康健峋，許雅茹，王宇翔，李曉偉，李金龍

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150003）

非洲豬瘟作為一種高度傳染性、病毒性、出血性疾病，有著病程較短、傳播速度快、死亡率高等特點，非洲豬瘟病毒：一種雙鏈DNA病毒，是非洲豬瘟arviridae科非洲豬瘟ivirus屬的唯一成員，該病毒主要在巨噬細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中復(fù)制。非洲豬瘟病毒在其儲存宿主中通常無癥狀，并發(fā)生持續(xù)性感染，然而，感染家豬會引起嚴(yán)重的充血出血、呼吸困難甚至造成豬只死亡。為了深入研究非洲豬瘟，全面了解非洲豬瘟的流行史、基因分型、診斷與防控等要點十分必要，文章就非洲豬瘟基因組特征及國內(nèi)外流行情況進(jìn)行簡要介紹，以期為后續(xù)非洲豬瘟相關(guān)研究提供資料支持。

1 流行情況

1921年首次在肯尼亞檢測到非洲豬瘟病毒，直到20世紀(jì)中葉才傳到歐洲，然后傳到南美洲。該疾病于20世紀(jì)90年代通過嚴(yán)格徹底的措施從歐洲除撒丁島外的地區(qū)被根除。

1957年，基因I型病毒在非洲以外的葡萄牙首次被發(fā)現(xiàn)后，在20世紀(jì)60到70年代先后傳入西班牙、法國、意大利、古巴、撒丁島、巴西等地。到了20世紀(jì)90年代，全球受影響地區(qū)完成了病毒凈化（不包含撒丁島）。2007年，該疾病再次蔓延，從非洲傳到高加索地區(qū)，并于2014年在歐盟東部流行。至今全球已有18個國家和地區(qū)相繼發(fā)生非洲豬瘟疫情。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為法定報告動物疫病。

2018年8 月，非洲豬瘟傳入我國，在遼寧沈陽出現(xiàn)后，很快在全國范圍內(nèi)暴發(fā)，導(dǎo)致全國范圍大量生豬死亡，給養(yǎng)豬行業(yè)帶來了巨大的損失。我國制定了《非洲豬瘟疫情應(yīng)急預(yù)案》應(yīng)對疫情的發(fā)生并將非洲豬瘟列為一類動物疫病。在2018年之前，我國乃至絕大多數(shù)亞洲國家未發(fā)現(xiàn)過非洲豬瘟，首起非洲豬瘟疫情經(jīng)鑒定為基因II型毒株，也是自2018年以來出現(xiàn)在我國的流行毒株。中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所國家非洲豬瘟專業(yè)實驗室于2018年首次分離鑒定了我國第1株非洲豬瘟病毒Pig/HLJ/2018（HLJ/18）。

2021年，非洲豬瘟疫情在國內(nèi)再次蔓延，山東、河北、河南、廣東、新疆等省份多地區(qū)出現(xiàn)疫情。僅2021年間，全國共發(fā)生10次非洲豬瘟疫情，撲殺生豬2 100頭，均為點狀發(fā)生，未發(fā)生區(qū)域性流行。在2021年6月，山東某豬場1頭重約80 kg的育肥豬出現(xiàn)麻痹癥狀，在河南省的另1個豬場，育肥豬出現(xiàn)了慢性感染癥狀，收集的死豬樣本經(jīng)中國國家非洲豬瘟輔助參考實驗室（CNASFVPL）檢測，確認(rèn)為非洲豬瘟陽性。進(jìn)一步對p72基因的分析表明，這些樣本中的病毒屬于基因I型毒株。

哈爾濱獸醫(yī)研究所在山東和河南地區(qū)分別分離到了基因I型非洲豬瘟病毒，2個毒株均為低毒力毒株。2株基因I型非洲豬瘟均無血吸附活性；與20世紀(jì)葡萄牙的基因I型低致死毒株NH/P68和OURT88/3高度相似；與歐洲及非洲早期的基因I型強毒株L60和Benin97存在較大差異。

在贊比亞，2001-2002年和2013-2015年間暴發(fā)了2次非洲豬瘟疫情。疫情主要影響位于鐵路線或利文斯通-盧薩卡高速公路沿線的地區(qū)。對該時期疫情的研究指出基因I型毒株是主要的流行毒株。Edgar等研究鑒定了5種基因型變體。其中2種在暴發(fā)疫情的相關(guān)非洲豬瘟病毒中檢測到，而其余的在蜱體內(nèi)檢測到。多個數(shù)據(jù)表明，野豬和軟蜱是非洲豬瘟病毒的天然宿主。

位于非洲中部的喀麥隆是非洲豬瘟暴發(fā)以來一直流行的國家之一。病毒于1982年進(jìn)入該國，80%的豬因感染非洲豬瘟死亡。所有分離毒株都屬于血清群I型并且只有基因I型毒株在喀麥隆流行。在1982年4月開始，非洲豬瘟僅用了2個月的時間就傳播到所有主要的生豬養(yǎng)殖區(qū)。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，非洲豬瘟病毒在非洲東部和東南部的軟蜱中被檢出，因此推測該病會在野生動物中永久存在，由于人類活動使得疫情加劇。此外，由于不全面的生物安全措施和農(nóng)場主的重視不足，極大地促進(jìn)了非洲豬瘟病毒在該國的傳播。

2 臨床特點

非洲豬瘟病毒是一種雙鏈DNA病毒，具有二十面體形態(tài)，平均病毒粒子直徑為200 nm，基因組大小約170~193 kb。其中基因I型毒株能夠引起豬的慢性感染發(fā)病，傳播能力較強，致死率相對較低。由于病程比較緩慢，隱蔽性強，出現(xiàn)病毒血癥不規(guī)律，導(dǎo)致其早期診斷較為困難。

早期文獻(xiàn)報道，基因I型在意大利分離毒株通過接種、攝入和接觸對野豬進(jìn)行的初步感染試驗發(fā)現(xiàn)。野豬表現(xiàn)出高度易感性，并因這種感染而死亡，表現(xiàn)出特征性的非洲豬瘟出血性病變。出現(xiàn)與家豬中觀察到的相同的典型非洲豬瘟出血性病變，例如偶然性的皮下點狀出血、腹壁內(nèi)壁彌漫性點狀出血、輕度心包積水伴血清性出血，心內(nèi)膜點狀出血，彌漫性肺充血伴有肺泡水腫，輕度腹水，充血性脾腫大，輕度肝充血和肝腫大，膽囊壁水腫，黏膜表面存在點狀出血，盲腸紅色纖維蛋白沉積和結(jié)腸的漿膜表面和直腸黏膜表面的出血。腎皮質(zhì)瘀點，髓質(zhì)和腎盂呈均勻出血。腸系膜淋巴結(jié)和支氣管淋巴結(jié)腫大，充血強烈，腹股溝則嚴(yán)重腫大，呈血塊狀。中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所的近期研究顯示，接種從山東和河南采集的樣本中所分離到的基因I型毒株后，被攻毒的豬出現(xiàn)不同程度的間歇熱、丘疹、局灶性皮膚壞死，關(guān)節(jié)病和跛行等臨床癥狀、病死豬病毒載量顯著高于安樂死豬，各組織中，肺臟、脾臟、骨髓、腎上腺和某些淋巴結(jié)中病毒DNA載量較高。相對于基因II型和基因缺失低毒力基因II型非洲豬瘟病毒，我國出現(xiàn)的基因I型非洲豬瘟病毒毒力較低、潛伏期更長并且具有高度的水平傳播能力，易引發(fā)亞急性和慢性感染。豬只和同居豬只非洲豬瘟病毒感染臨床特點見表1與表2。

表1 2018-2020年國內(nèi)部分地區(qū)PRRSV分離毒株分型占比情況

表2 非洲豬瘟病毒同居豬只感染臨床特點

3 遺傳演化分析

研究發(fā)現(xiàn)非洲豬瘟病毒表現(xiàn)出高度的遺傳和抗原多樣性。迄今為止，全球已鑒定出24種基因型和8種血清群。

俄羅斯國家獸醫(yī)病毒學(xué)和微生物學(xué)研究所（VNIIVViM）的研究人員基于非洲豬瘟病毒參考免疫抗血清的血液吸附抑制試驗（HAI）開發(fā)了非洲豬瘟病毒分離株的分類。VNIIVViM的長期研究結(jié)果已經(jīng)證實非洲豬瘟病毒的8個血清群（血清群1-8），但不排除其他血清型存在的可能。

目前對非洲豬瘟病毒毒株的基因分型，主要通過對p72基因進(jìn)行擴(kuò)增測序和后續(xù)的遺傳進(jìn)化樹分析，進(jìn)行毒株分類。Bastos和Boshoff等人在非洲發(fā)現(xiàn)的24種基因型中鑒定出7種p72基因型，這些基因型被劃分在3個譜系中。基因I型于1978年和1981年分離出來。此外，從克魯格國家公園（KNP）的蜱中也分離出了非洲豬瘟的基因I型毒株。

國家非洲豬瘟專業(yè)實驗室的科研人員分離出2株基因I型非洲豬瘟毒株SD/DY-I/21和HeN/ZZ-P1/21，2株毒株分別來自于山東和河南兩地豬場發(fā)病豬樣品。在全基因組序列比對中，SD/DY-I/21和HeN/ZZ-P1/21的比對結(jié)果整體相似，但部分序列存在明顯的突變差異，推測二者流行途徑可能不同。全基因組遺傳進(jìn)化分析表明，這兩株病毒與20世紀(jì)葡萄牙分離的基因I型低致死毒株NH/P68和OURT88/3高度相似，與歐洲及非洲早期分離的基因I型強毒株L60和Benin97存在較大差異。NH/P68首次發(fā)現(xiàn)于1968年，是從葡萄牙的家豬中分離出，OURT88/3首次發(fā)現(xiàn)于1988年葡萄牙豬場的軟蜱體內(nèi)。由于非洲豬瘟已經(jīng)在20世紀(jì)90年代從葡萄牙和西班牙被清除，NH/P68和OURT88/3毒株目前僅保存于國外少數(shù)幾個實驗室中用于基礎(chǔ)應(yīng)用研究，并嚴(yán)格限制實驗室的生物安全等級。因此與NH/P68和OURT88/3病毒具有高度同源性的國內(nèi)分離毒株通過何種途徑侵入我國，有待進(jìn)一步探索。

4 診斷要點

非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒引起的一種傳染性疾病，通過直接和間接接觸感染。病豬、帶毒豬和接觸過病毒的養(yǎng)殖人員均為傳染源，病豬和帶病豬的組織器官和排泄物等含有大量的病毒，病豬排毒后會污染動物舍、料庫、飼養(yǎng)人員生活區(qū)域等環(huán)境和工服工具等，環(huán)境中的病毒感染健康豬，引起疫病的流行。感染的病毒數(shù)量不同，毒株不同，感染途徑不同，也會出現(xiàn)不同的臨床癥狀。急性疾病表現(xiàn)為高燒、精神沉郁、出血和15 d內(nèi)死亡，死亡率接近100%。亞急性和慢性發(fā)病通常由毒力較低的毒株引起，病程較長，死亡率較低。慢性發(fā)病主要表現(xiàn)為間歇性發(fā)熱、體重減輕、慢性皮膚潰瘍和關(guān)節(jié)炎等。發(fā)病后第3天起病豬出現(xiàn)間歇性發(fā)熱，第11天到第13天病豬耳部、頸部等區(qū)域皮膚出現(xiàn)丘疹并逐漸發(fā)展至后腹部甚至全身，第13天到第14天病豬出現(xiàn)關(guān)節(jié)炎甚至跛行。相對于非洲豬瘟基因II型病毒感染，非洲豬瘟病毒基因I型感染多表現(xiàn)為慢性發(fā)病，早期診斷更為困難。

通過一般臨床檢查作出初步的診斷后，需進(jìn)行實驗室診斷，主要有非洲豬瘟病毒的核酸檢測和豬血清中非洲豬瘟抗體水平的檢測。目前常用的實驗室診斷方法包括病毒分離接種、紅細(xì)胞吸附實驗、熒光抗體檢測、ELISA、PCR、RT-PCR等。ELISA是利用抗原抗體特異性結(jié)合反應(yīng)的定性定量檢測，它被廣泛應(yīng)用到疫病診斷領(lǐng)域。通過病料的采集，提取DNA后，可以進(jìn)行PCR和RT-PCR試驗，能夠快速做出診斷。

5 防控策略

我們可以從其他有過非洲豬瘟歷史的國家吸取多方面經(jīng)驗。非洲豬瘟于1967年在西班牙被發(fā)現(xiàn)，直到1985年歐盟提供足夠的財政支持，該病才得到很好的控制。主要解決方法是建立了一個流動獸醫(yī)團(tuán)隊和一個用于非洲豬瘟監(jiān)測和暴發(fā)識別的實驗室，嚴(yán)格控制動物流動，禁止非法豬肉運輸，為染病豬提供補償。

我國分離出的基因I型毒株潛伏期長，感染初期無明顯的典型臨床癥狀，致死率相對較低，部分癥狀與其他豬傳染性疾病相似，容易誤診，而病豬感染后隱性帶毒并間歇性排毒，相對于基因II型病毒而言，更不易被發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致采樣檢測更難及時發(fā)現(xiàn)，防控難度更大。

因此，為了提高疫病防控能力，提出以下防控策略：

5.1 加強監(jiān)測措施

發(fā)生疑似非洲豬瘟疫情時，應(yīng)按照相應(yīng)規(guī)定，進(jìn)行緊急流行病學(xué)調(diào)查，分析感染來源并評估擴(kuò)散風(fēng)險。同時調(diào)查記錄疑似感染豬種類、數(shù)量、存欄量，病死豬發(fā)病時的異常表現(xiàn)、發(fā)病過程，補欄、人工授精、調(diào)入調(diào)出等信息。查看發(fā)病豬場規(guī)范免疫情況，發(fā)病豬舍布局等基礎(chǔ)設(shè)施建設(shè)情況等，將發(fā)病豬的臨床癥狀與非洲豬瘟臨床癥狀相比較，觀察是否符合判定標(biāo)準(zhǔn)。因非洲豬瘟病毒基因I型潛伏期較長、初期臨床癥狀不明顯，需每日監(jiān)測豬群體溫變化和臨床表現(xiàn)，對飼養(yǎng)環(huán)境和豬只定期進(jìn)行抽樣檢測。有相應(yīng)條件的養(yǎng)殖場可以安裝設(shè)置智能化監(jiān)測系統(tǒng)，每日進(jìn)行體溫監(jiān)測。出現(xiàn)散狀發(fā)病，臨床表現(xiàn)異常等情況立即進(jìn)行采樣檢測，避免產(chǎn)生其他豬傳染性疾病的誤診，對確診病豬及時撲殺。

5.2 加強生物安全防控

加強人員流動管理，遵循人員單向流動原則，防止對生物安全級別更高區(qū)域的污染，相關(guān)人員進(jìn)入工作區(qū)域和生活區(qū)域時，更換消毒過的衣物，進(jìn)行有效淋浴和消毒，并按規(guī)定路線進(jìn)入各自區(qū)域。

嚴(yán)格控制生豬從一個區(qū)域到另一個區(qū)域的運輸，做好運輸過程中的防控，生豬運輸前后對貨車進(jìn)行清潔消毒，建立符合生物安全法規(guī)的實時監(jiān)控、可追溯的豬/豬肉運輸系統(tǒng)。增設(shè)檢驗檢疫消毒程序，控制運輸車輛的流動，運輸過后對車輛經(jīng)過道路進(jìn)行消毒。

加強對飼料、疫苗、獸藥、食材和生活物資等入場物資的管理，對進(jìn)口豬只、豬肉產(chǎn)品進(jìn)行全方位的隔離檢疫，根據(jù)動物衛(wèi)生法典，針對家豬、野豬、豬胚胎等進(jìn)行管控，防止非洲豬瘟病毒傳入。按照國家防疫要求做好運輸交匯地區(qū)的專業(yè)檢疫工作，殺滅病原。

5.3 加強對養(yǎng)豬部門相關(guān)人員的宣傳和培訓(xùn)

在我國規(guī)?；B(yǎng)殖場分布較為廣泛難以進(jìn)行集中管理的條件下，相關(guān)部門積極采取措施的同時建立聯(lián)動機制，調(diào)動各方力量加強相關(guān)知識的科普和宣傳力度，通過不同媒介科學(xué)引導(dǎo)養(yǎng)殖相關(guān)人員了解重視非洲豬瘟病毒基因I型，積極配合相關(guān)防控工作，認(rèn)識并及早發(fā)現(xiàn)疫情，一旦發(fā)現(xiàn)豬只皮膚發(fā)紅、體溫異常、關(guān)節(jié)腫脹、育肥豬死亡率升高和妊娠母豬流產(chǎn)等臨床表現(xiàn)時，及時報告并采樣檢測，有效控制疫情，減少損失。

5.4 其他防控

建立全面的監(jiān)測和篩查計劃以及早期檢測、報告、預(yù)警和響應(yīng)系統(tǒng)，實施合理的補償政策，養(yǎng)豬場應(yīng)按規(guī)定向當(dāng)?shù)孬F醫(yī)主管部門動物疫病預(yù)防控制機構(gòu)報告可疑病例。因為針對基因I型非洲豬瘟目前尚無產(chǎn)業(yè)化的藥物和疫苗，所以在疫情的防控中早期診斷和感染豬群撲殺尤為重要。

6 總結(jié)

隨著非洲豬瘟病毒基因I型在我國被發(fā)現(xiàn)，我國非洲豬瘟的防控迎來了更大的挑戰(zhàn)，相對于低毒力、容易慢性感染及潛伏期更長的基因I型非洲豬瘟病毒，我們應(yīng)更加重視，做好充足的準(zhǔn)備，將其控制在萌芽階段，為國內(nèi)根除非洲豬瘟病毒打下堅實基礎(chǔ)。