梁淇棋 林 娜 樊俊宏 稂宇嘉 黃禮芳 劉志珊 韋麗樂 林艷明

右江民族醫(yī)學(xué)院，廣西 百色 533000

原發(fā)性痛經(jīng)是婦科常見病癥，臨床上主要表現(xiàn)為經(jīng)前后或行經(jīng)期發(fā)生下腹墜脹、脹痛、伴有腰酸或其他不適，嚴(yán)重影響患者健康及生活質(zhì)量[1]。原發(fā)性痛經(jīng)的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)[2-4]認(rèn)為其發(fā)生與內(nèi)分泌、遺傳、代謝及免疫等因素有關(guān)。西醫(yī)治療主要以對(duì)癥處理為主。壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸作為廣西特色民族療法，在治療痛經(jīng)上有顯著療效，但其治療機(jī)制尚缺乏現(xiàn)代科學(xué)的證據(jù)[2]。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸療法治療原發(fā)性痛經(jīng)大鼠模型，通過觀察大鼠扭體次數(shù)及大鼠血清中PGF2α、NO、Ca2+離子水平的變化，探究壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸療法治療原發(fā)性痛經(jīng)的可能機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 采用昆明種大鼠50只雌性，鼠齡9～10周，體重(200±20)g，性成熟，未交配，由右江民族醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。大鼠正常飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸治療組、阿司匹林組、當(dāng)歸芍藥散組、空白對(duì)照組、模型對(duì)照組，每組各10只。

1.2 材料 壯醫(yī)藥線(直徑0.7 cm，廣西中藥醫(yī)大學(xué)壯醫(yī)藥推廣中心)；補(bǔ)佳樂(拜爾醫(yī)藥保健有限公司廣州分公司)；阿司匹林腸溶片(拜爾醫(yī)藥保健有限公司)；縮宮素注射液(上海全宇生物科技動(dòng)物藥業(yè)有限公司)；蒸餾水、生理鹽水；前列腺素 ELISA 試劑盒( 上海酶聯(lián)生物)；NO 測(cè)試盒、蛋白測(cè)試盒、鈣測(cè)試盒(南京建成生物工程研究所)；當(dāng)歸芍藥散(右江民族醫(yī)學(xué)院藥劑科提供)。

1.3 動(dòng)物造模及各組干預(yù)方法

1.3.1 樣品制備 稱取當(dāng)歸芍藥散處方：當(dāng)歸20 g,川芎10 g,白術(shù)12 g,茯芩10 g,澤瀉10 g,芍藥20 g，加10倍量水，浸泡20 min，煎煮1 h，取煎出液，再加8倍量水煎煮40 min，合并2次煎煮液,濃縮制成濃度為1 g/mL水煎液；1 mg補(bǔ)佳樂片研碎溶于20 mL纖稀鈉中制成0.05 mg/mL混懸液；100 mg阿司匹林腸溶片研碎溶于5 mL纖稀鈉中制成20 mg/mL混懸液。

1.3.2 動(dòng)物造模 除空白對(duì)照組外，所有大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,采用補(bǔ)佳樂和縮宮素注射液聯(lián)合制造大鼠原發(fā)性痛經(jīng)模型。具體方法如下：壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸組、阿司匹林組、當(dāng)歸芍藥組和模型對(duì)照組,于中午12：00灌胃補(bǔ)佳樂混懸液10 mL/kg，正常對(duì)照組給予10 mL/kg生理鹽水灌胃，連續(xù)給藥12 d。于末次給藥后1 h腹腔注射縮宮素100 U/kg，正常組注射生理鹽水10 mL/kg。

1.3.3 干預(yù)方法 從造模第5天起，每天下午17：00進(jìn)行1次干預(yù)，連續(xù) 7 d。壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸組參照方宗疇等編著的《實(shí)驗(yàn)大鼠針灸俞穴圖譜及針刺手法》取穴人中、歸來、足三里、中極、肚臍(周圍)、關(guān)元，一人將實(shí)驗(yàn)操作部位充分暴露，另一人點(diǎn)燃藥線線端后熄滅明火，將帶火星的線端對(duì)準(zhǔn)穴位，標(biāo)準(zhǔn)為一按一滅即起為一壯，每穴予灸2壯。阿司匹林組劑量按50 kg成人體表面積折算，每只大鼠予阿司匹林腸溶片混懸液200 mg/kg即10 mL/kg灌胃，當(dāng)歸芍藥散組同按50 kg成人體表面積折算，每只大鼠予當(dāng)歸芍藥散水煎液10 g/kg即10 mL/kg灌胃，空白對(duì)照組和模型對(duì)照組不進(jìn)行干預(yù)，只予生理鹽水10 ml/kg灌胃做等容積液體進(jìn)入胃內(nèi)容對(duì)照。上述操作均在大鼠安靜狀態(tài)下，溫暖的環(huán)境中進(jìn)行。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 扭體反應(yīng) 第12天灌胃給藥1 h后，腹腔注射縮宮素100 U/kg(正常組注射生理鹽水 10 mL/kg)，觀察記錄大鼠30 min內(nèi)扭體次數(shù)，計(jì)算扭體抑制率。扭體反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)：大鼠腹部收縮內(nèi)凹，軀干與后肢伸展，臀部與一側(cè)肢體內(nèi)旋。抑制率=(模型組大鼠扭體次數(shù)-給藥組大鼠扭體次數(shù))/模型組大鼠扭體次數(shù)×100%。

1.4.2 子宮勻漿組織PGF2α、NO、Ca2+測(cè)定 于末次給藥后1h，大鼠頸椎斷頭處死，迅速剖腹，取出子宮，以冰凍的生理鹽水洗凈拭干稱重，制成5%的子宮組織勻漿，以2500 r/min低溫離心10 min，取上清液冷藏保存待測(cè)。子宮組織前列腺素 F2α (PGF2α)的含量采用ELISA法檢測(cè)；NO、Ca2+含量測(cè)定采用微板法。均按試劑盒說明書的實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格操作。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠30 min內(nèi)扭體反應(yīng)比較 空白對(duì)照組未出現(xiàn)扭體反應(yīng)，模型對(duì)照組大鼠扭體次數(shù)明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.01)，提示造模成功；各治療組與模型對(duì)照組比較，30 min內(nèi)扭體次數(shù)減少，扭體抑制率上升(P<0.01)；壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸組、當(dāng)歸芍物組、阿司匹林組扭體反應(yīng)次數(shù)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 (P>0.05)；且阿司匹林組和壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸組扭體抑制率均>80%，說明阿司匹林組和壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸組鎮(zhèn)痛效果佳。詳見表 1。

表1 各組大鼠扭體反應(yīng)比較

2.2 各組大鼠子宮勻漿組織PGF2α、NO、Ca2+值比較 與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠子宮內(nèi)膜 PGF2α含量明顯升高，同時(shí)模型組NO值升高，Ca2+值降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸組、當(dāng)歸芍物組、阿司匹林組與模型組比較，PGF2α值、Ca2+值降低，NO值升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；各治療組間NO值、Ca2+值均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 (P>0.05)，提示壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸組、當(dāng)歸芍物組、阿司匹林組對(duì)原發(fā)性痛經(jīng)有效，且壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸組與當(dāng)歸芍物組、阿司匹林組之間相比療效相當(dāng)。見表2。

表2 各組大鼠子宮勻漿組織PGF2α、NO、Ca2+值比較

3 討論

原發(fā)性痛經(jīng)屬壯醫(yī)“火路病”范疇，是較為普遍的婦科疾患。近年來，原發(fā)性痛經(jīng)的發(fā)病率逐漸升高，尋找最有效的治療方法極其重要，而中醫(yī)藥在治療原發(fā)性痛經(jīng)取得效好的效果，是值得深入挖掘研究的有效資源[5-7]。壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸療法是壯醫(yī)最具特色的一種治療方法，具有通絡(luò)止痛、活血化瘀、散結(jié)消腫、溫經(jīng)行痹等作用[8-9]。本實(shí)驗(yàn)采用補(bǔ)佳樂和縮宮素注射液聯(lián)合制造大鼠原發(fā)性痛經(jīng)模型，根據(jù)中醫(yī)經(jīng)絡(luò)選穴原則，選取人中、歸來、足三里、中極、臍周四穴、關(guān)元等穴位，用壯醫(yī)藥線灼灸刺激穴位，調(diào)節(jié)氣血，達(dá)到活血化瘀，溫經(jīng)散寒，氣血調(diào)和的作用。研究表明，痛經(jīng)的發(fā)生主要是由于前列腺素(PGs)分泌過多導(dǎo)致子宮異常收縮引起的[10]，同時(shí)與NO、Ca2+的變化密切相關(guān)，其中PGF2α屬于前列腺素中的一種，可刺激子宮收縮和缺血，導(dǎo)致痛經(jīng)[11]。Ca2+作為在細(xì)胞收縮中起重要作用的第二信使，刺激后可通過細(xì)胞內(nèi)鈣離子的釋放和胞外的內(nèi)流，子宮平滑肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載引起能量耗竭、細(xì)胞膜受損，此外還可以導(dǎo)致子宮肌攣縮[12-13]。NO是一種血管內(nèi)皮舒張因子，可通過NO-環(huán)磷鳥苷(cGMP)途徑調(diào)節(jié)，或直接作用于細(xì)胞膜上的鈣通道，引起鈣離子外流或加速細(xì)胞內(nèi)游離鈣的結(jié)合，從而引起平滑肌細(xì)胞舒張和血管擴(kuò)張。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸療法能夠降低PGF2α、Ca2+值，并使NO水平升高，抑制扭體反應(yīng)。其作用機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)PGF2α、Ca2+、NO水平，緩解子宮平滑肌痙攣引起的缺血再灌注損傷，抑制子宮痙攣從而達(dá)到解除或緩解疼痛的目的。同時(shí)壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸組、當(dāng)歸芍物組、阿司匹林組之間子宮勻漿PGF2α、NO、Ca2+對(duì)比無明顯差異，提示壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸療法與臨床常用藥物療效相當(dāng)。因此，壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸療法治療原發(fā)性痛經(jīng)具有明顯的療效，值得在臨床上進(jìn)一步推廣。