張玉文，王丹，梁運霞，李曉旭

商丘市第一人民醫(yī)院1病理科，2乳腺外科，河南 商丘 476000

乳腺癌是臨床中常見的惡性腫瘤，嚴重威脅女性的生命健康，其病因及發(fā)病機制尚不清楚，早期診斷并采取綜合治療是改善患者預(yù)后最有效的方式[1-2]。臨床中常采用超聲引導(dǎo)下穿刺活檢對乳腺癌進行診斷，雖然可以有效提高乳腺癌的檢出率，但乳腺良性病變與惡性病變在超聲影像學(xué)特征上可能存在一定的重疊，此外由于部分病變組織形態(tài)多樣，組織結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜，也在一定程度上增加了診斷的難度，因此漏診率和誤診率仍較高，亟需尋找一種更加準確有效的方法對乳腺癌進行早期診斷。鋅指蛋白（zinc finger protein，ZFP）是一類具有手指狀結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子[3-4]，鋅指蛋白44（zinc finger protein 44，ZFP44）是其中一員，可通過與靶分子DNA、RNA等序列或其他ZFP蛋白結(jié)合，在轉(zhuǎn)錄、翻譯水平上調(diào)控基因表達。雄激素受體（androgen receptor，AR）是核受體家族中的一員，廣泛分布于人體的器官和組織中，具有介導(dǎo)雄激素信號通路的作用。相關(guān)研究報道，AR與其配體雄激素結(jié)合后，其構(gòu)象發(fā)生變化，可導(dǎo)致熱休克蛋白解離，然后被轉(zhuǎn)移到細胞核中，進而促進靶基因的轉(zhuǎn)錄[5-6]。目前ZFP44和AR對乳腺癌的診斷價值尚不明確。本研究探討了ZFP44和AR對乳腺癌的診斷價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年7月至2021年6月商丘市第一人民醫(yī)院收治的乳腺癌患者。納入標(biāo)準：①經(jīng)術(shù)后組織病理學(xué)檢查確診為乳腺癌；②女性；③初次手術(shù)，術(shù)前未接受放療、新輔助化療等治療；④臨床資料完整。排除標(biāo)準：①合并其他惡性腫瘤；②妊娠期或哺乳期；③合并心、肝、腎等重要臟器功能障礙；④合并免疫缺陷病、傳染性疾病、血液系統(tǒng)疾病、全身系統(tǒng)性疾?。虎莺喜⒄J知功能障礙或精神疾病。依據(jù)納入和排除標(biāo)準，本研究共納入92例乳腺癌患者，作為觀察組。另選取同期收治的60例乳腺良性病變患者作為對照組。觀察組患者的年齡為25～72歲，平均（43.86±9.27）歲；病理類型：浸潤性導(dǎo)管癌65例，浸潤性小葉癌18例，導(dǎo)管原位癌9例。對照組患者的年齡為28～79歲，平均（45.17±9.27）歲；病理類型：乳腺纖維瘤31例，漿細胞性乳腺炎4例，乳腺導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀瘤17例，乳腺增生8例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批通過，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 免疫組化染色檢測ZFP44、AR的表達情況及結(jié)果判斷

收集兩組患者的乳腺組織，制作標(biāo)本，石蠟包埋后進行切片，常規(guī)脫蠟，水化，采用3%H2O2室溫孵育8 min，消除內(nèi)源性過氧化物酶；磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）洗滌3次，每次5 min，10%羊血清封閉25 min，傾倒液體；加入一抗，4℃孵育過夜；PBS洗滌3次，每次5 min；加入二抗，37℃孵育35 min；PBS洗滌3次，每次5 min；滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素，37℃孵育35 min；PBS洗滌3次，每次5 min；滴加二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色液，顯色10 min，蘇木素復(fù)染，水洗；脫水，中性樹膠封片。染色結(jié)果判斷[7]：ZFP44位于細胞核，陽性表達呈深棕黃色，每個樣本在高倍鏡下計數(shù)500個細胞，依據(jù)陽性細胞占比進行判斷，陽性細胞占比＜10%為陰性（-），陽性細胞占比10%～29%為弱陽性（+），陽性細胞占比30%～59%為中等陽性（++），陽性細胞占比≥60%為強陽性（+++）；弱陽性（+）、中等陽性（++）及強陽性（+++）均記為ZFP44陽性表達。AR陽性：細胞核呈棕褐色或棕黃色。

1.3 ZFP44和AR對乳腺癌的診斷分析

ZFP44和AR免疫組化染色圖片均由兩名高年資腫瘤病理學(xué)專家采用雙盲法進行判斷，意見不同時，增加第3個高年資閱片人，通過討論達成一致意見。ZFP44表達陰性診斷為乳腺癌，AR表達陽性診斷為乳腺癌。以病理診斷結(jié)果為金標(biāo)準，計算ZFP44和AR診斷乳腺癌的靈敏度、特異度和準確度。靈敏度=真陽性例數(shù)（/真陽性+假陰性）例數(shù)×100%，特異度=真陰性例數(shù)（/真陰性+假陽性）例數(shù)×100%，準確度=（真陽性+真陰性）例數(shù)/總例數(shù)×100%

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 20.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ZFP44和AR表達情況的比較

觀察組患者的ZFP44陰性表達率和AR陽性表達率均明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。（表1、圖1）

表1 兩組患者ZFP44和AR表達情況的比較[ n（%）]

圖1 乳腺癌組織和乳腺良性病變組織中ZFP44和AR的表達情況（免疫組化染色，×200）

2.2 不同臨床特征乳腺癌患者ZFP44和AR表達情況的比較

不同年齡、病理類型、分化程度、神經(jīng)侵犯情況乳腺癌患者的ZFP44陰性表達率和AR陽性表達率比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。不同脈管侵犯情況乳腺癌患者的AR陽性表達率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、有脈管侵犯、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌患者的ZFP44陰性表達率分別高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、無脈管侵犯、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=5.088、6.862、5.013，P＜0.05）；TNM 分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌患者的AR陽性表達率分別高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=5.919、5.192，P＜0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征乳腺癌患者的ZFP44和AR表達情況（ n=92）

2.3 ZFP44和AR對乳腺癌的診斷價值

ZFP44診斷乳腺癌的靈敏度、特異度、準確度分別為 88.04%（81/92）、75.00%（45/60）、82.89%（126/152），AR診斷乳腺癌的靈敏度、特異度、準確度分別為 78.26%（72/92）、81.67%（49/60）、79.61%（121/152）。（表3）

表3 ZFP44和AR對乳腺癌的診斷結(jié)果與病理診斷結(jié)果的對照

3 討論

近年來乳腺癌的發(fā)病率逐年升高，已居女性惡性腫瘤發(fā)病率的首位。乳腺癌的早期診斷和治療有利于提高患者生存率及生活質(zhì)量[8]。目前臨床中多采用乳房超聲等影像學(xué)檢查對乳腺癌進行診斷，雖然可在一定程度上提高乳腺癌的檢出率，但檢出率仍有待提高[9-10]。研究表明，ZFP44和AR與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[11-14]。目前罕見關(guān)于ZFP44和AR對乳腺癌診斷價值的報道，探討ZFP44和AR對乳腺癌的診斷價值具有重要的臨床意義。

本研究結(jié)果顯示，觀察組患者的ZFP44陰性表達率和AR陽性表達率均明顯高于對照組（P＜0.01），提示與乳腺良性病變患者相比，乳腺癌患者的ZFP44陰性表達率和AR陽性表達率均較高。ZFP44分布廣泛，其家族蛋白參與人類細胞分化、胚胎發(fā)育等，其表達、染色體移位、基因突變與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)[15]。AR是一種固醇類激素受體，其在乳腺癌中的作用較為復(fù)雜，在無配體時，可與熱休克蛋白共存于細胞核中，雄激素通過細胞膜擴散后，可與AR結(jié)合，引發(fā)構(gòu)象改變，導(dǎo)致熱休克蛋白解離、激活，形成二聚體，二聚體移位至細胞核，與靶基因的雄激素反應(yīng)原件結(jié)合，引發(fā)DNA轉(zhuǎn)錄，進而調(diào)節(jié)腫瘤細胞的分化、增殖、凋亡及血管生成。研究報道，AR在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用[16-18]。本研究結(jié)果顯示，TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、有脈管侵犯、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌患者的ZFP44陰性表達率分別高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、無脈管侵犯、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌患者的AR陽性表達率分別高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。提示ZFP44和AR表達與乳腺癌患者的臨床特征具有一定的關(guān)系。本研究結(jié)果還顯示，ZFP44診斷乳腺癌的靈敏度、特異度、準確度分別為88.04%、75.00%、82.89%，AR診斷乳腺癌的靈敏度、特異度、準確度分別為78.26%、81.67%、79.61%，提示ZFP44和AR對乳腺癌的診斷價值均較高，可作為臨床診斷乳腺癌的重要參考指標(biāo)。ZFP是人類基因組中最大的轉(zhuǎn)錄因子家族，其中鋅指基序的不同組合可使鋅指轉(zhuǎn)錄因子在機體中發(fā)揮不同的功能，參與腫瘤細胞的增殖、分化等，其表達與惡性腫瘤的發(fā)展及預(yù)后緊密相關(guān)。李墨等[19]研究表明，ZFP44在乳腺癌中可能作為一種抑癌基因，參與調(diào)控雌激素信號通路，可通過下調(diào)蛋白激酶B（protein kinase B，PKB，又稱AKT）/糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase 3β，GSK3β）信號通路，抑制腫瘤細胞的生長、侵襲，進而發(fā)揮抑癌基因的作用。AR是一種反式轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白，具有配體依賴性，研究表明，AR可通過刺激腫瘤細胞增殖，發(fā)揮致癌作用；AR陽性的乳腺癌多攜帶磷脂酰肌醇-4，5二磷酸3-激酶催化亞基α（phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha，PIK3CA）突變基因，其與腫瘤細胞的異常增殖密切相關(guān)，且磷脂酰肌醇-3-羥激酶（phosphatidylinositol 3-hydroxy kinase，PI3K）/AKT通路中的AKT磷酸化后可誘導(dǎo)AR發(fā)生磷酸化，使AR誘導(dǎo)的細胞凋亡作用減弱或消失，導(dǎo)致腫瘤惡變；雄激素通過向雌二醇轉(zhuǎn)化或與AR結(jié)合也可在一定程度上影響乳腺癌的發(fā)展[20]。

綜上所述，與乳腺良性病變患者相比，乳腺癌患者的ZFP44陰性表達率和AR陽性表達率均較高，且ZFP44和AR對乳腺癌的診斷價值均較高，可作為臨床診斷乳腺癌的重要參考指標(biāo)。