雷 艷，郭秀歡，李 尹，劉傳鑫, 2*，袁瑞娟*

玉泉丸化學(xué)成分和藥理作用的研究進(jìn)展及質(zhì)量標(biāo)志物的預(yù)測(cè)分析

雷 艷1，郭秀歡1，李 尹1，劉傳鑫1, 2*，袁瑞娟1*

1.北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 100029 2.河南科技大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院內(nèi)分泌代謝中心河南省遺傳罕見(jiàn)病醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室國(guó)家代謝性疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心洛陽(yáng)分中心，河南 洛陽(yáng) 471000

玉泉丸是治療糖尿病的經(jīng)典名方，具有滋腎養(yǎng)陰、益氣生津和止渴除煩等功效，現(xiàn)代臨床常用來(lái)治療氣陰兩虛證糖尿病及其并發(fā)癥等，但對(duì)其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和藥理研究較少。對(duì)玉泉丸的化學(xué)成分和藥理作用的研究情況進(jìn)行綜述，并在此基礎(chǔ)上，結(jié)合本課題組前期工作基礎(chǔ)，基于中藥質(zhì)量標(biāo)志物（quality marker，Q-Marker）的“五原則”對(duì)玉泉丸的Q-Marker進(jìn)行預(yù)測(cè)分析，提出葛根素、大豆苷元、地黃苷D、五味子醇甲、五味子乙素、麥冬皂苷D、甘草素、甘草酸和甘草苷可作為玉泉丸的Q-Marker，后續(xù)可選擇這些成分為指標(biāo)對(duì)玉泉丸進(jìn)行全程質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)，并建立質(zhì)量溯源體系。

玉泉丸；化學(xué)成分；藥理作用；質(zhì)量標(biāo)志物；糖尿病；葛根素；大豆苷元；地黃苷D；五味子醇甲；五味子乙素；麥冬皂苷D；甘草素；甘草酸；甘草苷

糖尿病在中醫(yī)上屬消渴病范疇，基本病機(jī)為陰虛燥熱，臨床治療糖尿病時(shí)常將滋陰清熱貫穿于糖尿病治療始末。玉泉丸，出自清代葉天士的經(jīng)典名方，由《種富堂公選良方》卷二消渴中的玉泉散改良而成[1]，是《中醫(yī)糖尿病防治指南》中推薦用于糖尿病氣陰兩虛證的治療方劑[2]。玉泉丸是由葛根、地黃、天花粉、麥冬、五味子和甘草6味中藥組成的現(xiàn)代制劑濃縮丸，方中葛根清熱散結(jié)、生津止渴；地黃滋陰補(bǔ)腎；天花粉和麥冬清除燥熱、清養(yǎng)脾胃；五味子斂肺益氣；甘草調(diào)和諸藥。諸藥合用，共同發(fā)揮養(yǎng)陰生津、止渴除煩功效[3-4]。目前關(guān)于玉泉丸的研究多集中于該方治療2型糖尿病的臨床療效觀察上，其整方的化學(xué)成分和藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究較少。因此本文就近年來(lái)玉泉丸復(fù)方的化學(xué)成分和藥理作用進(jìn)行整理與分析，并基于質(zhì)量標(biāo)志物（quality marker，Q-Marker）的傳遞與溯源、有效、特有、可測(cè)和處方配伍的“五原則”理論[5]，結(jié)合課題組前期工作基礎(chǔ)，對(duì)玉泉丸的Q-Marker進(jìn)行預(yù)測(cè)分析，為完善玉泉丸的質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，建立全面的質(zhì)量控制體系提供參考依據(jù)。

1 主要化學(xué)成分

玉泉丸復(fù)方中化學(xué)成分復(fù)雜，常以一個(gè)整體通過(guò)其多成分、多靶點(diǎn)和多途徑等特點(diǎn)來(lái)發(fā)揮療效。目前對(duì)玉泉丸單味藥中化學(xué)成分的研究較多，但對(duì)其復(fù)方整體化學(xué)成分研究較為薄弱，且研究方法多集中于薄層鑒別和HPLC法等，系統(tǒng)性研究較少。李少光等[6]采用HPLC法確定了玉泉丸中含有葛根素、甘草苷、異甘草苷、大豆苷元和甘草酸5個(gè)成分；祁航等[7]通過(guò)建立HPLC指紋圖譜，指認(rèn)了玉泉丸中6種主要成分，包括葛根素、大豆苷元、毛蕊花糖苷、五味子醇甲、甘草酸和甘草苷；另外祁航[8]還采用UPLC-Q-TOF-MS定性分析方法，在正、負(fù)離子模式下通過(guò)玉泉丸專(zhuān)屬數(shù)據(jù)庫(kù)和質(zhì)譜數(shù)據(jù)匹配，鑒定出82種化合物，其中包括黃酮類(lèi)化合物39種、苯丙素類(lèi)化合物21種、皂苷類(lèi)10種、核苷類(lèi)3種、有機(jī)酸類(lèi)3種、萜類(lèi)4種、氨基酸類(lèi)1種、醛類(lèi)1種；另外本課題組[9]前期也采用UPLC-Q-TOF-MSE技術(shù)結(jié)合UNIFI軟件對(duì)玉泉丸75%醇提物中的主要化學(xué)成分進(jìn)行定性分析，從中鑒定出142個(gè)成分，其中18個(gè)成分來(lái)源于葛根，17個(gè)成分來(lái)源于地黃，7個(gè)成分來(lái)源于天花粉，24個(gè)成分來(lái)源于麥冬，28個(gè)成分來(lái)源于五味子，48個(gè)成分來(lái)源于甘草，包括葛根素、大豆苷元、4′-甲氧基葛根素、梓醇、毛蕊花糖苷、熊果酸、甲基麥冬黃烷酮A、五味子素、甘草酸和甘草素等重要成分。

2 藥理作用

2.1 對(duì)血糖、血脂和胰島素抵抗的影響

糖尿病在中醫(yī)學(xué)中屬于“消渴病”范疇，其病機(jī)主要在于陰津虧損，燥熱偏盛，陰虛為本，燥熱為標(biāo)，兩者互為因果，陰愈虛則燥熱愈盛，燥熱愈盛則陰愈虛。燥熱氣虛導(dǎo)致人體的調(diào)節(jié)控制能力下降，陰虛導(dǎo)致人體的平穩(wěn)狀態(tài)下降，對(duì)于糖尿病患者導(dǎo)致的是血糖穩(wěn)定性下降，波動(dòng)幅度增加。現(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果表明玉泉丸的速崩片劑型給藥糖尿病小鼠8周后，血糖下降明顯并且可以穩(wěn)定血糖水平[10]。但通過(guò)文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn)玉泉丸濃縮丸治療糖尿病時(shí)常與其他西藥聯(lián)合使用，玉泉丸濃縮丸能否在短時(shí)間內(nèi)以及單獨(dú)給藥從而達(dá)到血糖水平明顯降低仍沒(méi)有明確結(jié)論，因此玉泉丸單獨(dú)給藥對(duì)于改善高血糖的作用機(jī)制及基礎(chǔ)研究仍需進(jìn)一步探索。

高血糖常常伴隨高血脂癥狀，高血脂水平會(huì)導(dǎo)致外周器官對(duì)胰島素的敏感性進(jìn)一步下降，加重胰島素抵抗。并且脂質(zhì)代謝紊亂既與糖尿病大血管病變有關(guān)，還與糖尿病微血管病變密切相關(guān)。其中低密度脂蛋白（low density lipoprotein，LDL）是2型糖尿病脂代謝異常的主要特點(diǎn)。LDL顯著升高，自動(dòng)氧化糖基化過(guò)程增強(qiáng)，氧化LDL能被巨噬細(xì)胞識(shí)別并吞噬，使細(xì)胞內(nèi)膽固醇聚集，形成泡沫細(xì)胞，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化；此外，糖化LDL可直接與血管基質(zhì)蛋白結(jié)合，使基地膜增厚，血管壁彈性降低，氧化LDL和糖化LDL均可直接損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，增加凝血酶原活性，刺激血小板聚集，導(dǎo)致糖尿病血管并發(fā)癥發(fā)生[11-12]。并且胰島素抵抗也可導(dǎo)致LDL和三酰甘油水平升高，大動(dòng)脈就很容易產(chǎn)生動(dòng)脈粥樣硬化；還可與多種血漿和組織蛋白發(fā)生非酶糖化，如糖化血紅蛋白、糖化脂蛋白等，自由基產(chǎn)生增多，糖化終末產(chǎn)物的積聚從而導(dǎo)致微血管病變。病變因累及的部位不同也會(huì)出現(xiàn)不同的并發(fā)癥，當(dāng)累及腎臟時(shí)即可導(dǎo)致糖尿病腎?。划?dāng)累及到心臟時(shí)即可出現(xiàn)糖尿病心臟??；當(dāng)累及到神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)血管時(shí)即可導(dǎo)致糖尿病神經(jīng)病變等[13]。

因此有效控制血脂、促進(jìn)胰島素分泌是緩解糖尿病進(jìn)一步發(fā)展和胰島素抵抗的重要措施之一。傅大莉等[13]研究采用高脂飼料聯(lián)合鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）建立的2型糖尿病模型，大鼠血清三酰甘油、總膽固醇水平顯著升高，LDL也顯著升高，玉泉丸則可顯著降低2型糖尿病大鼠血清膽固醇和LDL水平。王大慶[14]也通過(guò)建立2型糖尿病大鼠模型，玉泉丸連續(xù)給藥，發(fā)現(xiàn)不同濃度的玉泉丸均能不同程度地降低糖尿病大鼠三酰甘油、總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇含量，并能升高血清胰島素和高密度脂蛋白膽固醇含量，改善葡萄糖耐量。這些研究結(jié)果均提示了玉泉丸具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，一方面可通過(guò)改善胰島素敏感性而發(fā)揮其防治糖尿病慢性并發(fā)癥的作用，另一方面也可通過(guò)調(diào)節(jié)脂代謝改善糖尿病大血管病變以及微血管病變等并發(fā)癥。

2.2 降低促炎因子細(xì)胞水平

糖尿病有不同的亞型，其中以2型糖尿病最為常見(jiàn)，約占90%。在2型糖尿病患者中，心血管并發(fā)癥尤其值得關(guān)注，因?yàn)樾难懿l(fā)癥是2型糖尿病患者發(fā)病率和死亡率增加的主要原因，而代謝失調(diào)和慢性炎癥被認(rèn)為是導(dǎo)致2型糖尿病患者心血管發(fā)病率和死亡率增加的原因。有研究表明白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）和腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor α，TNF-α）是β細(xì)胞損傷和胰島素抵抗的關(guān)鍵促炎介質(zhì)[12]，Westwell-Roper等[15]在高脂飼料喂養(yǎng)的胰島淀粉樣轉(zhuǎn)基因小鼠中，發(fā)現(xiàn)減少胰島巨噬細(xì)胞可以降低IL-1β的表達(dá)，提高β細(xì)胞分泌胰島素，并改善葡萄糖耐量。此外，研究結(jié)果還表明，TNF-α通過(guò)蛋白激酶B（protein kinase B，PKB）底物160的磷酸化受損抑制外周胰島素刺激的葡萄糖攝取，從而抑制全身胰島素介導(dǎo)的葡萄糖攝取和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。鄧銀泉等[3,16]的臨床研究還發(fā)現(xiàn)玉泉丸能降低糖尿病患者血漿中已升高的C反應(yīng)蛋白、TNF-α和IL-6等促炎細(xì)胞因子水平，提高機(jī)體的抗炎潛能，改善2型糖尿病癥狀和炎癥狀態(tài)。此外，由于炎癥反應(yīng)在糖尿病腎病發(fā)生過(guò)程中起到了重要的促進(jìn)作用，彭聰?shù)萚17]研究表明糖尿病腎病患者服用玉泉丸可以明顯降低尿微量白蛋白、24 h尿總蛋白、糖化血紅蛋白、TNF-α和IL-1水平，減少尿蛋白，從而起到保護(hù)腎臟功能、改善糖尿病腎病的作用。

2.3 保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞

血管內(nèi)皮損傷是糖尿病腎病發(fā)病的主要機(jī)制之一，一氧化氮和內(nèi)皮素是由血管內(nèi)皮細(xì)胞合成的一對(duì)具有拮抗效應(yīng)的血管活性物質(zhì)，對(duì)保持血管穩(wěn)態(tài)起關(guān)鍵作用。彭聰?shù)萚18]研究發(fā)現(xiàn)玉泉丸能夠明顯降低糖尿病患者內(nèi)皮素水平并升高一氧化氮水平，發(fā)揮保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞功能的作用，從而保護(hù)腎臟功能，改善糖尿病腎病。

2.4 其他

此外，玉泉丸對(duì)清除機(jī)體自由基和減少化學(xué)藥對(duì)肝臟毒性等方面也發(fā)揮了一定作用。在糖尿病，尤其是其并發(fā)癥防治中，重視體內(nèi)自由基的清除和阻止自由基引起的損傷具有十分重要的意義，吳鳳琪等[19]以清除二苯代苦味酰肼自由基（DPPH）活性及OH自由基引起的DNA損傷為指標(biāo)，用不同極性的提取劑熱回流提取復(fù)方玉泉丸有效成分，并用CuSO4-PhenVitC-H2O2-DNA化學(xué)發(fā)光體系測(cè)定DNA損傷保護(hù)作用，結(jié)果表明70%乙醇提取物能有效降低DNA損傷程度，并使DNA氧化損傷延遲，其機(jī)制與清除DPPH及OH自由基活性有關(guān)。另外，二甲雙胍片聯(lián)合玉泉丸能夠減少藥物對(duì)肝臟的不良反應(yīng)[20]，且玉泉丸對(duì)大鼠肝細(xì)胞色素P450酶活性有一定的誘導(dǎo)作用，因此主要通過(guò)肝CYP450酶代謝的藥物合用玉泉丸時(shí)，可能會(huì)使藥物在體內(nèi)代謝特征發(fā)生改變，對(duì)藥物的療效或毒性產(chǎn)生影響[21]。

3 Q-Marker預(yù)測(cè)分析

Q-Marker是劉昌孝院士[5]提出的新概念，是指存在于中藥材和中藥產(chǎn)品中固有的或加工制備過(guò)程中形成的，與中藥的功能屬性密切相關(guān)的化學(xué)物質(zhì)，可作為反映中藥安全性和有效性的標(biāo)示性物質(zhì)，進(jìn)而對(duì)復(fù)方制劑進(jìn)行質(zhì)量控制?？蓮馁|(zhì)量傳遞與溯源、成分特有性、成分有效性、復(fù)方配伍環(huán)境以及成分可測(cè)性五方面來(lái)論述中藥質(zhì)量標(biāo)志物研究和發(fā)現(xiàn)的路徑。基于該“五原則”，通過(guò)對(duì)相關(guān)文獻(xiàn)系統(tǒng)整理與分析，從而預(yù)測(cè)分析玉泉丸復(fù)方的中藥質(zhì)量標(biāo)志物。玉泉丸Q-Marker的發(fā)現(xiàn)研究路徑見(jiàn)圖1。

3.1 基于質(zhì)量傳遞與溯源的Q-Marker預(yù)測(cè)分析

本課題組前期采用液質(zhì)聯(lián)用法結(jié)合數(shù)據(jù)庫(kù)和文獻(xiàn)報(bào)道初步表征了玉泉丸中142個(gè)體外化學(xué)成分[9]。其中鑒定了來(lái)源于葛根中的18個(gè)成分，包括異黃酮類(lèi)、生物堿類(lèi)和簡(jiǎn)單苯丙素類(lèi)化合物等；地黃中17個(gè)成分，包括苯丙素類(lèi)、苷類(lèi)和環(huán)烯醚萜類(lèi)化合物等；天花粉中7個(gè)成分，包括有機(jī)酸類(lèi)和五環(huán)三萜類(lèi)化合物等；麥冬中24個(gè)成分，包括黃酮類(lèi)、三萜類(lèi)和苷類(lèi)化合物等；五味子中28個(gè)成分，包括木脂素類(lèi)、倍半萜內(nèi)酯類(lèi)和黃酮類(lèi)化合物等；甘草中48個(gè)成分，包括黃酮類(lèi)、生物堿、苯丙素類(lèi)、三萜類(lèi)和皂苷類(lèi)化合物。

接著，以玉泉丸中的“葛根”“地黃”“天花粉”“麥冬”“五味子”和“甘草”為關(guān)鍵詞，在TCMSP（https://tcmspw.com/tcmsp.php）數(shù)據(jù)庫(kù)中，根據(jù)藥動(dòng)學(xué)篩選條件：藥物口服生物利用度≥30%，類(lèi)藥性≥0.18進(jìn)行檢索，共篩選出121個(gè)活性成分。其中葛根中4個(gè)成分（包括芒柄花素、β-谷甾醇、3′-甲氧基大豆苷元和大豆苷元），地黃中2個(gè)成分（包括谷甾醇和豆甾醇），天花粉中2個(gè)成分（包括菠菜甾醇和仙人掌甾醇），五味子中21個(gè)成分（包括五味子酯甲、五味子素C、戈米辛A等），甘草中92個(gè)成分（包括甘草醇、甘草酸和刺芒柄花素等）。

圖1 基于“五原則”的玉泉丸Q-Marker發(fā)現(xiàn)的研究路徑

由于中藥是一個(gè)復(fù)雜的化學(xué)系統(tǒng)，其發(fā)揮藥效的前提應(yīng)該是活性成分能夠吸收進(jìn)入血液，進(jìn)而輸送到作用靶點(diǎn)。因此，中藥真正發(fā)揮藥效的活性成分與其所有的固有成分不同，只有從血中發(fā)現(xiàn)直接作用的活性物質(zhì)才能真正闡明表達(dá)中藥臨床療效的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)[22]。本文通過(guò)“中國(guó)知網(wǎng)”“萬(wàn)方”等數(shù)據(jù)庫(kù)調(diào)研發(fā)現(xiàn)，關(guān)于玉泉丸復(fù)方作為一個(gè)整體的入血成分研究未見(jiàn)報(bào)道，此部分研究?jī)?nèi)容本課題組也正在進(jìn)行。因此先調(diào)研了玉泉丸中各單味藥在其他復(fù)方中可能的入血成分。金慧等[23-24]研究發(fā)現(xiàn)葛根芩連湯復(fù)方大鼠給藥后歸屬于葛根的入血成分有葛根素、3′-甲氧基葛根素、8--芹糖基(1→6)葡萄糖-大豆苷元、大豆苷元、黃芩苷、漢黃芩苷和芹糖基-7--β--葡萄糖酐酸等；王慧森等[25]、張雅閣等[26]以血清藥物化學(xué)方法的追蹤確定了地黃中的入血原型成分，包括梓醇、地黃苷D和益母草苷；沈丹萍等[27-28]通過(guò)ig大鼠分析了扶正化瘀方中五味子進(jìn)入血液中可能發(fā)揮作用的成分包括五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲和五味子乙素；鄒俊駒等[29]也通過(guò)建立高效液相色譜法測(cè)定了月華丸中麥冬的入血成分：麥冬皂苷D；此外，于華等[30]采用UPLC-Q-TOF-MS法分析了連花清瘟膠囊經(jīng)SD大鼠ig給藥后吸收入血成分，結(jié)果表明歸屬于甘草的入血成分包括芹糖甘草苷、芹糖異甘草苷、異甘草苷、甘草素、甘草酸和甘草苷。

3.2 基于成分特有性的Q-Marker預(yù)測(cè)分析

3.2.1 葛根成分的特有性分析 葛根為豆科植物野葛(Willd.) Ohwi的干燥根，主要成分是黃酮類(lèi)、香豆素類(lèi)、皂苷類(lèi)和多糖類(lèi)，其中以葛根素、大豆苷元和大豆苷為代表的異黃酮類(lèi)化合物是葛根中的主要活性成分，含量高且藥理作用廣泛[31-32]，且有研究表明葛根黃酮類(lèi)中葛根素、大豆苷元、大豆苷在煎煮過(guò)程中含量穩(wěn)定，故常用此3種化合物來(lái)評(píng)價(jià)葛根質(zhì)量。

3.2.2 地黃成分的特有性分析 地黃為玄參科植物地黃Libosch.的新鮮或干燥塊根。地黃中化學(xué)成分以環(huán)烯醚萜苷類(lèi)及苯乙醇苷類(lèi)、糖類(lèi)和氨基酸等為主，其中環(huán)烯醚萜類(lèi)是其物質(zhì)基礎(chǔ)的重要組成部分，也是其主要活性成分[33]。目前已分離鑒定出梓醇、益母草苷、桃葉珊瑚苷、地黃苷A、D、E等30多種環(huán)烯醚萜苷類(lèi)化合物，其中含量最高的為梓醇，且具有多種生物學(xué)效應(yīng)，但其化學(xué)穩(wěn)定性差，在炮制過(guò)程中受熱易水解[34]。苯乙醇苷類(lèi)成分包括毛蕊花糖苷、異毛蕊花糖苷等，炮制過(guò)程中發(fā)生酯鍵斷裂，致使含量降低[35]。但有研究結(jié)果顯示環(huán)烯醚萜苷類(lèi)化合物：地黃苷A和地黃苷D在地黃的炮制加工過(guò)程中含量較為穩(wěn)定，且含量均較高，特征明顯[36]。綜合以上結(jié)果，可以選擇地黃苷A和地黃苷D來(lái)評(píng)價(jià)地黃的質(zhì)量。

3.2.3 天花粉成分的特有性分析 天花粉為葫蘆科植物栝樓Maxim.或雙邊栝樓Harms.的干燥根。文獻(xiàn)調(diào)研結(jié)果表明，天花粉中主要含有蛋白質(zhì)、多糖、皂苷、氨基酸等成分，其中天花粉蛋白、多糖和皂苷類(lèi)化合物是其發(fā)揮多種藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，但針對(duì)單體成分的現(xiàn)代藥理研究較少，故特征性成分有待進(jìn)一步研究[37]。

3.2.4 麥冬成分的特有性分析 麥冬為百合科植物麥冬(L.f) Ker-Gawl.的干燥塊根，麥冬中所含主要化學(xué)成分有甾體皂苷、生物堿、多糖、氨基酸、高異黃酮和揮發(fā)油等。其中高異黃酮類(lèi)和甾體皂苷類(lèi)化合物是其主要活性物質(zhì)，是發(fā)揮藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。文獻(xiàn)調(diào)研結(jié)果表明，麥冬中麥冬皂苷B、D含量較高且具有多種藥理作用，較具特征性[38-39]。故可選擇麥冬皂苷B和麥冬皂苷D來(lái)評(píng)價(jià)麥冬的質(zhì)量。

3.2.5 五味子成分的特有性分析 五味子為木蘭科植物五味子(Turcz.) Baill.的干燥成熟果實(shí)，主要成分有木脂素、揮發(fā)油、多糖等，其中以木脂素為主要有效成分。目前已經(jīng)分離得到的木脂素有40多種，其中五味子醇甲、五味子乙素含量較高且生理活性廣泛，具有特征性[40-41]。

3.2.6 甘草成分的特有性分析 甘草為豆科植物甘草Fisch.、脹果甘草Bat.或光果甘草L.的干燥根和根莖。文獻(xiàn)表明，甘草中主要含有三萜皂苷類(lèi)、黃酮類(lèi)、香豆素、生物堿、氨基酸、揮發(fā)性成分和多糖等成分。三萜皂苷類(lèi)和黃酮類(lèi)為甘草的主要活性成分，以甘草酸和甘草次酸為代表的三萜皂苷類(lèi)和以甘草素和異甘草素為代表的甘草黃酮類(lèi)含量較高且生理活性強(qiáng)，具有特征性[42-43]。

綜合分析玉泉丸中6味中藥的特有性成分，同時(shí)結(jié)合本課題組前期對(duì)其復(fù)方成分鑒定結(jié)果可知，玉泉丸中的特有性成分主要包括黃酮類(lèi)、木脂素類(lèi)、皂苷類(lèi)和萜類(lèi)化合物。

3.3 基于成分與藥效關(guān)聯(lián)的Q-Marker預(yù)測(cè)分析

質(zhì)量控制的根本目的在于對(duì)中藥有效性的控制，因此，“有效”是Q-Marker的核心要素。通過(guò)調(diào)研文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)有關(guān)玉泉丸復(fù)方成分與藥效關(guān)聯(lián)的基礎(chǔ)性研究較少，大多集中于臨床病例觀察研究，且未明確闡明與調(diào)節(jié)血糖、對(duì)DNA損傷的保護(hù)作用等相關(guān)的具體化學(xué)成分。因此后續(xù)也需要開(kāi)展更多此部分研究?jī)?nèi)容，為玉泉丸更好地應(yīng)用于臨床而奠定基礎(chǔ)。

3.3.1 調(diào)節(jié)血糖 吳鳳琪等[44]為了探討復(fù)方玉泉丸中血糖相關(guān)性元素的含量和分布特征，通過(guò)采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法測(cè)定元素含量，從而為其降血糖物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供依據(jù)。結(jié)果玉泉丸中血糖相關(guān)性元素含量豐富，Cu/Zn比例適宜，鋅、鉻、鎳、釩和鎂分布特點(diǎn)明顯，血糖相關(guān)性元素可能是玉泉丸降血糖作用的重要成分。

3.3.2 對(duì)DNA損傷保護(hù)作用 吳鳳琪等[19]研究還采用不同極性的提取劑熱回流提取復(fù)方玉泉丸有效成分，在DPPH和OH自由基模型上探討各提取物清除能力，并用CuSO4-Phen-VC-H2O2-DNA化學(xué)發(fā)光體系測(cè)定DNA損傷保護(hù)作用。結(jié)果表明70%乙醇提取物能有效降低DNA損傷程度，并使DNA氧化損傷延遲，其機(jī)制與清除DPPH及OH自由基活性有關(guān)。

3.4 基于復(fù)方配伍環(huán)境的Q-Marker的預(yù)測(cè)分析

楊林相[4]通過(guò)研究玉泉丸加減方對(duì)126例糖尿病患者的治療情況，同時(shí)分析血糖控制情況，結(jié)果顯示，與常規(guī)治療組相比，玉泉丸加減方對(duì)糖尿病患者的治療效果更好，可以有效降低患者血糖水平。原因可能在于糖尿病主要是由于胰島素抵抗導(dǎo)致胰島素分泌不足而引起的糖類(lèi)、脂類(lèi)和蛋白質(zhì)等代謝紊亂。而玉泉丸加減方具有滋陰補(bǔ)腎等功效，可以緩解代謝紊亂等癥狀。葛根作為君藥，治療內(nèi)熱熾傷，并且可以從營(yíng)養(yǎng)液中吸取養(yǎng)分，然后運(yùn)送于肌肉，保證能有效補(bǔ)陽(yáng)益氣；地黃滋陰補(bǔ)腎、涼血生津養(yǎng)陰；天花粉生津止渴，2味藥共為臣藥，再加上山茱萸補(bǔ)肝腎等，從而使玉泉丸加減方具有顯著的益氣生津、養(yǎng)陰潤(rùn)燥、滋補(bǔ)肝腎的功能。此外，高慧等[45]為了比較生熟五味子對(duì)玉泉丸降血糖作用及化學(xué)成分的影響，采用STZ構(gòu)建高血糖大鼠模型，于給藥第7、14天測(cè)定大鼠血糖值，發(fā)現(xiàn)2種方法配制的玉泉丸降血糖作用無(wú)顯著性差異；采用HPLC法檢測(cè)玉泉丸中葛根素、五味子醇甲的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果顯示含生五味子玉泉丸中，兩者質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.0117%、0.032%；含醋五味子玉泉丸中，兩者質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.0061%、0.024%?？梢钥闯觯逦蹲佑袢柚形逦蹲哟技?、葛根素質(zhì)量分?jǐn)?shù)均遠(yuǎn)高于醋制五味子玉泉丸，從而說(shuō)明生五味子加入玉泉丸復(fù)方有利于煎煮過(guò)程中有效成分（如五味子醇甲、葛根素等）的溶出。綜上可知，玉泉丸中各味藥相互配伍，共同發(fā)揮益氣生津、滋陰潤(rùn)燥等功效。

3.5 基于成分可測(cè)性的Q-Marker預(yù)測(cè)分析

《中國(guó)藥典》2020年版中葛根、地黃、麥冬、五味子和甘草的規(guī)定的含量測(cè)定項(xiàng)下成分分別為葛根素；梓醇、地黃苷D；魯斯可皂苷元；五味子醇甲；甘草苷和甘草酸。天花粉在藥典中未見(jiàn)對(duì)其含量測(cè)定項(xiàng)作出規(guī)定。祁航等[7]建立玉泉丸HPLC指紋圖譜，其中保留時(shí)間穩(wěn)定的共有峰有12個(gè)，指認(rèn)了6個(gè)主要成分，包括葛根素、大豆苷元、毛蕊花糖苷、五味子醇甲、甘草酸和甘草苷，并同時(shí)測(cè)定這6個(gè)成分的含量。史培穎等[46]采用HPLC同時(shí)測(cè)定玉泉丸中葛根素和甘草酸2種活性成分的含量。李少光等[6]采用HPLC測(cè)定了玉泉丸中葛根素、甘草苷、異甘草苷、大豆苷元、甘草酸5個(gè)活性成分的含量。庫(kù)爾班江等[47]采用高效薄層雙波長(zhǎng)掃描法，于270、370 nm處測(cè)定玉泉丸中葛根素、大豆苷元的含量。在Q-Marker預(yù)測(cè)分析中，基于玉泉丸復(fù)方體外化學(xué)成分及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的文獻(xiàn)報(bào)道較少，并且該復(fù)方中天花粉藥材較為特殊，主要成分大多為多糖類(lèi)、蛋白質(zhì)類(lèi)和氨基酸類(lèi)，對(duì)其體外及體內(nèi)入血成分系統(tǒng)研究較少，因此仍需開(kāi)展更多基礎(chǔ)研究來(lái)進(jìn)一步闡明其物質(zhì)基礎(chǔ)，從而為其臨床應(yīng)用提供有力的支撐。綜上所述，基于Q-Marker的五原則，選定葛根素、大豆苷元、地黃苷D、五味子醇甲、五味子乙素、麥冬皂苷D、甘草素、甘草酸和甘草苷9個(gè)化合物作為玉泉丸的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，專(zhuān)屬性好、可測(cè)性強(qiáng)、便于質(zhì)量控制，可以作為玉泉丸的Q-Marker，具體信息見(jiàn)表1和圖2。

表1 玉泉丸的Q-Marker信息

Table 1 Information of Q-Markers of Yuquan Pills

化學(xué)成分分子式CAS相對(duì)分子質(zhì)量來(lái)源 葛根素C21H20O93681-99-0416.4葛根 大豆苷元C15H10O4486-66-8254.2葛根 地黃苷DC27H42O2081720-08-3686.6地黃 五味子醇甲C24H32O77432-28-2432.5五味子 五味子乙素C23H28O661281-37-6400.5五味子 麥冬皂苷DC44H70O16945619-74-9855.0麥冬 甘草素C15H12O4578-86-9256.3甘草 甘草酸C42H62O161405-86-3822.9甘草 甘草苷C21H22O9551-15-5418.4甘草

a-葛根素 b-大豆苷元 c-地黃苷D d-五味子醇甲 e-五味子乙素 f-甘草素 g-麥冬皂苷D h-甘草苷 i-甘草酸

4 結(jié)語(yǔ)

玉泉丸具有養(yǎng)陰生津、益氣和中的功效，在臨床上主要用于治療氣陰兩虛型糖尿病。方劑的臨床使用需依據(jù)中醫(yī)辨證論治基本理念，根據(jù)不同病癥采取不同配伍比例、劑型或加味等方法，來(lái)獲得針對(duì)不同病癥的量效關(guān)系。本文基于其傳遞與溯源的屬性，以成分有功效的關(guān)聯(lián)性為核心，可測(cè)性和成分特有性為條件，再結(jié)合復(fù)方中藥的配伍比例，最終確認(rèn)中藥復(fù)方的Q-Marker，建立質(zhì)量溯源體系，對(duì)玉泉丸進(jìn)行質(zhì)量控制，也為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)及老藥新用提供參考。

根據(jù)目前現(xiàn)有的玉泉丸相關(guān)研究文獻(xiàn)，可以看到其早期成分研究主要集中在采用薄層色譜法對(duì)復(fù)方中活性物質(zhì)進(jìn)行定性鑒別，定量鑒別較少。后來(lái)又逐漸開(kāi)始使用HPLC法測(cè)定玉泉丸中含量較高的活性物質(zhì)，但指標(biāo)較為單一，且少見(jiàn)系統(tǒng)化研究其整方成分，質(zhì)量控制指標(biāo)單一且不完善，需進(jìn)一步研究。此外，在文獻(xiàn)調(diào)研中發(fā)現(xiàn)，復(fù)方中天花粉的成分研究基礎(chǔ)薄弱，指標(biāo)性成分仍不明確。關(guān)于玉泉丸整方化學(xué)成分的系統(tǒng)性研究相關(guān)文獻(xiàn)也較少，藥效研究多集中于臨床病例觀察，再加上中藥復(fù)方本身化學(xué)成分的復(fù)雜性，因此要想建立該復(fù)方系統(tǒng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)以及進(jìn)一步闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，就需要從中藥的整體性出發(fā)，采用多種技術(shù)，例如超高效液相色譜法、液質(zhì)聯(lián)用法、譜效關(guān)聯(lián)等，建立多層次、多角度和多樣性的研究，進(jìn)一步系統(tǒng)性分析其復(fù)方成分以此來(lái)進(jìn)一步證明玉泉丸在臨床應(yīng)用中的安全性和可靠性。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Review of chemical constituents and pharmacological action of Yuquan Pill and predictive analysis of its quality markers

LEI Yan1, GUO Xiu-huan1, LI Yin1, LIU Chuan-xin1, 2, YUAN Rui-juan1

1.School of Chinese Materia, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029, China 2.Luoyang Branch of National Metabolic Disease Clinical Medical Research Center, Henan Key Laboratory of Genetic Rare Diseases, Endocrinology and Metabolism Center of the First Affiliated Hospital of Henan University of Science and Technology, First Affiliated Hospital of Henan University of Science and Technology, Luoyang 471000, China

Yuquan Pill (玉泉丸) is a classic prescription for the treatment of diabetes, which has the effects of nourishing kidney and nourishing, tonifyingand fluid, relieving thirst and relieving annoyance, etc,.It is often used to treat diabetes and its complications of deficiency of bothandin modern clinic, but there are few studies on the material basis and pharmacology of its efficacy.In this paper, the chemical composition and pharmacological action of Yuquan Pill are reviewed.On this basis, the Q-Marker of Yuquan Pill are also predicted and analyzed based on the "five principles" of traditional Chinese medicine quality marker (Q-Marker).It is suggested that puerarin, daidzein, rehmannioside D, schisandrin, schisandrin B, ophiopogonin D, liquiritigenin, glycyrrhizic acid and liquiritin can be used as Q-Marker of Yuquan Pill.In the follow-up, these components can be selected as indicators for the whole process quality control and evaluation of Yuquan Pills, and at the same time, we can establish the quality traceability system.

Yuquan Pill; chemical constituents; pharmacological activities; quality marker (Q-Marker); diabetes; puerarin; daidzein; rehmannioside D; schisandrin; schisandrin B; ophiopogonin D; liquiritigenin; glycyrrhizic acid; liquiritin

R28

A

0253 - 2670(2022)09 - 2929 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.09.036

2021-04-15

雷 艷（1996—），女，博士研究生，研究方向?yàn)樘悄虿∥镔|(zhì)基礎(chǔ)研究。E-mail: 1347231417@qq.com

通信作者：劉傳鑫，男，博士，主要從事分析毒理學(xué)與臨床分子診斷性研究。E-mail: 15222003775@163.com

袁瑞娟，女，碩士生導(dǎo)師，副教授，主要從事藥物分析與中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。E-mail: rjyuance@126.com

[責(zé)任編輯 王文倩]