胡銳 嚴(yán)立 朱進(jìn) 李善慶 安穎 楊春寶 王俊文

周圍神經(jīng)慢性卡壓損傷常致所支配的肌肉發(fā)生肌力減退、肌肉萎縮、肢體屈伸功能受限、特有的畸形等，嚴(yán)重影響患者肢體功能的恢復(fù)。在臨床上，肘管綜合征、腕管綜合征等周圍神經(jīng)卡壓損傷非常常見，早期通過外科手術(shù)，盡早解除神經(jīng)壓迫，可以起到很好的效果；但對(duì)于卡壓時(shí)間長、程度重的患者，由于骨骼肌失神經(jīng)支配后效應(yīng)器發(fā)生了不可逆的退變，而神經(jīng)再生緩慢，使得術(shù)后骨骼肌萎縮和纖維化無法恢復(fù)，故手術(shù)效果不甚理想。因此，探索骨骼肌失神經(jīng)支配后發(fā)生肌萎縮及纖維化的發(fā)生機(jī)制，在神經(jīng)長入前延緩骨骼肌萎縮及纖維化，是治療周圍神經(jīng)卡壓綜合征的關(guān)鍵因素之一。

miRNA作為一類新的基因表達(dá)調(diào)控分子，在骨骼肌發(fā)生發(fā)育、肌細(xì)胞增殖分化等方面發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用，其中一些miRNA可能會(huì)成為骨骼肌萎縮診斷、治療新的作用靶點(diǎn)。已觀察到TGF-β/CTGF在骨骼肌纖維化病變中均有過度表達(dá)，而高表達(dá)的miRNA-206及miRNA-26a可降低TGF-β1、TGF-β2和CTGF受體的表達(dá)水平和膠原含量。本實(shí)驗(yàn)從2020年5月至2020年7月，采用Mackinnon等[1]建立的大鼠坐骨神經(jīng)卡壓模型的方法，模擬人體周圍神經(jīng)慢性卡壓損傷病理過程，定期檢測神經(jīng)所支配骨骼肌組織內(nèi)miRNA-206及miRNA-26a表達(dá)的變化及與TGF-β及COL-I含量的關(guān)系，探討miRNA-206及miRNA-26a在失神經(jīng)骨骼肌萎縮及纖維化過程中所起到的作用，從而為神經(jīng)卡壓后骨骼肌纖維化的治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及材料

清潔級(jí)健康成年雄性SD大鼠50只，體重（200±15）g，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SYXK（鄂）2019—0157；常規(guī)分籠飼養(yǎng)，自由飲水進(jìn)食；單克隆兔抗鼠TGF-β及COL-I抗體購自英國Abcam公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

大鼠以戊巴比妥鈉（40 mg/kg）做腹腔注射麻醉（見圖1A）；無菌條件下，右下肢背側(cè)部縱向切口，暴露股二頭肌，經(jīng)股間鈍性分離，游離坐骨神經(jīng)；采用Mackinnon所設(shè)計(jì)的坐骨神經(jīng)慢性損傷模型，于梨狀肌下緣約0.5 cm處，將消毒好的硅膠管（長10 mm，內(nèi)徑1 mm，外徑2 mm）縱向切開一邊，套住坐骨神經(jīng)，然后用3條5-0尼龍線捆扎固定硅膠管，使硅膠管內(nèi)徑與神經(jīng)直徑相當(dāng)，造成坐骨神經(jīng)受到環(huán)形擠壓（見圖1B），作為手術(shù)組（實(shí)驗(yàn)組）。大鼠左側(cè)大腿作為假手術(shù)組（對(duì)照組），只暴露坐骨神經(jīng)，僅造成牽拉損傷（見圖1C）。止血消毒后關(guān)閉傷口，常規(guī)方式飼養(yǎng)（見圖1D）。分別于術(shù)后2、4、6、8、10周時(shí)間點(diǎn)，隨機(jī)選取大鼠10只，麻醉下處死，取大鼠雙側(cè)后腿完整腓腸肌，備檢。

圖1 A.大鼠雙后腿分別行假手術(shù)和神經(jīng)卡壓手術(shù)；B.實(shí)驗(yàn)組右后腿坐骨神經(jīng)尼龍線捆綁硅膠管，造成卡壓；C.對(duì)照組僅暴露左后腿坐骨神經(jīng)；D.術(shù)后傷口縫合，常規(guī)飼養(yǎng)

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 腓腸肌濕重比測定

將大鼠雙側(cè)腓腸肌自股骨內(nèi)外髁起點(diǎn)至跟骨結(jié)節(jié)處完整取下，用電子天平準(zhǔn)確稱量腓腸肌濕重，計(jì)算實(shí)驗(yàn)組側(cè)與對(duì)照組側(cè)腓腸肌濕重的比值。然后將標(biāo)本快速液氮冷凍保存于-80℃冰箱備檢。

1.3.2 HE染色觀察腓腸肌形態(tài)

大鼠腓腸肌固定時(shí)間24 h后，流水充分洗滌，將組織塊修正為適當(dāng)?shù)拇笮?，切取各組橫切面標(biāo)本，常規(guī)固定、脫水、浸蠟、包埋，5μm厚連續(xù)切片，HE染色后顯微鏡下觀察腓腸肌肌纖維排列及測量截面積萎縮情況。

1.3.3 Masson三色法染色觀察腓腸肌纖維化程度

大鼠腓腸肌石蠟切片4μm，脫蠟至水到蒸餾水；滴加Masson復(fù)合染色液染色5 min；蒸餾水沖掉染色；滴加磷鉬酸染色5 min，甩干；滴加苯胺藍(lán)染色5 min蒸餾水稍沖。滴加分化液分化30～60 s兩次。顯微鏡下觀察腓腸肌肌纖維與膠原纖維。

1.3.4 腓腸肌TGF-β及COL-I免疫組化分析

常規(guī)石蠟切片脫蠟、水化；PBS緩沖液洗滌切片后滴加3%H2O2；PBS緩沖液沖洗后滴加山羊血清封閉液；滴加兔抗TGF-β或COL-I抗體50μL，置于濕盒內(nèi)，4℃過夜，滴加生物素化羊抗兔IgG，PBS洗后行DAB顯色，自來水終止顯色，蘇木精復(fù)染，1%鹽酸酒精分化脫水，透明，中性樹膠封片后鏡檢。應(yīng)用德國LEICA系統(tǒng)，在200倍視野下進(jìn)行圖像分析，用陽性反應(yīng)細(xì)胞內(nèi)的平均強(qiáng)度表示發(fā)生免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)量的多少。

1.3.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-PCR）技術(shù)檢測miRNA-206及miRNA-26a及TGF-β、COL-ImRNA的表達(dá)

94℃預(yù)變性3 min，94℃變性30 s，53℃退火30 s，72℃延伸30 s，共50個(gè)循環(huán)。應(yīng)用SYBRGreen I熒光染料技術(shù)行實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)，獲取各組標(biāo)本的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算機(jī)分析Ct值，每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)熒光強(qiáng)度達(dá)到系統(tǒng)認(rèn)為的有目的DNA合成時(shí)的循環(huán)數(shù)（以陰性對(duì)照作參考）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用計(jì)算機(jī)圖像分析儀，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，符合正態(tài)分布的兩組計(jì)量資料比較時(shí)使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腓腸肌濕重比測定

于術(shù)后2、4、6、8、10周，將大鼠雙側(cè)后腿腓腸肌完整取下，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組腓腸肌明顯萎縮，色澤蒼白，活性差；電子秤準(zhǔn)確稱取肌肉濕重，并計(jì)算大鼠右側(cè)（實(shí)驗(yàn)組）腓腸肌濕重與左側(cè)（對(duì)照組）腓腸肌濕重的比值，并計(jì)算各組內(nèi)比值的均值，隨著卡壓時(shí)間延長，此均值逐漸減小，且兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 腓腸肌HE染色形態(tài)變化及肌纖維截面萎縮情況

各取材時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組大鼠腓腸肌肌絲肌節(jié)排列整齊，胞核明顯，位于肌細(xì)胞中央。肌細(xì)胞間見豐富的毛細(xì)血管網(wǎng)及少量的成纖維細(xì)胞（見圖2A）。實(shí)驗(yàn)組大鼠腓腸肌纖維隨著卡壓時(shí)間的不同而呈現(xiàn)不同的改變：2周時(shí)腓腸肌纖維橫截面呈現(xiàn)腫脹樣改變，成纖維細(xì)胞核仁增大（見圖2B）；6周時(shí)可見肌纖維染色不均，橫截面變細(xì)，肌細(xì)胞間隙變大，肌間隙纖維結(jié)締組織增多（見圖2C）；10周時(shí)可見肌纖維橫截面明顯變細(xì)，肌纖維輪廓模糊，肌絲肌節(jié)排列紊亂、崩解，肌束間成纖維細(xì)胞顯著增多，結(jié)締組織顯著增多（見圖2D）。

圖2 腓腸肌HE染色（×200）：A.對(duì)照組；B.實(shí)驗(yàn)組2周時(shí)；C.實(shí)驗(yàn)組6周時(shí)；D.實(shí)驗(yàn)組10周時(shí)

對(duì)照組腓腸肌肌纖維直徑相比，實(shí)驗(yàn)組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)肌纖維直徑均小于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；實(shí)驗(yàn)組術(shù)后2、6、10周組肌纖維直徑均值逐漸減小，組內(nèi)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。具體數(shù)據(jù)見表1。

表1 兩組大鼠術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)腓腸肌肌纖維直徑比較（±s，n=50，μm）

表1 兩組大鼠術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)腓腸肌肌纖維直徑比較（±s，n=50，μm）

注：*表示與實(shí)驗(yàn)組2周時(shí)直徑比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；#表示實(shí)驗(yàn)組2、6、10周數(shù)據(jù)均值逐漸變小，且組內(nèi)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

組別對(duì)照組實(shí)驗(yàn)組t值P值2周29.15±1.34 27.39±0.94#2.351 0.013 1 4周25.85±1.29 23.37±0.99*3.622 0.001 9 6周26.05±1.09 23.81±0.95*#3.856 0.001 2 8周28.31±1.04 19.14±4.28*14.36＜0.001 10周23.80±0.97 18.86±1.20*#8.630＜0.001

2.3 Masson染色觀察形態(tài)變化

膠原纖維呈藍(lán)色，骨骼肌纖維呈紅色，細(xì)胞核呈深藍(lán)色。各取材時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組腓腸肌肌纖維排列整齊，未見肌纖維萎縮，肌束間見少量膠原纖維包繞（見圖3A）。實(shí)驗(yàn)組隨著神經(jīng)卡壓的時(shí)間延長，見腓腸肌纖維逐漸萎縮變細(xì)，甚至輪廓模糊，肌纖維間的間隙逐漸增寬，增寬之肌纖維間隙間藍(lán)色膠原纖維逐漸增多，且染色也逐漸加深。即隨著神經(jīng)卡壓時(shí)間的延長，肌纖維所占截面積逐漸減少，膠原纖維所占截面積逐漸增大，原來肌纖維占據(jù)的空間大量被膠原纖維所代替（見圖3B-D）。

圖3 腓腸肌Masson染色（×200）：A.對(duì)照組；B.實(shí)驗(yàn)組2周時(shí)；C.實(shí)驗(yàn)組6周時(shí)；D.實(shí)驗(yàn)組10周時(shí)

2.4 免疫組化染色觀察及圖像分析

光鏡下，陽性染色位于細(xì)胞漿膜，為黃色或棕黃色染色顆粒或片狀分布于細(xì)胞內(nèi)。對(duì)照組大鼠肌細(xì)胞的胞質(zhì)TGF-β、COL-I的表達(dá)均呈陰性或弱陽性（見圖4A、圖4B）；實(shí)驗(yàn)組TGF-β及COL-I的表達(dá)隨時(shí)間變化增強(qiáng)，且明顯高于對(duì)照組（見圖4C、4D）。計(jì)算機(jī)軟件分析圖片陽性染色強(qiáng)度見表2、表3，其吸光度值越大，表示陽性染色物質(zhì)越多。兩組不同時(shí)間TGF-β吸光度值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖4 A.對(duì)照組8周時(shí)TGF-β陽性染色不明顯（×200）；B.對(duì)照組8周時(shí)COL-I陽性染色不明顯（×200）；C.實(shí)驗(yàn)組8周時(shí)見大量片狀棕黃色TGF-β陽性染色（×200）；D.實(shí)驗(yàn)組8周時(shí)大量條索狀棕黃色COL-I陽性染色（×200）

表2 兩組術(shù)后不同時(shí)間TGF-β吸光度值測量比較（±s，n=50）

表2 兩組術(shù)后不同時(shí)間TGF-β吸光度值測量比較（±s，n=50）

組別對(duì)照組實(shí)驗(yàn)組2周11.71±0.97 13.88±1.41 4周11.48±1.85 15.26±1.01 6周12.19±1.35 17.21±1.13 8周10.69±1.44 18.55±1.27 10周11.59±1.55 20.08±1.56 t值P值3.093 0.006 3 4.574 0.000 2 7.003＜0.001 10.04＜0.001 9.544＜0.001

表3 兩組術(shù)后不同時(shí)間COL-I吸光度值測量比較（±s，n=50）

表3 兩組術(shù)后不同時(shí)間COL-I吸光度值測量比較（±s，n=50）

組別對(duì)照組實(shí)驗(yàn)組t值P值2周18.39±1.11 20.35±1.89 2.356 0.030 1 4周17.12±1.41 20.65±1.82 3.865 0.001 1 6周18.61±1.75 22.36±1.01 4.657 0.000 2 8周17.94±1.66 22.91±1.69 5.125＜0.001 10周17.68±1.81 24.13±1.36 7.059＜0.001

2.5 兩組不同時(shí)間TGF-βmRNA、COL-ImRNA、miRNA-206、miRNA-26a的表達(dá)變化

以對(duì)照組TGF-βmRNA、COL-ImRNA，以及miRNA-206、miRNA-26a表達(dá)作為參考，實(shí)驗(yàn)組TGF-βmRNA及COL-I mRNA表達(dá)顯著升高，且在神經(jīng)卡壓術(shù)后早期，其增加較快；miRNA-206及miRNA-26a表達(dá)均是先降低后升高，4周時(shí)表達(dá)最低，后表達(dá)逐漸升高。兩組在不同時(shí) 間TGF-βmRNA、COL-I mRNA，以及miRNA-206、miRNA-26a表達(dá)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。具體數(shù)據(jù)見表4-7。

表4 兩組不同時(shí)間TGF-βmRNA表達(dá)相對(duì)值（±s，n=50）

表4 兩組不同時(shí)間TGF-βmRNA表達(dá)相對(duì)值（±s，n=50）

組別對(duì)照組實(shí)驗(yàn)組t值P值2周0.111 0±0.005 2 0.117 7±0.004 5 2.391 0.027 9 4周0.122 7±0.006 4 0.133 5±0.006 1 3.291 0.004 1 6周0.137 5±0.004 9 0.146 6±0.006 0 2.899 0.009 6 8周0.131 0±0.005 2 0.152 3±0.006 2 6.606＜0.001 10周0.127 4±0.007 4 0.170 4±0.008 8 9.685＜0.001

表5 兩組不同時(shí)間COL-ImRNA表達(dá)相對(duì)值（±s，n=50）

表5 兩組不同時(shí)間COL-ImRNA表達(dá)相對(duì)值（±s，n=50）

組別對(duì)照組實(shí)驗(yàn)組t值P值2周14.81±0.71 15.91±0.84 2.489 0.022 8 4周14.65±1.18 16.52±1.15 2.964 0.008 3 6周15.21±1.12 17.24±0.97 3.648 0.001 8 8周15.15±1.13 17.49±1.16 3.575 0.002 2 10周14.80±1.29 18.64±1.04 5.898＜0.001

表6 兩組不同時(shí)間miRNA-206表達(dá)相對(duì)值（±s，n=50）

表6 兩組不同時(shí)間miRNA-206表達(dá)相對(duì)值（±s，n=50）

注：實(shí)驗(yàn)組miRNA-206表達(dá)于4周時(shí)降至最低，后逐漸升高。

組別對(duì)照組實(shí)驗(yàn)組t值P值2周6.157 3±0.777 5 5.282 4±0.786 9 2.244 0.0377 4周7.234 6±0.570 7 3.661 0±1.786 8 11.1＜0.001 6周6.837 9±0.660 0 4.444 4±1.275 9 6.508＜0.001 8周6.705 0±0.707 2 5.564 0±0.797 5 3.153 0.0055 10周7.097 4±0.750 3 6.145 7±0.863 7 2.23 0.0387

表7 兩組不同時(shí)間miRNA-26a表達(dá)相對(duì)值（±s，n=50）

表7 兩組不同時(shí)間miRNA-26a表達(dá)相對(duì)值（±s，n=50）

注：實(shí)驗(yàn)組miRNA-26a表達(dá)于4周時(shí)降至最低，后逐漸升高。

組別對(duì)照組實(shí)驗(yàn)組t值P值2周2.251 8±0.270 9 1.805 9±0.250 9 3.106 0.006 1 4周2.087 0±0.339 3 1.220 9±0.178 3 5.332＜0.001 6周1.930 5±0.285 3 1.451 4±0.189 9 3.51 0.002 5 8周2.063 9±0.364 6 1.532 6±0.238 0 2.884 0.009 9 10周2.199 5±0.360 4 1.654 9±0.328 6 2.864 0.010 3

3 討論

3.1 miRNA與失神經(jīng)骨骼肌纖維化的關(guān)系

本研究通過大鼠坐骨神經(jīng)慢性卡壓模型研究神經(jīng)支配腓腸肌的濕重、形態(tài)學(xué)變化及肌肉內(nèi)各種纖維化因子表達(dá)的變化，了解到隨著卡壓時(shí)間的延長，隨之發(fā)生骨骼肌肌節(jié)段損傷、肌原纖維降解、肌細(xì)胞線粒體破壞、肌管形成障礙、肌肉質(zhì)量減輕等病變，最終會(huì)導(dǎo)致不可逆的肌肉功能障礙。本研究檢測到miRNA-206及miRNA-26a在周圍神經(jīng)慢性卡壓致骨骼肌纖維化過程中表達(dá)先下調(diào)，后上調(diào)，于4周時(shí)降至最低，后逐漸升高，表明miRNA-206及miRNA-26a在骨骼肌損傷和修復(fù)中起到一定作用。但是，miRNA-206及miRNA-26a在實(shí)驗(yàn)過程中并不是簡單升高或降低，而是在不同時(shí)間出現(xiàn)波動(dòng)性變化，可見miRNA對(duì)肌肉纖維化的調(diào)控有多因素參與并且是非常復(fù)雜的過程。miRNA-206及miRNA-26a可能有多個(gè)靶基因，或者其靶基因可能受多個(gè)miRNA的調(diào)控，這種復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)式調(diào)節(jié)控制著骨骼肌各種纖維化因子的基因表達(dá)，是否還有其他重要的miRNA在肌肉纖維化過程中起到重要作用還需要更進(jìn)一步的研究[2-3]。Mok等[4]研究顯示，在骨骼肌組織中，存在特異性miRNA（miRNA-1、miRNA-206、miRNA-126、miRNA-26a等）參與了肌細(xì)胞的再生、分化、萎縮、功能發(fā)揮等各方面作用。Wang等[5]研究表明，miRNA-24、miRNA-26a、miRNA-181、miRNA-214、miRNA-1、miRNA-133、miRNA-206等可通過其靶基因YY1、HDAC4、IGE-1R、nPTB、Pola1、Cx43、Pax3、TGF-β、Pax7等對(duì)肌細(xì)胞增殖、分化、萎縮起到重要的調(diào)節(jié)作用。這些研究也同樣證明了miRNA調(diào)控骨骼肌纖維化作用機(jī)制的復(fù)雜性。

3.2 miRNA-206與miRNA-26a在骨骼肌萎縮及纖維化過程中的作用

本研究結(jié)果顯示，以假手術(shù)組做對(duì)照，卡壓手術(shù)組腓腸肌TGF-β、COL-I均明顯升高，TGF-β在卡壓后持續(xù)高表達(dá)，miRNA-206及miRNA-26a表達(dá)也是先降低后升高，4周時(shí)表達(dá)最低，后持續(xù)升高，提示在一定濃度范圍內(nèi)，miRNA-206及miRNA-26a的表達(dá)量在骨骼肌纖維化病變中起到重要作用。研究表明，TGF-β長期過度表達(dá)能明顯促進(jìn)纖維化的發(fā)生發(fā)展，結(jié)締組織生長因子（connectivetissuegrowth factor，CTGF）可介導(dǎo)TGF-β的促細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）聚集和組織纖維化效應(yīng)[6-7]。COL-I是組織分布最為廣泛的膠原蛋白，也是骨骼肌肌肉組織ECM的最主要組成部分，分析腓腸肌中COL-I的含量，能在一定程度上反映肌肉纖維化的情況。本研究通過對(duì)TGF-β、COL-I的檢測，可間接了解肌肉纖維化程度。已有研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β是miRNA-206和miRNA-26a的靶基因，在神經(jīng)、肌肉等器官纖維化的過程中，miRNA-206和miRNA-26a直接作用于其mRNA的3'UTR，沉默TGF-β基因的表達(dá)，減少ECM的合成，抑制器官纖維化，證明miRNA-206和miRNA-26a通過下調(diào)TGF-β的表達(dá)，緩解器官纖維化[8-11]。本實(shí)驗(yàn)顯示miRNA-206和miRNA-26a的表達(dá)在神經(jīng)卡壓損傷后迅速下調(diào)，但在損傷后的幾周內(nèi)又慢慢增加，可能是因?yàn)樵诠趋兰〉膿p傷與修復(fù)過程中，miRNA-206和miRNA-26a需要通過調(diào)節(jié)Smad-1和Smad-4來抑制TGF-β信號(hào)，而miRNA-206和miRNA-26a在肌肉內(nèi)水平降低可抑制TGF-β信號(hào)，進(jìn)一步促進(jìn)肌原性分化，是肌肉正常再生所必需的[12-13]。因此筆者推測，miRNA-206和miRNA-26a可通過TGF-β信號(hào)通路調(diào)節(jié)骨骼肌萎縮及纖維化過程，同時(shí)其在骨骼肌失神經(jīng)支配后肌纖維再生中也起到重要作用。

3.3 miRNA技術(shù)治療失神經(jīng)骨骼肌纖維化的展望

miRNA是細(xì)胞內(nèi)源性小RNA，目前，人們將miRNA組裝進(jìn)入RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物（RNA induced silencing complex，RISC）后，miRNA與靶基因配對(duì)而導(dǎo)致基因沉默，miRNA通過與目的mRNA結(jié)合，直接或間接調(diào)控著90%以上人類基因的表達(dá)[14-16]。已有研究表明，在敲除miRNA-206基因的小鼠模型中，骨骼肌運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元喪失、靶肌失神經(jīng)支配、肌肉萎縮和纖維化情況明顯加速，miRNA-206可部分通過組蛋白去乙?；?4和成纖維細(xì)胞生長因子信號(hào)通路介導(dǎo)這些作用，它可認(rèn)為是骨骼肌纖維化的一種良好的抑制劑[17]。目前，對(duì)周圍神經(jīng)卡壓最有效的治療手段為盡力早期解除卡壓，使神經(jīng)肌肉功能得以恢復(fù)。但由于周圍卡壓松解術(shù)后肌肉的萎縮及功能恢復(fù)還需要一段時(shí)間，由本研究也可以看到，在神經(jīng)卡壓4周后，miRNA-206和miRNA-26a持續(xù)高表達(dá)，而此過程骨骼肌的纖維化過程是持續(xù)進(jìn)行的，同時(shí)伴隨著肌纖維的再生與修復(fù)。筆者認(rèn)為，在神經(jīng)慢性卡壓過程中，給予外源性miRNA-206和miRNA-26a可一定程度抑制TGF-β生物學(xué)效應(yīng)，同時(shí)又可在肌纖維的修復(fù)與再生中起到一定正面作用，故即使不能及時(shí)行神經(jīng)松解術(shù)，但早期對(duì)給予外源性miRNA-206和miRNA-26a對(duì)肌肉纖維化進(jìn)行干預(yù)，對(duì)骨骼肌來說也是有益的。當(dāng)然，這種作用有待進(jìn)一步的研究。

綜上所述，miRNA廣泛存在于骨骼肌組織中，在骨骼肌萎縮及纖維化病變中上調(diào)或下調(diào)參與肌細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等過程。研究miRNA在骨骼肌纖維化過程中的作用機(jī)制對(duì)預(yù)防骨骼肌萎縮及纖維化有重大意義。