楊馨悅，葉嘉民，楊 帆，馬文韜，何彩云，羅淞元，劉繼濤，羅建方

［1.華南理工大學(xué)醫(yī)學(xué)院，廣州 510006；2.廣東省心血管病研究所心內(nèi)科廣東省人民醫(yī)院（廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院），廣州 510080；3.廣東省人民醫(yī)院（廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院）急危重癥醫(yī)學(xué)科，廣州 510080］

主動(dòng)脈瘤是一種危及生命的心血管疾病，通常定義為主動(dòng)脈直徑擴(kuò)張超過正常直徑的50%［1］。根據(jù)其解剖位置的不同，主動(dòng)脈瘤通常分為胸主動(dòng)脈瘤（thoracic aortic aneurysm，TAA）和腹主動(dòng)脈瘤（abdominal aortic aneurysm，AAA）［2］。主動(dòng)脈瘤患者沒有明顯癥狀，體內(nèi)動(dòng)脈瘤常呈進(jìn)行性擴(kuò)張，最終導(dǎo)致主動(dòng)脈破裂并帶來超過80%的病死率［3］。目前主動(dòng)脈瘤的治療措施有限，只能進(jìn)行晚期手術(shù)干預(yù)，包括主動(dòng)脈腔內(nèi)修復(fù)術(shù)和外科主動(dòng)脈置換術(shù)［4］。因此，通過深入研究主動(dòng)脈瘤的發(fā)病機(jī)制，尋找潛在的生物標(biāo)志物，將有助于更加方便快速地診斷主動(dòng)脈瘤。同時(shí)，可以為主動(dòng)脈瘤的治療提供新的分子治療策略，在主動(dòng)脈瘤進(jìn)展早期針對(duì)性地進(jìn)行藥物干預(yù)，最大限度降低患者病死率。主動(dòng)脈瘤病理特征包括炎癥細(xì)胞浸潤，平滑肌細(xì)胞凋亡和細(xì)胞外基質(zhì)降解等［5］。已有研究探索了影響主動(dòng)脈瘤進(jìn)展的基因表達(dá)。一些研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞因子可以作為主動(dòng)脈瘤的生物標(biāo)志物，例如腫瘤壞死因子、干擾素-γ 和轉(zhuǎn)化生長因子-1β［6］。而血液循環(huán)中巨噬細(xì)胞遷移抑制因子水平與初始AAA 直徑大小呈正相關(guān)［7］。骨保護(hù)素也在AAA 擴(kuò)張過程中表達(dá)量增加，可能用于預(yù)測(cè)AAA 進(jìn)展［8］。然而，Karlsson 等［9］在臨床研究中發(fā)現(xiàn)，許多潛在的生物標(biāo)志物并不能很好地預(yù)測(cè)主動(dòng)脈瘤的擴(kuò)張。近年來，生物信息學(xué)分析已成為探討疾病發(fā)病機(jī)制的重要方式之一，多種測(cè)序技術(shù)從轉(zhuǎn)錄組水平揭示了疾病的基因表達(dá)譜［10］。本研究通過生物信息學(xué)技術(shù)，綜合分析正常樣本與主動(dòng)脈瘤樣本的基因芯片與單細(xì)胞測(cè)序結(jié)果。本研究通過機(jī)器學(xué)習(xí)篩選出4 個(gè)潛在的診斷標(biāo)志物基因，并通過免疫浸潤分析發(fā)現(xiàn)了與主動(dòng)脈瘤發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的可能機(jī)制與治療靶點(diǎn)。

1 資料和方法

1.1 數(shù)據(jù)來源和預(yù)處理

本研究的分析流程如圖1A 所示。通過Gene Expression Omnibus（GEO）數(shù)據(jù)庫（https：//www.nc?bi.nlm.nih.gov/geo/）下載所需的數(shù)據(jù)集：GSE165470、GSE98278、GSE57691、GSE7084、GSE5180、GSE47?472、GSE52093、GSE9106和GSE166676。其中GSE?165470 數(shù)據(jù)集包含10 例AAA 樣本；GSE98278 包含79 例AAA 樣本；GSE57691 包含49 例AAA 樣本，10 例正常腹主動(dòng)脈樣本；GSE7084 包含2 例AAA樣本，2 例正常腹主動(dòng)脈樣本；GSE5180 包含12 例TAA 樣本；GSE47472 包含14 例AAA 樣本，8 例正常腹主動(dòng)脈樣本；GSE52093 包含5 例正常胸主動(dòng)脈樣本；GSE9106 包括36 例正常對(duì)照者外周血樣本和58 例TAA 外周血樣本；GSE166676 數(shù)據(jù)集為單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)，包含3 例正常腹主動(dòng)脈樣本，3 例AAA 樣本。通過背景校正處理每個(gè)數(shù)據(jù)集，使用“sva”R 軟件包（版本3.42.0）的ComBat 函數(shù)去除批次效應(yīng)，將數(shù)據(jù)合并和歸一化。

1.2 差異表達(dá)基因的分析

使用“l(fā)imma”R 軟件包（版本3.50.0）鑒定差異表達(dá)基因（differentially expressed genes，DEGs），P＜0.05 和|log2Fold change（LogFC）|＞1.5 被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。通過R（www.r-project.org）生成了熱圖和火山圖。

1.3 基因本體論分析和京都基因和基因組百科全書分析

利用“ClusterProfiler”R 軟件包（版本4.2.1）探索了差異表達(dá)基因（differentially expressed genes，DEGs）涉及的基因本體論（Gene Ontology，GO）分析和京都基因和基因組百科全書（Kyoto Encyclo?pedia of Genes and Genomes，KEGG）分析。將P＜0.05 設(shè)置為篩選條件出重要的GO 術(shù)語和KEGG通路。

1.4 基因集富集分析

通過“ClusterProfiler”R 軟件包（版本4.2.1）探索了基因表達(dá)矩陣中的基因集富集分析（Gene set enrichment analysis，GSEA），選擇“c2.cp.kegg.v7.4.symbols.gmt”作為參考基因集。假發(fā)現(xiàn)率＜0.25 和P＜0.05 為顯著富集。

1.5 診斷標(biāo)志物的篩選與驗(yàn)證

使用“glmnet”R 軟件包（版本4.1-3），通過LASSO 回歸算法來篩選主動(dòng)脈瘤的診斷標(biāo)志物，使用“pROC”R 軟件包（版本1.18.0）生成受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC）用來驗(yàn)證AAA 的診斷價(jià)值。計(jì)算曲線下面積（the area under the curve，AUC），生成ROC。

1.6 免疫細(xì)胞浸潤分析

使用“IOBR”R 軟件包，選擇了quanTIseq 算法計(jì)算了每個(gè)樣本的10 種免疫浸潤細(xì)胞評(píng)分。推斷的10 種細(xì)胞類型包括B 細(xì)胞、M1 型巨噬細(xì)胞、M2 型巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、CD4+T 細(xì)胞、CD8+T 細(xì)胞、Treg 細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞。繪制相關(guān)性熱圖，可視化10 種免疫細(xì)胞浸潤的相關(guān)性。用“cor.test”函數(shù)對(duì)診斷標(biāo)記物和浸潤的免疫細(xì)胞進(jìn)行Spearman 相關(guān)分析。

1.7 單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)分析

利用“Seurat”R 軟件包（版本4.0.6）篩選出基因數(shù)量200～5 000 和線粒體基因占比＜20%的細(xì)胞進(jìn)行下一步研究。隨后利用“Seurat”R 軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理。隨后采用“Seurat”R 軟件包的“RunPCA”函數(shù)進(jìn)行降維分析和UMAP 聚類。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS 軟件23.0 版對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以（）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 數(shù)據(jù)收集和差異表達(dá)基因的分析結(jié)果

從GEO 數(shù)據(jù)庫下載所需數(shù)據(jù)集的原始表達(dá)譜。將數(shù)據(jù)集GSE165470、GSE57691、GSE98278、GSE7084 和GSE5180 設(shè)置為訓(xùn)練集，將數(shù)據(jù)集GSE47472、GSE52093 設(shè)置為驗(yàn)證集（圖1A）。為了消除不同測(cè)序平臺(tái)和不同處理批次的批次效應(yīng)，使用了ComBat 函數(shù)來去除數(shù)據(jù)集間的批次影響，結(jié)果顯示，在訓(xùn)練集的UMAP 圖中，5 個(gè)數(shù)據(jù)集的樣本被明顯分開；而去除批次效應(yīng)后，5個(gè)數(shù)據(jù)集樣本混合在一起，這說明批次效應(yīng)被消除（圖1B）。將訓(xùn)練集數(shù)據(jù)合并和歸一化后，以|Log2FC|＞1.5 為閾值，發(fā)現(xiàn)正常組和主動(dòng)脈瘤組有2 006 個(gè)GEGs，其中807 個(gè)DEGs 在主動(dòng)脈瘤組高表達(dá)，1 199 個(gè)DEGs 在主動(dòng)脈瘤組低表達(dá)（圖1C-E）。

圖1 數(shù)據(jù)收集和DEGs 的分析圖（A：研究分析流程；B：基因表達(dá)數(shù)據(jù)集的UMAP 圖，各顏色代表來自不同數(shù)據(jù)集的樣本；C：訓(xùn)練集中正常組和主動(dòng)脈瘤組DEGs 的熱圖和聚類分析，紅色為高表達(dá)水平，藍(lán)色為低表達(dá)水平；D：訓(xùn)練集中正常組和主動(dòng)脈瘤組DEGs 的火山圖，紅色為表達(dá)上調(diào)；藍(lán)色為表達(dá)下調(diào)；黑色為表達(dá)無差異；E：訓(xùn)練集中正常組和主動(dòng)脈瘤組DEGs 的數(shù)量統(tǒng)計(jì)圖，紅色為表達(dá)上調(diào)，藍(lán)色為表達(dá)下調(diào)）

2.2 差異表達(dá)基因的功能和通路富集分析結(jié)果

為了研究鑒定出的DEGs 在動(dòng)脈瘤中的生物學(xué)功能，我們進(jìn)行了GO 富集分析和KEGG 通路富集分析。在GO 富集分析中，DEGs 顯著富集了細(xì)胞增殖、細(xì)胞表面受體信號(hào)通路、細(xì)胞黏附、細(xì)胞激活和白細(xì)胞激活等生物過程（biological process，BP），囊泡、質(zhì)膜部分、胞質(zhì)、質(zhì)膜的組成部分和胞質(zhì)囊泡等細(xì)胞組分（cellular component，CC），還顯著富集了細(xì)胞骨架蛋白結(jié)合、氧化還原酶活性、酶結(jié)合、信號(hào)受體結(jié)合和細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)成分等分子功能（molecular function，MF）（圖2A-B）。同時(shí)，在KEGG 通路富集分析中，發(fā)現(xiàn)DEGs 主要參與Th1 和Th2 細(xì)胞分化、細(xì)胞因子和細(xì)胞因子受體相互作用、趨化因子信號(hào)通路等免疫相關(guān)信號(hào)通路（圖2C-D），這說明免疫反應(yīng)在主動(dòng)脈瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。進(jìn)一步對(duì)典型的免疫反應(yīng)相關(guān)通路進(jìn)行了GSEA 分析發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞因子和細(xì)胞因子受體相互作用、趨化因子信號(hào)通路兩個(gè)通路在主動(dòng)脈瘤組中顯著富集（圖2E）。

圖2 DEGs 的功能和通路富集分析圖［A-B：訓(xùn)練集中DEGs 的GO 富集分析柱狀圖（A）和氣泡圖（B）；C-D：訓(xùn)練集中DEGs 的KEGG 基因集富集分析柱狀圖（C）和氣泡圖（D）；E：訓(xùn)練集中DEGs 的GSEA 富集圖］

2.3 發(fā)病相關(guān)基因的篩選

通過使用LASSO 回歸算法，從DEGs 中識(shí)別出35 個(gè)基因可能與主動(dòng)脈瘤發(fā)病顯著相關(guān)（圖3A）。在驗(yàn)證集中進(jìn)一步驗(yàn)證了這35 個(gè)基因的表達(dá)情況（圖3B）發(fā)現(xiàn)，在訓(xùn)練集和驗(yàn)證集中，CXCL5和TGM3都在主動(dòng)脈瘤組中高表達(dá)，并且差異顯著；同時(shí)，BTC和ITGA10都在主動(dòng)脈瘤組中表達(dá)減少，并且有顯著差異性（圖3C-D）。提示CXCL5、TGM3、BTC和ITGA10可能參與主動(dòng)脈瘤的發(fā)病。

圖3 發(fā)病相關(guān)基因的篩選圖（A：LASSO 回歸算法分析訓(xùn)練集中DEGs，篩選發(fā)病相關(guān)基因；B：維恩圖展示訓(xùn)練集和驗(yàn)證集中發(fā)病相關(guān)基因的交集；C：小提琴圖展示訓(xùn)練集中篩選發(fā)病相關(guān)基因的表達(dá)量；D：小提琴圖展示驗(yàn)證集中篩選發(fā)病相關(guān)基因的表達(dá)量）

2.4 潛在診斷標(biāo)志物的驗(yàn)證

ROC 曲線分析進(jìn)一步檢驗(yàn)所選主動(dòng)脈瘤發(fā)病相關(guān)基因的診斷效能顯示，在訓(xùn)練集和驗(yàn)證集中，4 個(gè)基因均能很好地區(qū)分主動(dòng)脈瘤組織與正常主動(dòng)脈組織。所有基因的AUC 均大于0.7，說明這些基因?qū)χ鲃?dòng)脈瘤診斷的敏感度和特異度都很高（圖4A-B）。然而，在臨床應(yīng)用中獲取主動(dòng)脈組織較難，所以需要進(jìn)一步探討所選的基因是否在外周血中也具有良好的診斷效能。數(shù)據(jù)集GSE9106分析發(fā)現(xiàn)，TGM3在主動(dòng)脈瘤組外周血中高表達(dá)且差異顯著，并且AUC=0.686，表明外周血TGM3能很好地區(qū)分主動(dòng)脈瘤患者和正常人（圖4C-D）。通過機(jī)器學(xué)習(xí)分析訓(xùn)練集并聯(lián)合訓(xùn)練集驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，主動(dòng)脈組織中CXCL5、TGM3、BTC和ITGA10具有良好的診斷效能。通過外周血數(shù)據(jù)集發(fā)現(xiàn)TGM3可以作為主動(dòng)脈瘤的血液循環(huán)生物標(biāo)志物。

圖4 潛在診斷標(biāo)志物的驗(yàn)證圖（A：訓(xùn)練集中4 個(gè)候選基因的診斷效能驗(yàn)證ROC 圖；B：驗(yàn)證集中4 個(gè)候選基因的診斷效能驗(yàn)證ROC 圖；C：小提琴圖展示外周血中，正常組和主動(dòng)脈瘤組TGM3 的表達(dá)量；D：外周血集中TGM3 的診斷效能驗(yàn)證ROC 圖）

2.5 免疫細(xì)胞浸潤分析

KEGG 通路富集和GSEA 富集發(fā)現(xiàn)，免疫反應(yīng)相關(guān)通路在主動(dòng)脈瘤發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。為了進(jìn)一步研究免疫反應(yīng)在主動(dòng)脈瘤中的作用，我們用quanTIseq 算法對(duì)正常主動(dòng)脈組和主動(dòng)脈瘤組中的10 種免疫細(xì)胞進(jìn)行了評(píng)估（圖5A）。10 種免疫細(xì)胞的相關(guān)性熱圖顯示，M1 型巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞、NK 細(xì)胞呈顯著正相關(guān)；CD4+T 細(xì)胞和單核細(xì)胞、NK 細(xì)胞也呈正相關(guān)（圖5B）。為了尋找可能的主動(dòng)脈瘤治療靶點(diǎn)，進(jìn)一步分析了CXCL5、TGM3、BTC和ITGA10與免疫細(xì)胞的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CXCL5基因與M1 型巨噬細(xì)胞含量呈顯著正相關(guān)（圖5C）。為了進(jìn)一步探討CXCL5來源，分析了人類AAA 的單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)。UMAP聚類分析得到8 種細(xì)胞，包括：巨噬細(xì)胞（第7、8、9 簇），單核細(xì)胞（第5 簇），T 細(xì)胞（第0、11 簇），B細(xì)胞（第2、12、14、16 簇），NK 細(xì)胞（第4、6 簇），內(nèi)皮細(xì)胞（第13 簇），成纖維細(xì)胞（第10 簇）和平滑肌細(xì)胞（第1、3、15 簇）（圖5D）。我們?cè)趩渭?xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)中發(fā)現(xiàn)CXCL5主要由巨噬細(xì)胞表達(dá)（圖5E），與基因芯片分析結(jié)果相一致。提示巨噬細(xì)胞可能通過增加CXCL5表達(dá)來促進(jìn)主動(dòng)脈瘤的形成。免疫細(xì)胞浸潤分析和單細(xì)胞測(cè)序分析相結(jié)合發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞高表達(dá)CXCL5，這可能是主動(dòng)脈瘤的發(fā)病機(jī)制之一。

圖5 免疫細(xì)胞浸潤分析圖（A：訓(xùn)練集DEGs 中，正常組和主動(dòng)脈瘤組11 種免疫細(xì)胞的直方圖；B：訓(xùn)練集DEGs 中，正常組和主動(dòng)脈瘤組11 種免疫細(xì)胞的相關(guān)性熱圖，每格中的數(shù)字代表水平和垂直坐標(biāo)上的兩種免疫細(xì)胞相關(guān)系數(shù)；C：散點(diǎn)圖顯示CXCL5 表達(dá)量與M1 型巨噬細(xì)胞呈正相關(guān)；D：正常人與AAA 患者腹主動(dòng)脈單細(xì)胞測(cè)序的UMAP 降維圖；E：特征圖展示CXCL5 的表達(dá)水平和分布，圖形代表巨噬細(xì)胞）

3 討論

現(xiàn)在的臨床技術(shù)已能夠治療擴(kuò)張的主動(dòng)脈瘤，延長患者的生存時(shí)間，但是目前的手術(shù)治療僅適用于直徑較大的動(dòng)脈瘤，且存在一系列的并發(fā)癥［11］。因此，通過探索主動(dòng)脈瘤的發(fā)病機(jī)制尋求可能的治療靶點(diǎn)非常必要。本研究利用生物信息學(xué)技術(shù)綜合分析了主動(dòng)脈瘤發(fā)病過程中的關(guān)鍵基因和生物學(xué)過程。在GO 分析中，GEGs 參與了細(xì)胞增殖與白細(xì)胞激活等生物過程。既往研究已發(fā)現(xiàn)，在主動(dòng)脈瘤發(fā)病過程中，免疫細(xì)胞大量增殖并激活［12］。同時(shí)，DEGs 還富集了細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)成分等分子功能。細(xì)胞外基質(zhì)降解是主動(dòng)脈瘤的重要病理特征之一，DEGs 可能通過影響細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)而使主動(dòng)脈結(jié)構(gòu)薄弱、更易擴(kuò)張與破裂［13］。本研究還發(fā)現(xiàn)兩組間的DEGs 在KEGG 分析中主要富集了T 細(xì)胞分化、細(xì)胞因子、趨化因子等相關(guān)的免疫信號(hào)通路。這一結(jié)果印證了既往其他主動(dòng)脈瘤研究的結(jié)論。研究發(fā)現(xiàn)，在人類主動(dòng)脈瘤血管壁中干擾素-γ 含量增加，而干擾素-γ 促進(jìn)CD4+T 細(xì)胞向Th1 細(xì)胞分化［14］。同時(shí)，白細(xì)胞介素-1β 和腫瘤壞死因子-α 等細(xì)胞因子，也在主動(dòng)脈瘤組織中高表達(dá)。而抑制趨化因子CXCL4已被證明可以抑制AAA 進(jìn)展［15］。

為了探索主動(dòng)脈瘤潛在的診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，我們通過機(jī)器學(xué)習(xí)的方法來協(xié)助篩選目的基因。LASSO 回歸是機(jī)器學(xué)習(xí)中的一種方法，主要用于特征變量的篩選和最佳分類模型的建立［16］。通過使用驗(yàn)證集進(jìn)一步驗(yàn)證所選基因，最后確定了CXCL5、TGM3、BTC和ITGA10是主動(dòng)脈瘤發(fā)病相關(guān)基因，并且TGM3可以作為主動(dòng)脈瘤的循環(huán)診斷標(biāo)志物之一。然而，在主動(dòng)脈瘤患者外周血中，CXCL5、BTC和ITGA10基因沒有明顯的差異，這可能是因?yàn)檫@3 種基因主要在主動(dòng)脈組織中發(fā)揮生物學(xué)功能，未被分泌到外周血中，因此不能作為循環(huán)標(biāo)志物。目前主動(dòng)脈瘤主要通過影像學(xué)檢查診斷，但是因?yàn)橹鲃?dòng)脈瘤起病隱匿、通常沒有明顯癥狀，所以診斷率較低［17］。循環(huán)標(biāo)志物檢測(cè)便捷，可協(xié)助篩選出主動(dòng)脈瘤高危人群，有助于更加方便快速地診斷主動(dòng)脈瘤［18］。因此，本研究提供了一種主動(dòng)脈瘤輔助的臨床診斷策略。TGM3，也稱為轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶3，可催化異肽鍵的形成［19］。TGM3已被報(bào)道是多種不同類型腫瘤中的調(diào)節(jié)蛋白，并可作為腫瘤的預(yù)后生物標(biāo)記物［20］。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TGM3也可作為主動(dòng)脈瘤的循環(huán)診斷標(biāo)志物，但是TGM3的診斷效能需要更多臨床證據(jù)的支持。

CXCL5又稱為中性粒細(xì)胞激活肽，屬于CXC型趨化因子家族［21］。既往研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，使用他汀類藥物治療腹主動(dòng)脈瘤時(shí)，CXCL5水平也會(huì)隨之下降［22］。IgE 刺激小鼠AAA 加劇，在此過程中，CXCL5表達(dá)升高［23］。本研究結(jié)果與之前的研究一致，發(fā)現(xiàn)CXCL5在主動(dòng)脈瘤患者疾病組織中高表達(dá)；免疫浸潤分析發(fā)現(xiàn)，CXCL5與M1 型巨噬細(xì)胞含量正相關(guān)。然而免疫浸潤分析只是一種推測(cè)方法，與疾病譜中實(shí)際的的基因表達(dá)可能有所區(qū)別。因此，我們分析了AAA 患者的單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)。單細(xì)胞測(cè)序可以在單個(gè)細(xì)胞水平上，對(duì)轉(zhuǎn)錄組信息進(jìn)行高通量測(cè)序［24］。通過單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)，我們確定了巨噬細(xì)胞是CXCL5的主要來源。在免疫反應(yīng)中，CXCL5會(huì)招募免疫細(xì)胞浸潤至疾病部位［25］。特別地，CXCL5可以與中性粒細(xì)胞表面受體CXCR1 或CXCR2 結(jié)合，招募并激活中性粒細(xì)胞［26］。而中性粒細(xì)胞已被證明是小鼠主動(dòng)脈瘤形成的重要始動(dòng)因素之一［27］。中性粒細(xì)胞發(fā)揮吞噬、氧化等作用，還可分泌中性粒細(xì)胞細(xì)胞外網(wǎng)狀陷阱以損傷動(dòng)脈壁，促進(jìn)主動(dòng)脈瘤形成［28］。因此，我們推斷，巨噬細(xì)胞分泌CXCL5，促進(jìn)中性粒細(xì)胞浸潤至血管壁，協(xié)同作用使主動(dòng)脈擴(kuò)張，形成主動(dòng)脈瘤。本研究的免疫細(xì)胞相關(guān)性熱圖也支持這一結(jié)論：巨噬細(xì)胞與中性粒細(xì)胞呈正相關(guān)。在未來的研究中，我們將進(jìn)一步通過患者標(biāo)本與小鼠實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證這個(gè)假說。