韋紅群，蘭艷妮，于永霞，蒙雪姣，吳婧婧，歐冰冰，陸俁伽，賴艷梅，梁思思

（1.廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術(shù)推廣站，南寧市 530007；2.廣西田園生化股份有限公司，南寧市 530007）

桂蠶8號(hào)是廣西蠶業(yè)技術(shù)推廣站育成的新品種，屬亞熱帶型夏秋用抗病四元雜交種，于2020 年6 月通過省級(jí)品種審定委員會(huì)審定［1］，是廣西計(jì)劃重點(diǎn)推廣的家蠶品種，具有抗血液型膿病強(qiáng)、繭質(zhì)優(yōu)、產(chǎn)量高、強(qiáng)健好養(yǎng)的特點(diǎn)，深受蠶農(nóng)喜愛。據(jù)統(tǒng)計(jì)，截至2021年6月底，廣西累計(jì)推廣該品種50萬張左右，售繭收入8.5億元［2］。廣西大力推廣和飼養(yǎng)桂蠶8號(hào)并產(chǎn)生了較高的經(jīng)濟(jì)收益，使得該品種的蠶種供不應(yīng)求，蠶種生產(chǎn)企業(yè)經(jīng)常需要進(jìn)行大批量的即時(shí)浸酸，以滿足市場(chǎng)的需求。

蠶種催青必須先經(jīng)過人工孵化處理技術(shù)，目前使用最廣泛的方法是鹽酸孵化法，也是最具實(shí)用性、效果最佳的人工孵化法［3］。浸酸中重要的3 個(gè)因素分別為鹽酸液溫、浸酸濃度和浸酸時(shí)長(zhǎng)，據(jù)研究，這3個(gè)因素中，蠶種對(duì)鹽酸液溫的變化最為敏感，浸酸時(shí)長(zhǎng)及浸酸濃度的安全使用范圍較寬［4］。在浸酸過程中，3個(gè)關(guān)鍵因素相互制約且各有其安全范圍［5］。而浸酸后蠶種孵化情況除了跟浸酸的3 個(gè)重要因素相關(guān)外，還受到浸酸適期的影響。宋仕琦［6］的研究表明，即時(shí)浸酸適期與蠶種的孵化及死卵的發(fā)生有密切的關(guān)系，在適期范圍內(nèi)浸酸能獲得良好的孵化率。生產(chǎn)上通常以產(chǎn)卵后的保護(hù)溫度、經(jīng)過時(shí)間長(zhǎng)短及卵色變化來確定品種的浸酸時(shí)期。即時(shí)浸酸是一項(xiàng)成熟的技術(shù)，主要是在蠶卵產(chǎn)下后一定時(shí)期，按照中系品種、日系品種的不同浸酸技術(shù)規(guī)程［7］進(jìn)行浸酸處理，可以達(dá)到實(shí)用孵化率的要求。即時(shí)浸酸技術(shù)要求高，受蠶種產(chǎn)卵時(shí)長(zhǎng)、保護(hù)條件及溫濕度等條件的影響制約，在生產(chǎn)上因即時(shí)浸酸處理不當(dāng)導(dǎo)致蠶種孵化不齊甚至不孵化的事故時(shí)有發(fā)生，給蠶種企業(yè)造成巨大的損失。對(duì)于即時(shí)浸酸適期范圍，余武昌等［8］的研究表明浸酸適期范圍不僅與保護(hù)時(shí)間和保護(hù)溫度相關(guān)，還應(yīng)結(jié)合卵色和積溫進(jìn)行綜合考慮。桂蠶8號(hào)的即時(shí)浸酸處理，僅按照中系和日系品種的不同，設(shè)定不同時(shí)長(zhǎng)的浸酸方法，對(duì)于單個(gè)品種的浸酸技術(shù)特點(diǎn)并無針對(duì)性的試驗(yàn)，并且對(duì)于各個(gè)品種在實(shí)際生產(chǎn)上常出現(xiàn)不同保護(hù)時(shí)間或者不同冷藏時(shí)間等情況，而單一采用中系和日系品種的區(qū)分進(jìn)行浸酸，所獲得的蠶種孵化效果并不理想，有時(shí)甚至?xí)霈F(xiàn)浸酸死卵多、蠶種孵化率低及孵化不齊等現(xiàn)象，嚴(yán)重影響了蠶種的出庫收蟻計(jì)劃。桂蠶8號(hào)是新品種，該品種的即時(shí)浸酸標(biāo)準(zhǔn)是否適用兩廣二號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)，還需要進(jìn)行試驗(yàn)論證。本研究以兩廣二號(hào)原原種中系和日系的即時(shí)浸酸技術(shù)要求為參照，設(shè)計(jì)桂蠶8號(hào)不同交配時(shí)間點(diǎn)所產(chǎn)的蠶卵的即浸試驗(yàn)，初步探索孵化桂蠶8號(hào)親本的原原種即時(shí)浸酸標(biāo)準(zhǔn)，以期更好地掌握桂蠶8 號(hào)親本原原種的即時(shí)浸酸特點(diǎn)，完善新品種良種擴(kuò)繁配套技術(shù)，加快優(yōu)質(zhì)新品種的示范應(yīng)用。

1 試驗(yàn)時(shí)間和地點(diǎn)

1.1 試驗(yàn)時(shí)間

2020年7—8月。

1.2 試驗(yàn)地點(diǎn)

廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術(shù)推廣站原種場(chǎng)及冷庫。

2 試驗(yàn)材料與方法

2.1 試驗(yàn)材料

桂蠶8號(hào)親本原原種錦、繡、壯、麗蠶蛾（錦、繡為中系品種，壯、麗為日系品種），由廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術(shù)推廣站原種場(chǎng)提供。

2.2 試驗(yàn)方法

2.2.1 制種處理 選取2020 年春制桂蠶8 號(hào)親本錦、繡、壯、麗4 個(gè)品種的即將羽化的蠶蛹，統(tǒng)一在早上5：00 進(jìn)行感光，6：30 盛出蛾時(shí)選取新鮮羽化的蛾。共設(shè)6個(gè)處理，按照每個(gè)處理有21只蛾，每個(gè)處理設(shè)置3個(gè)重復(fù)的方法設(shè)計(jì)試驗(yàn)，各樣本的處理方法如表1所示。

表1 各樣本的不同處理方法

2.2.2 即浸處理 收種后蠶種統(tǒng)一放入溫度為25 ℃、濕度為75%～85%的保護(hù)室中進(jìn)行保護(hù)，直至收種當(dāng)日下午15：00 進(jìn)行即時(shí)浸酸處理。統(tǒng)一按照鹽酸濃度4.54 mol/L、溫度46.0～46.5 ℃的條件進(jìn)行浸酸處理。其中，中系品種浸酸時(shí)長(zhǎng)分別設(shè)為270 s、330 s、390 s，日系品種浸酸時(shí)長(zhǎng)分別設(shè)為300 s、360 s、420 s。

2.2.3 調(diào)查方法 浸酸后的蠶種放入溫度25 ℃、濕度80%～85%的環(huán)境中進(jìn)行催青，調(diào)查各個(gè)處理的蠶種發(fā)育情況以及孵化成績(jī)。

2.2.4 分析方法 通過SPSS 25.0 軟件對(duì)各品種交配至浸酸的時(shí)長(zhǎng)（因素A）和浸酸時(shí)長(zhǎng)（因素B）作雙因素方差分析，并進(jìn)行多重比較。因素A（各梯度用A1～A6表示）和因素B（各梯度用B1～B6表示）對(duì)應(yīng)的時(shí)間如表2 所示，中系品種浸酸時(shí)長(zhǎng)對(duì)應(yīng)的梯度為B1～B3，日系品種浸酸時(shí)長(zhǎng)對(duì)應(yīng)的梯度為B4～B6。

表2 雙因素所對(duì)應(yīng)的時(shí)長(zhǎng)

3 結(jié)果與分析

3.1 錦的孵化成績(jī)統(tǒng)計(jì)與分析

3.1.1 錦的孵化成績(jī)調(diào)查結(jié)果 從表3 可看出，各處理中錦的兩日孵化率成績(jī)都很高，均超過90%，除了處理4和處理5的浸酸時(shí)長(zhǎng)為270 s的蠶種孵化率未達(dá)到實(shí)用孵化率標(biāo)準(zhǔn)（92%）以外，其他處理的蠶種孵化率都高于92%；未孵化的蠶種除了不良卵之外，浸酸死卵也較少。處理3 組合為9：00 進(jìn)行交配產(chǎn)卵，蠶種孵化率成績(jī)最高，3個(gè)浸酸時(shí)長(zhǎng)（270 s、330 s、390 s）的蠶種孵化率分別為98.65%、99.30%、98.62%。從催青調(diào)查情況來看，未孵化的蠶種中，浸酸時(shí)長(zhǎng)為270 s的蠶種未見有浸酸死卵現(xiàn)象，孵化后第4 d 觀察還可看到轉(zhuǎn)青蠶卵，證明蠶種還能孵化，只是浸酸刺激還不夠，時(shí)長(zhǎng)稍不足；浸酸時(shí)長(zhǎng)為360 s的條件下，蠶種死卵現(xiàn)象增加，特別是孵化后第3 d出現(xiàn)扁死、癟死、黑死現(xiàn)象，證明浸酸時(shí)間偏長(zhǎng)刺激稍微偏大。

表3 錦的孵化率調(diào)查結(jié)果

3.1.2 兩日孵化率的雙因素方差分析和多重比較結(jié)果 對(duì)錦的兩日孵化率的數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，從表4 可知，因素A 存在極顯著差異，因素B 存在顯著差異，即錦在交配至浸酸時(shí)長(zhǎng)不同以及浸酸時(shí)長(zhǎng)不同條件下的孵化率成績(jī)均存在顯著差異。再對(duì)兩個(gè)因素開展多重比較分析，由表5 可知，交配至浸酸時(shí)長(zhǎng)不同的蠶種孵化率成績(jī)由高至低排序?yàn)锳3＞A6＞A2＞A1＞A4＞A5，其中，A3的蠶種孵化率平均值高達(dá)98.86%；浸酸時(shí)長(zhǎng)不同的蠶種孵化率成績(jī)排序?yàn)榻?30 s＞390 s＞270 s，其中浸酸330 s 的蠶種孵化率平均值達(dá)96.38%。綜合以上結(jié)果，錦的最佳處理組合為A3+B2，即早上9：00交配，即時(shí)浸酸時(shí)長(zhǎng)為330 s。

表4 錦的兩日孵化率雙因素方差分析

表5 錦的兩日孵化率多重比較

3.2 繡的孵化成績(jī)統(tǒng)計(jì)結(jié)果與分析

3.2.1 繡的孵化成績(jī)調(diào)查結(jié)果 孵化成績(jī)見表6，從繡在浸酸時(shí)長(zhǎng)不同條件之間的孵化成績(jī)比較可知，每組處理均發(fā)現(xiàn)浸酸330 s的蠶種孵化率成績(jī)最高，當(dāng)浸酸時(shí)長(zhǎng)延長(zhǎng)到390 s 時(shí)，孵化率成績(jī)下降明顯，通過催青調(diào)查發(fā)現(xiàn)未孵化的蠶種中部分存在浸酸死卵現(xiàn)象。通過試驗(yàn)觀察產(chǎn)卵過程，發(fā)現(xiàn)繡的產(chǎn)卵高峰在晚上19：30～22：30，至24：00 產(chǎn)卵基本結(jié)束，因此繡的各個(gè)處理樣本浸酸時(shí)的卵齡約為16～20 h，蠶種卵齡偏小，浸酸時(shí)容易發(fā)生扁死卵。從各個(gè)樣本間的數(shù)值觀察可知，繡在處理3的3個(gè)不同浸酸時(shí)長(zhǎng)條件下的蠶種孵化率都超過90%，孵化成績(jī)最好。

表6 繡的孵化率調(diào)查結(jié)果

3.2.2 雙因素方差分析和多重比較結(jié)果 對(duì)繡的兩日孵化率進(jìn)行方差分析的結(jié)果見表7。浸酸時(shí)長(zhǎng)不同的蠶種孵化率有顯著差異，交配至浸酸時(shí)長(zhǎng)不同的蠶種孵化率無顯著差異。雙因素多重比較結(jié)果見表8，孵化率由高到低依次為A3＞A5＞A4＞A6＞A1＞A2，其中A3的蠶種孵化率平均值達(dá)到94.39%，其他處理的蠶種孵化率都低于90%；不同浸酸時(shí)長(zhǎng)條件下的蠶種孵化率由高至低為浸酸330 s＞浸酸270 s＞浸酸390 s。綜上可知，繡的最佳處理組合為A3+B2，即早上9：00交配，即時(shí)浸酸時(shí)長(zhǎng)330 s。

表7 繡的兩日孵化率方差分析

表8 繡的兩日孵化率多重比較

3.3 壯的孵化成績(jī)統(tǒng)計(jì)結(jié)果與分析

3.3.1 壯的孵化率調(diào)查結(jié)果分析 表9 的結(jié)果顯示，壯的兩日孵化率除了處理4 的浸酸時(shí)長(zhǎng)為360 s條件下的蠶種孵化率超過92%外，其他處理的蠶種孵化率都未達(dá)到實(shí)用孵化率標(biāo)準(zhǔn)（92%）。催青后，通過對(duì)未孵化的蠶種進(jìn)行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)死卵率隨著浸酸時(shí)長(zhǎng)的增加而增大，即死卵率表現(xiàn)為浸酸420 s＞360 s＞300 s。試驗(yàn)中觀察壯的產(chǎn)卵時(shí)期的特點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)壯的產(chǎn)卵高峰時(shí)間為晚上19：30～22：30，至24：00產(chǎn)卵基本結(jié)束，即時(shí)浸酸時(shí)間點(diǎn)為收種當(dāng)日15：00，壯的即時(shí)浸酸的卵齡約為16～20 h，大部分蠶種卵齡偏小，當(dāng)浸酸時(shí)間延長(zhǎng)后，發(fā)育晚的卵齡小的蠶種出現(xiàn)浸死的現(xiàn)象比較明顯；此外，試驗(yàn)中通過對(duì)蠶蛾產(chǎn)卵狀態(tài)的觀察，發(fā)現(xiàn)其交配時(shí)容易出現(xiàn)散對(duì)現(xiàn)象，交配時(shí)間長(zhǎng)短不一，易導(dǎo)致蠶種卵齡開差過大，蠶卵種齡不齊，使浸酸處理難度增大，浸酸后期死卵增多。

表9 壯的孵化率調(diào)查結(jié)果

續(xù)表9

3.3.2 兩日孵化率雙因素的方差分析及多重比較 結(jié)果由表10 可知，浸酸時(shí)長(zhǎng)不同的蠶種兩日孵化率有極顯著差異，交配至浸酸時(shí)長(zhǎng)不同的蠶種孵化率則無顯著差異，即壯在不同的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行交配產(chǎn)卵的孵化成績(jī)結(jié)果不顯著，原因在于不論什么時(shí)間點(diǎn)交配，所有處理的蠶種都會(huì)待到下午17：00才開始產(chǎn)卵，跟交配時(shí)間點(diǎn)無顯著相關(guān)性；由表11 可知，交配至浸酸時(shí)長(zhǎng)不同的蠶種孵化率進(jìn)行比較，A4的孵化率平均值最高，達(dá)到96.98%，A1最低，僅為72.66%，孵化 率由高至低為A4＞A2＞A3＞A6＞A5＞A1；對(duì)浸酸時(shí)長(zhǎng)不同的蠶種孵化率進(jìn)行比較，孵化率由高至低為浸酸360 s＞浸酸300 s＞浸酸420 s。綜合以上結(jié)果，壯的最佳組合為A4+B5，即早上10：00 交配，浸酸時(shí)長(zhǎng)360 s。

表10 壯的兩日孵化率方差分析

表11 壯兩日孵化率多重比較

3.4 麗的孵化成績(jī)統(tǒng)計(jì)結(jié)果與分析

3.4.1 麗的孵化成績(jī)調(diào)查結(jié)果 通過試驗(yàn)結(jié)果顯示，麗不論是在產(chǎn)卵表現(xiàn)還是浸酸孵化成績(jī)上都表現(xiàn)很好，具體為產(chǎn)卵齊一、卵面整齊、卵質(zhì)均勻、很少出現(xiàn)卵齡開差等情況；浸酸的范圍也比較寬松，浸酸死卵現(xiàn)象較少，孵化率高。由表12可知，試驗(yàn)中所有處理的兩日孵化率都超過92%。其中處理3 的蠶種孵化率最高，3 個(gè)不同浸酸時(shí)長(zhǎng)（300 s、360 s、420 s）條件下的蠶種孵化率分別達(dá)到96.45%、98.28%、96.12%。浸酸時(shí)長(zhǎng)為420 s 的條件對(duì)麗的孵化影響也比較小，最低的孵化率達(dá)到94.57%，證明適宜浸酸的時(shí)間范圍較廣。

表12 麗的孵化率調(diào)查結(jié)果

3.4.2 雙因素方差分析及多重比較結(jié)果 麗的兩日孵化率的方差分析結(jié)果和多重比較結(jié)果見表13及表14，浸酸時(shí)長(zhǎng)不同的蠶種的兩日孵化率有極顯著差異，交配至浸酸時(shí)長(zhǎng)不同的蠶種的兩日孵化率有顯著差異；比較交配至浸酸不同時(shí)長(zhǎng)的蠶種孵化率，由高至低排序 為A3＞A1＞A2＞A4＞A5＞A6，最低的兩日孵化率達(dá)到95.05%，最高的兩日孵化率達(dá)到96.95%；比較浸酸不同時(shí)長(zhǎng)的兩日孵化率，從高到低排序?yàn)榻?60 s＞浸酸300 s＞浸酸420 s，浸酸360 s的蠶種兩日孵化率平均值高達(dá)97.54%，浸酸300 s的蠶種孵化率為95.29%，浸酸時(shí)長(zhǎng)為420 s條件下的蠶種孵化率為95.22%。綜合以上結(jié)果，麗的最佳組合為A3+B5，即早上9：00交配，浸酸時(shí)長(zhǎng)360 s。

表13 麗的兩日孵化率的方差分析

表14 麗的兩日孵化率的多重比較

4 小結(jié)

本次試驗(yàn)中通過觀察記錄各品種的產(chǎn)卵特點(diǎn)規(guī)律，結(jié)果如表15所示，錦和麗在投蛾后10 min左右開始產(chǎn)卵，繡和壯則待到下午17：00后開始產(chǎn)卵，4個(gè)品種的產(chǎn)卵開始時(shí)間表現(xiàn)差別大；錦和麗的快速產(chǎn)卵期為14：00～18：00，繡和壯稍晚。4個(gè)品種的產(chǎn)卵結(jié)束時(shí)間情況為，錦和麗一致，繡和壯一致。錦和麗的產(chǎn)卵時(shí)長(zhǎng)為8～11 h，繡和壯的產(chǎn)卵時(shí)長(zhǎng)較短，為6～7 h。

表15 各品種的產(chǎn)卵規(guī)律特點(diǎn)

各品種的產(chǎn)卵特性差異主要表現(xiàn)在：繡和壯兩個(gè)品種不論在哪個(gè)時(shí)間點(diǎn)交配，都會(huì)待到下午17：00后才開始產(chǎn)卵，19：00 左右進(jìn)入高峰期；錦和麗兩個(gè)品種在投蛾后不久即產(chǎn)卵。繡和壯的產(chǎn)卵時(shí)間相對(duì)短而密集，盛產(chǎn)卵的速度快，24：00基本產(chǎn)卵結(jié)束，產(chǎn)卵時(shí)長(zhǎng)6～7 h；錦和麗有兩個(gè)時(shí)間段的產(chǎn)卵高峰期，投蛾后集中產(chǎn)卵1.0～1.5 h后產(chǎn)卵速度放慢，再經(jīng)過1 h左右進(jìn)入第二次快速產(chǎn)卵時(shí)期；產(chǎn)卵跨時(shí)相對(duì)長(zhǎng)，不論是11：00 投蛾還是16：00 投蛾，至晚上22：00 產(chǎn)卵基本結(jié)束，產(chǎn)卵時(shí)長(zhǎng)為8～11 h。各品種產(chǎn)卵的速度由高至低排序?yàn)辂悾惧\＞繡＞壯，蠶種的產(chǎn)附情況表現(xiàn)為麗和繡卵量足，卵面平整，錦次之。壯則蛾圈不完整，卵面不齊，蠶種排列較散，卵量少，可能與交配時(shí)散對(duì)現(xiàn)象嚴(yán)重有關(guān)。

浸酸結(jié)果顯示，錦和麗的整體表現(xiàn)比較穩(wěn)定，設(shè)置的3 個(gè)不同浸酸時(shí)長(zhǎng)條件下的蠶卵孵化成績(jī)都很理想，死卵情況較少，浸酸適宜時(shí)間范圍比較廣，浸酸時(shí)長(zhǎng)為270～420 s，催青時(shí)的孵化率都超過90%，繡和壯的孵化率遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于錦和麗。根據(jù)各處理的孵化成績(jī)，本次試驗(yàn)中在不同交配時(shí)間點(diǎn)對(duì)產(chǎn)卵效果、孵化成績(jī)的影響下，各品種表現(xiàn)最優(yōu)的組合為：錦于早上9：00 交配，浸酸時(shí)長(zhǎng)為330 s；繡于早上9：00 交配，浸酸時(shí)長(zhǎng)為330 s；壯于早上10：00 交配，浸酸時(shí)長(zhǎng)為360 s；麗于早上9：00 交配，浸酸時(shí)長(zhǎng)為360 s。

5 討論

本次試驗(yàn)中，錦和麗的孵化成績(jī)最好，基本能達(dá)到蠶種生產(chǎn)上要求的實(shí)用孵化率標(biāo)準(zhǔn)92%以上，繡和壯的孵化率大部分都低于92%，原因可能為這兩個(gè)品種不論什么時(shí)間點(diǎn)交配，母蛾都待到當(dāng)天17：00左右開始產(chǎn)卵，產(chǎn)卵時(shí)間短而集中，產(chǎn)卵后到即浸所經(jīng)過的時(shí)間較短，導(dǎo)致卵齡偏小。浸酸時(shí)難以把握標(biāo)準(zhǔn)，當(dāng)浸酸時(shí)間過長(zhǎng)，浸酸死卵就增多明顯，與試驗(yàn)結(jié)果表現(xiàn)一致。方差分析結(jié)果顯示，這兩個(gè)品種的兩日孵化率跟交配時(shí)間點(diǎn)差異不顯著，表示蠶種孵化率跟交配時(shí)間點(diǎn)沒有關(guān)系，跟產(chǎn)卵后至浸酸的時(shí)間段即蠶種的卵齡有關(guān)，證明即時(shí)浸酸的蠶種孵化效果受產(chǎn)卵時(shí)間的先后、浸酸時(shí)間的長(zhǎng)短等因素的影響，因此生產(chǎn)上應(yīng)當(dāng)注重制種關(guān)鍵技術(shù)，在種繭保護(hù)時(shí)期注意保護(hù)室的光線晝夜分明，促使發(fā)蛾統(tǒng)一集中，盛產(chǎn)期一致，縮小卵齡開差。即時(shí)浸酸時(shí)根據(jù)各個(gè)品種的產(chǎn)卵習(xí)性結(jié)合蠶種的保護(hù)時(shí)間及卵色判定浸酸適期，方可達(dá)到理想的孵化效果。

本次試驗(yàn)存在一定的局限性，在統(tǒng)計(jì)未孵化率時(shí)，對(duì)死卵率沒有做具體的數(shù)值統(tǒng)計(jì)。試驗(yàn)參考因素比較單一，孵化后的蟻蠶24 h 疏毛率及72 h 絕食生命力等強(qiáng)健性還有待進(jìn)一步的試驗(yàn)研究。此外，試驗(yàn)的樣本數(shù)量相對(duì)少，得出的試驗(yàn)結(jié)果僅代表本次試驗(yàn)的結(jié)果，可能與實(shí)際生產(chǎn)有差異，是否具有代表性需要更多批次更多樣本的試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行論證。