賴 群，楊慧欣，郝書(shū)弘，胡春梅，居欣月，唐 艷*

(吉林大學(xué)第二醫(yī)院 1.腫瘤血液科；2.乳腺外科，吉林 長(zhǎng)春130041)

多囊蛋白-1(PC1)是一種受體樣膜蛋白，含有4302個(gè)氨基酸(aa)，一個(gè)大的細(xì)胞外N末端，11個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域和一個(gè)細(xì)胞內(nèi)C末端;多囊蛋白-2(PC2)是一種由968 個(gè)aa組成的陽(yáng)離子通道，含六個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)和細(xì)胞內(nèi)N-和C-末端，并能與PC1形成通道復(fù)合體和流量傳感器[1]。常染色體隱性多囊腎病(ARPKD)是由多囊腎肝病1(PKHD1)基因突變引起的，PKHD1編碼纖維囊蛋白(fibrocystin)，它也是一種大蛋白(4074 aa)，具有一個(gè)長(zhǎng)的細(xì)胞外N-末端、一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域和一個(gè)細(xì)胞質(zhì)C-末端[2]。除了腎，多囊蛋白在其他非腎臟組織也廣泛表達(dá)[3],Hu等在大鼠細(xì)支氣管纖毛中也檢測(cè)到多囊蛋白和纖維囊蛋白表達(dá)[4]。本文探討PC1、PC2和fibrocystin在正常肺組織、肺癌組織中的定位分布，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料在知情同意的原則下，本實(shí)驗(yàn)所采用的肺癌(腺癌)及癌旁肺組織石蠟包埋標(biāo)本從吉林大學(xué)第二醫(yī)院病理科獲得并經(jīng)病理診斷證實(shí)。

1.2 方法羊抗PC1(SC-130554)、羊抗PC2(SC-10377)均購(gòu)自Santa Cruz Biotechnology公司；Fibrocytin單克隆抗體來(lái)自Xing-Zhen Chen實(shí)驗(yàn)室保存[4]；二抗系Chemicon International公司產(chǎn)品。ABC免疫組化檢測(cè)試劑盒購(gòu)自Vector Laboratories，對(duì)二甲胺基偶氮苯(DAB)顯色試劑、蘇木素等均為Abcam公司產(chǎn)品。采用免疫組織化學(xué)ABC法，按試劑盒說(shuō)明書(shū)指導(dǎo)步驟進(jìn)行操作。

2 結(jié)果

2.1 PC1、PC2、fibrocystin蛋白在癌旁正常肺組織的表達(dá)

通過(guò)對(duì)癌旁支氣管上皮組織中PC1、PC2、fibrocystin蛋白免疫組化染色檢查，結(jié)果顯示：PC1在支氣管淺層上皮細(xì)胞的游離面(腔面)著色呈深染，伴胞漿少量著色，提示PC1主要表達(dá)于支氣管表淺上皮的游離面胞膜。PC2主要著色于支氣管淺層上皮細(xì)胞的胞漿，提示PC2主要表達(dá)于支氣管淺層上皮的胞質(zhì)。Fibrocystin蛋白在支氣管淺層上皮細(xì)胞的游離面或纖毛側(cè)呈深染，且在基底面和側(cè)面也有表達(dá)，并伴胞漿著色，表明它在胞膜及胞質(zhì)均有表達(dá)(圖1)。

圖1 癌旁支氣管上皮組織中多囊蛋白和fibrocystin蛋白的表達(dá)定位(×400)

2.2 PC1、PC2、fibrocystin蛋白在肺癌的表達(dá)

在肺癌組織，PC1、PC2、fibrocystin蛋白免疫組化染色結(jié)果顯示：PC1在肺癌細(xì)胞的胞膜及胞漿均著色，胞膜呈深染，提示PC1主要表達(dá)于肺癌細(xì)胞的胞膜。PC2主要著色于肺癌細(xì)胞的胞漿，少量胞膜著色且色淺，提示PC2主要表達(dá)于肺癌細(xì)胞的胞質(zhì)。Fibrocystin蛋白在胞膜及胞漿均著色，提示它在肺癌細(xì)胞胞膜和胞質(zhì)均存在(圖2)。

圖2 肺癌組織中多囊蛋白和fibrocystin蛋白的表達(dá)定位(×400)

3 討論

到目前為止，對(duì)多囊蛋白PC1、PC2和fibrocytin的研究主要是在多囊腎病(PKD)的背景下進(jìn)行的。Guillaume等發(fā)現(xiàn)在胎兒和剛出生階段，PC1在肺中的表達(dá)高于腎；而成人階段在肺中的表達(dá)低于腎[5]。PC1、PC2和fibrocystin都定位于腎上皮的初級(jí)纖毛，而PC1定位于細(xì)胞膜(質(zhì)膜)，PC2則位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜，fibrocystin定位腎初級(jí)纖毛的基底體、質(zhì)膜和細(xì)胞質(zhì)中[6]。三種囊蛋白在大鼠支氣管纖毛表達(dá)，存在于支氣管管腔側(cè)上皮，即運(yùn)動(dòng)纖毛細(xì)胞，PC1在細(xì)胞膜上表達(dá)，PC2定位于靜息細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(胞質(zhì))，而有絲分裂細(xì)胞的紡錘體和中間體上均可檢測(cè)到多囊蛋白，并且fibrocystin在整個(gè)細(xì)胞周期的中心體上均有表達(dá)[4]。本研究結(jié)果顯示：在成人肺支氣管上皮淺層細(xì)胞，PC1主要位于游離面胞膜，PC2主要胞質(zhì)表達(dá)，fibrocystin既表達(dá)于游離面胞膜，又在基底面和胞漿等表達(dá)。

Gargalionis等描述了結(jié)直腸腺癌及癌旁組織的多囊蛋白定位特點(diǎn)：在正常腸黏膜上皮，PC1主要表達(dá)在表皮細(xì)胞，而在癌細(xì)胞則主要是胞漿著色；PC2在淺層和隱匿的正常上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中僅為胞質(zhì)表達(dá)[7]。本研究在肺癌旁組織支氣管上皮的結(jié)果與上述正常腸黏膜上皮的表達(dá)相似，組織標(biāo)本來(lái)自肺腺癌，肺癌組織定位結(jié)果顯示PC1為胞膜和胞漿表達(dá)，PC2主要胞漿著色，也與上述結(jié)直腸腺癌組織的結(jié)果基本符合。在肺癌組織中，PC1、PC2和fibrocystin均陽(yáng)性表達(dá)，且明顯大于其在正常組織的著色強(qiáng)度和著色范圍，考慮可能與這些多囊蛋白參與腫瘤形成機(jī)制相關(guān)[7]。