盧春光 翁永剛 潘旭東 邱觀連 劉宇慧 李寧 李守富

摘要 筆者以上海某雞場(chǎng)為試驗(yàn)對(duì)象，采集血液和胎糞、泄殖腔拭子，利用禽白血病 P27 抗原 ELISA、禽白血病抗體 ELISA 和病毒分離技術(shù)，淘汰陽(yáng)性雞。選擇上海某地方品種雞，經(jīng)過(guò)凈化，下代雞群各種樣品陽(yáng)性率下降明顯，雞白血病凈化效果明顯。

關(guān)鍵詞 禽白血病;凈化方案;凈化探索

禽白血病?。╝vian leukosis，AL）由禽 C 型反轉(zhuǎn)錄病毒群的 病毒引起的禽類(lèi)多種腫瘤性疾病的統(tǒng)稱(chēng)，是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的三 大腫瘤病之一。該病被我國(guó)列為動(dòng)物疫病中長(zhǎng)期規(guī)劃優(yōu)先防治的主要疫病之一，由于目前尚無(wú)有效的治療方法，控制該病只能采取 凈化。筆者綜合運(yùn)用禽白血病多種凈化技術(shù)對(duì)某雞場(chǎng)開(kāi)展凈化工 作，期望為白血病的凈化提供一點(diǎn)參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)樣品為雞場(chǎng)血樣、胎糞、泄殖腔棉拭子等。禽白血病 J 亞 群和禽白血病 A/B 亞群病毒 ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒、禽白血病病毒 p27 ELISA 抗原檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自哈爾濱國(guó)生生物科技有限公司;胎牛血清（FBS）、DMEM 細(xì)胞培養(yǎng)液、胰酶消化液（0.25%）、青 鏈霉素溶液（100× ）、兩性霉素 B，購(gòu)自上海芮德生物技術(shù)有限公司;DF-1 細(xì)胞由山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院禽病研究室贈(zèng)送;其 他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 試驗(yàn)方法

1）胎糞與泄殖腔試子檢測(cè) 采集雞胎糞 / 泄殖腔棉拭子，與 1mL 樣品稀釋液混勻后放入液氮反復(fù)凍融 3 次并恢復(fù)至室溫，檢 測(cè)禽白血病 P27 ELISA 抗原。具體操作按禽白血病病毒 p27 ELISA抗原檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)。

2）禽白血病特異性抗體檢測(cè) 采集血樣 2mL，離心分離血清，然后按禽白血病 A/B 亞群和禽白血病 J 亞群 ELISA 抗體檢測(cè)試劑 盒說(shuō)明書(shū)要求檢測(cè)禽白血病 A/B 和禽白血病 J 抗體。

3）病毒分離技術(shù) 采集 2mL 左右雞全血 / 血漿，無(wú)菌接種于DF-1 細(xì)胞，置于含 5% CO2 的 37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 2h。然后換新鮮 培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng) 5～7d。收集液體，反復(fù)凍融 3 次后，用禽白血病 P27 抗原 ELISA 抗體試劑盒測(cè)試。

1.3 凈化方案

1）基礎(chǔ)群禽白血病檢測(cè)情況 隨機(jī)選取雞 980 羽，做好標(biāo)號(hào)，對(duì) 號(hào)采集泄殖腔棉拭子，檢測(cè)禽白血病 P27 抗原;采集 196 羽雞樣本 進(jìn)行禽白血病 A/B 亞群和禽白血病 J 亞群抗體檢測(cè)，同時(shí)采集有 疑似禽白血病感染的 85 只雞血樣進(jìn)行病毒分離。

2）陰性雞群留種 一旦禽白血病 P27 抗原檢測(cè)陽(yáng)性，雞及其蛋全部淘汰，陰性的才留種。

3）陰性雞種蛋的孵化 禽白血病 P27 抗原檢測(cè)陰性雞種蛋須經(jīng) 徹底消毒后用專(zhuān)門(mén)孵化器孵化。

4）后代陰性雞群的選育 前期禽白血病 P27 抗原檢測(cè)陰性雞產(chǎn) 的蛋做好標(biāo)記，孵育后采集胎糞，檢測(cè)禽白血病 P27 抗原。一旦陽(yáng) 性，則淘汰雞及其所產(chǎn)蛋;陰性雞以該只母雞后代單獨(dú)飼養(yǎng)。到 6 周齡育雛期，先采集泄殖腔棉拭子檢測(cè)，淘汰禽白血病 P27 抗原檢測(cè)陽(yáng)性雞。120 日齡時(shí)采集泄殖腔棉拭子檢測(cè)，淘汰檢測(cè)陽(yáng)性雞。后 世代的培育依此程序循環(huán)往復(fù)。在檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性率很低時(shí)可酌情 調(diào)整判定陽(yáng)性的閾值。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 基礎(chǔ)群禽白血病檢測(cè)情況

采集 980 羽雞泄殖腔棉拭子，采用 ELISA 方法檢測(cè)禽白血病 P27 抗原，陽(yáng)性率為 25%。采集 196 羽雞的血清，檢測(cè)樣品中禽白血病 A/B 亞群和禽白血病 J 亞群抗體，結(jié)果分別為 12.76%和 6.12%，某些個(gè)體 2 種抗體均有檢出。采集有疑似禽白血病發(fā)病的85 只雞的全血進(jìn)行病毒分離，分離率為 2.35%。表明該雞群禽白血 病有感染，并且存在禽白血病 A/B 亞群、禽白血病 -J 亞群共感染的情況。具體情況見(jiàn)表 1。

2.2 第 2 代雞群禽白血病檢測(cè)情況

第 2 代雞群出雛當(dāng)天用 1.5mL 離心管收集 2，250 份胎糞檢 測(cè)，陽(yáng)性率為 5.6%。到第 6 周時(shí)，采集 751 份雞泄殖腔棉拭子，陽(yáng) 性率 5.85%。120 日齡時(shí)，采集 1，652 份雞泄殖腔棉拭子，陽(yáng)性率 6.11%。隨機(jī)采集 211 份雞血清，檢測(cè)禽白血病 -A/B 亞群和禽白血 病 -J 亞群抗體，陽(yáng)性率分別為 5.70%和 2.40%。采集疑似發(fā)病的111 份雞全血進(jìn)行病毒分離，分離率為 1.80%。這字指向一個(gè)結(jié)果：該雞群的禽白血病感染已得到初 步控制，陽(yáng)性率低于 10%，具體情況見(jiàn)表 2。

2.3 凈化效果

經(jīng)過(guò) 1 次凈化，第 2 世代 120 日齡雞群各種樣品抗原陽(yáng)性率 均明顯下降，凈化效果比較明顯。具體血清禽白血病 -A/B 亞群抗 體陽(yáng)性率由 12.76%降為 5.7%;血清禽白血病 -J 亞群抗體由 6.12%降為 2.4%;禽白血病 P27 抗原陽(yáng)性率由 25%降為 6.11%;禽 白血病病毒分離陽(yáng)性率由 5.9%降為 1.8%。

3 討論

我國(guó)對(duì)禽白血病的研究從上世紀(jì) 90 年代就開(kāi)始了，崔治中[1]首次從江蘇和山東的白羽肉雞場(chǎng)分離到禽白血病 -J。王倩等[2]采用 ELISA 檢測(cè)試劑盒對(duì)安徽省 2017—2019 年 59 個(gè)禽場(chǎng)的 3，275 份 血清和 2，100 份蛋清進(jìn)行禽白血病檢測(cè)。本試驗(yàn)借鑒前人的研究方法，進(jìn)行該場(chǎng)的禽白血病檢測(cè)，通過(guò)檢測(cè)結(jié)果表明該雞場(chǎng)存在禽 白血病感染，且抗原陽(yáng)性率較高，與上述文獻(xiàn)報(bào)道的陽(yáng)性率相近。

由此可知，上海雞場(chǎng)的禽白血病感染情況也不容樂(lè)觀，因此開(kāi)展凈 化工作迫在眉睫。 2020 年，于慧茹等[3]對(duì)上海市某原種雞場(chǎng)的某地方品種 核心群開(kāi)展了禽白血病凈化，該雞場(chǎng)凈化效果顯著。借鑒崔治中[4]推薦的技術(shù)方案，結(jié)合該雞場(chǎng)實(shí)際育種情況，選擇生長(zhǎng)階段的 1 日齡、6 周齡和 120 日齡 3 個(gè)時(shí)間點(diǎn)，通過(guò)多種檢測(cè)方法聯(lián)合應(yīng)用的方式進(jìn)行禽白血病的檢測(cè)。這只是一次簡(jiǎn) 單的嘗試，要想獲得比較理想的凈化效果，需要設(shè)計(jì)更科學(xué)的凈化方 案，這項(xiàng)工作是一個(gè)綜合性系統(tǒng)性工程，除了凈化方案的合理外，還 需要矢志不渝的堅(jiān)持檢測(cè)和進(jìn)行嚴(yán)格的生物安全管控[5]。

參考文獻(xiàn)：

[1] 崔治中.我國(guó)雞群 J 亞群白血病流行的過(guò)去、現(xiàn)在和將來(lái)及其防控[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2015（1）：30-32.

[2] 王倩，王維，周迎春，等.2017-2019 年安徽省部分禽場(chǎng)禽白血病定點(diǎn)監(jiān)測(cè)[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫 2020，37（9）：16-20.

[3] 于慧茹，陶田谷晟，楊顯超，等.上海市某原種雞場(chǎng)禽白血病凈化效果評(píng)估[J].畜牧與獸醫(yī)，2021，53（6）：135-139.

[4] 崔治中.種雞場(chǎng)禽白血病防控和凈化技術(shù)方案[J].中國(guó)家禽，2015，37（23）：1-7.

[5] 晏志勛，初芹，曾另超，等.母雞蛋清混樣檢測(cè)禽白血病病毒 p27 抗原的應(yīng)用研究[J].畜牧與獸醫(yī)，2020，52（9）：116-120.