毛、腹瀉等造模成功[6]。

1.5 給藥方法 按照人與大鼠用藥換算公式（《藥理實驗方法學》）換算用藥劑量，金蕎麥高、中、低劑量組分別灌胃金蕎麥水劑12、6、3 mL/kg，空白組、模型組灌胃生理鹽水6mL/kg，每次給藥前重新測量大鼠體質(zhì)量，早、晚各給藥1次，連續(xù)給藥3 d。

1.6 標本采集與檢測 各組隨機選取8只大鼠，稱體質(zhì)量后，用10%水合氯醛（0.4 mL/100 g）腹腔麻醉。無睫毛反射后，將大鼠仰臥于操作臺，固定門齒及四肢，胸腹部消毒備皮，沿腹部正中線切開約3 cm切口，找到腹主動脈，接負壓采血器，收集所需血液后拔出采血針，延腹部正中線向胸部剪開，取出肺組織進行相應檢測。1）氧合指數(shù)測定。將采集的血液做血氣分析，計算氧合指數(shù)。2）肺組織病理觀察。剪取右下肺組織，用4%多聚甲醛固定，經(jīng)脫蠟、染色、脫水等制成石蠟切片，HE染色后鏡下觀察。3）肺組織濕干比評估肺水腫。將肺組織的重量標記濕重（W），隨后將同標本肺組織用錫紙包裹好放入恒溫烤箱中，設置90℃，烘烤24 h后取出，稱重記錄干重（D），計算肺組織濕干重比（W/D）[7]。4）ELISA 檢測法肺組織中炎性因子。按ELISA試劑盒要求經(jīng)設置標準孔和樣品孔、加樣、加酶、溫育、配液及洗滌、顯色、終止反應、打開酶標儀450 nm波長處檢測肺組織中IL-6、IL-10和TNF-α的含量。

1.7 統(tǒng)計學處理 應用SPSS19.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間比較采用LSD-t檢驗，兩組內(nèi)比較采用兩獨立樣本t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義，P＜0.01為差異具有極顯著性統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠氧合指數(shù)、WBC及NEU%比較 見表1。金蕎麥高、中、低劑量組與模型組比較氧合指數(shù)上升，白細胞計數(shù)、中性粒百分率均下降，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），金蕎麥高、中、低劑量組之間進行比較，高劑量組療效更顯著，各組差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

表1 各組大鼠氧合指數(shù)、WBC、NEU%比較（±s）

表1 各組大鼠氧合指數(shù)、WBC、NEU%比較（±s）

注：與模型組比較，*P＜0.05；與高劑量組比較，#P＜0.05；與中劑量組比較，△P＜0.05。下同。1 mmHg≈0.133 kPa。

組別空白組模型組金蕎麥高劑量組金蕎麥中劑量組金蕎麥低劑量組n 8 8 8 8 8 PaO2/FiO2（mmHg）436.31±9.51 261.90±28.11 388.69±31.06*333.93±15.36*#297.02±16.49*#△WBC（×109/L）6.35±0.83 15.35±1.19 9.37±1.46*12.45±0.82*#13.75±1.18*#△NEU%52.51±1.75 91.53±1.83 73.57±2.41*82.01±4.55*#86.68±2.81*#△

2.2 各組大鼠肺組織炎性因子和肺濕/干重比的比較 見表2。金蕎麥高、中、低劑量組與模型組比較，TNF-α、IL-6、IL-10釋放明顯減少、肺組織濕/干重比低于模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；金蕎麥高、中、低劑量組之間比較，療效更顯著，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

表2 各組大鼠肺組織濕/干重比及炎性因子水平比較（±s）

表2 各組大鼠肺組織濕/干重比及炎性因子水平比較（±s）

組別空白組模型組金蕎麥高劑量組金蕎麥中劑量組金蕎麥低劑量組n 8 8 8 8 8 W/D 4.33±0.27 7.09±0.34 4.68±0.31*5.88±0.31*#6.48±0.47*#△TNF-α（pg/mL）25.46±1.04 93.95±2.04 60.89±2.76*71.94±4.31*#83.06±4.38*#△IL-6（pg/mL）28.34±0.97 83.37±3.83 44.67±1.94*59.54±2.92*#70.24±2.47*#△IL-10（pg/mL）44.39±2.26 100.85±2.55 62.73±2.42*73.75±2.01*#85.88±4.31*#△

2.3 各組大鼠肺組織病理變化 見圖1?？瞻捉M：病理切片均肺泡完好，視野中未見肺泡塌陷，未見水腫、充血及炎性滲出液，未見明顯肺泡壁增厚。模型組：出現(xiàn)肺泡塌陷嚴重，充血嚴重的情況，可見炎性浸潤，出現(xiàn)肺泡壁增厚。金蕎麥高劑量組：肺泡明顯充盈，塌陷明顯減輕，水腫減輕，炎性滲出少，充血情況減輕。金蕎麥中劑量組：肺組織少量充血水腫及炎癥滲出，細胞塌陷較高劑量組嚴重。金蕎麥低劑量組：可見明顯充血水腫但少于模型組。

圖1 各組大鼠肺組織HE染色變化（100倍）

3 討 論

ARDS歸屬于中醫(yī)學“喘證”“暴喘”“肺衰”范疇。發(fā)病機制主要是人體感受邪毒，痰熱互結(jié)，因肺為華蓋，首先侵犯于肺，導致肺宣發(fā)肅降功能失常，致肺絡郁閉不通，咳喘時作，痰、飲、熱、瘀是加重ARDS的相關因素，加之正氣虛衰導致病情遷延難愈，發(fā)為本虛標實之證[8-9]。本實驗主要基于ARDS病初標實，為外邪、痰濁、瘀毒之邪，壅滯于肺，使肺不主氣、肺失宣降的病理基礎，治療ARDS的方法主要為：清痰瀉熱、宣肺化飲、解瘀通經(jīng)等，提出金蕎麥水劑可以改善ARDS標實階段肺組織炎性因子釋放、減輕肺組織水腫的假設，并運用現(xiàn)代科學手段對假設進行驗證，進一步探索金蕎麥治療ARDS的機制。

中藥制劑金蕎麥水劑是南通市中醫(yī)院的院內(nèi)制劑，由成云龍先生研制至今已近50年，其主要性狀為紅棕色液體，具有清熱解毒、排膿祛瘀、止咳平喘的作用，金蕎麥水劑被廣泛應用于臨床，尤其是熱毒襲肺和痰熱壅肺引起的呼吸系統(tǒng)疾病，療效得到廣大患者的認可。金蕎麥中富含黃酮類、萜類、酶類及多種揮發(fā)性成分，其中黃酮類是其主要有效成分，在治療多種疾病時都具有積極的作用，其中清除自由基抗氧化、抗菌、抗炎、抗腫瘤、促進氣管纖毛運動的作用被多方醫(yī)家所證實[10-11]，并且從金蕎麥水劑、酒劑中提取雙聚原矢車菊苷元制成金蕎麥片，廣泛應用于臨床。

本實驗建立在臨床觀察基礎上[12-15]，以高、中、低3種劑量金蕎麥水劑干預ARDS大鼠，通過與模型組比較闡述金蕎麥水劑對ARDS大鼠作用機制。與模型組比較，金蕎麥高、中、低劑量組血液中WBC降低、NEU%降低、氧合指數(shù)上升，肺組織中TNF-α、IL-6、IL-10釋放減少，說明金蕎麥可以減輕大鼠炎癥反應，降低感染程度，提高氧合指數(shù)；與模型組比較，金蕎麥高、中、低劑量組大鼠肺組織充血、水腫不同程度減輕、細胞塌陷減輕、炎性滲出減少，說明金蕎麥可以改善肺組織充血水腫，減輕炎性滲出；將金蕎麥高、中、低劑量組之間進行比較，金蕎麥高劑量組治療效果最為顯著，說明金蕎麥水劑治療效果與用藥劑量有關。綜上，金蕎麥水劑治療呼吸窘迫綜合征可能是通過減輕炎性因子釋放從而減輕肺充血水腫實現(xiàn)的。