吉桂芳 馬明梅 張靜雅 蓋祥云

(1.青海大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科，青海 西寧 810000；2.青海民族大學(xué)藥學(xué)院，青海 西寧，810007；3.青海大學(xué)附屬醫(yī)院靜脈配置中心，青海 西寧810000)

糖尿病周圍神經(jīng)病變(Diabetic peripheral neuropathy，DPN)是糖尿病最常見(jiàn)的慢性并發(fā)癥之一，常見(jiàn)的形式為糖尿病感覺(jué)運(yùn)動(dòng)多發(fā)性神經(jīng)病和影響外周神經(jīng)系統(tǒng)的感覺(jué)、運(yùn)動(dòng)和自主神經(jīng)功能[1]。DPN的全球患病率為16%～66%[2]。目前，DPN的有效治療方法較少，藥物的治療效果受到許多因素，如嚴(yán)重的不良反應(yīng)等。因此，還需繼續(xù)探索新的治療策略來(lái)治療DPN[3]。法舒地爾是目前唯一獲得臨床批準(zhǔn)的Rho關(guān)聯(lián)卷曲螺旋蛋白激酶抑制劑，由于其強(qiáng)大的血管舒張功能，法舒地爾已被廣泛應(yīng)用于血管痙攣性疾病，如蛛網(wǎng)膜下腔出血和缺血性心臟病[4]。目前已有研究[5]表明，法舒地爾可改善高血糖誘導(dǎo)的糖尿病小鼠心肌纖維化，抑制炎癥反應(yīng)。目前，關(guān)于法舒地爾對(duì)DPN的作用尚不明確。有研究[6]表明，核因子紅系相關(guān)因子2(Nuclear factor erythroid 2-related factor 2，Nrf2)通過(guò)調(diào)節(jié)抗氧化反應(yīng)元件(Antioxidant response element，ARE)能夠刺激內(nèi)源性抗氧化防御和解毒酶的產(chǎn)生從而調(diào)節(jié)神經(jīng)性病變。核因子-κB(Nuclear factor-κB，NF-κB)是一種轉(zhuǎn)錄因子，能促進(jìn)炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生，從而參與DPN中炎癥反應(yīng)的激活[7]。因此，本研究旨在探究法舒地爾對(duì)DPN及Nrf2/ARE和NF-κB通路的影響，以期為明確舒地爾對(duì)DPN的作用機(jī)制及開(kāi)發(fā)新的DPN治療策略提供新的科學(xué)資料。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 法舒地爾購(gòu)自天津紅日藥業(yè)股份有限公司，普瑞巴林購(gòu)自重慶賽維藥業(yè)有限公司，鏈脲佐菌素(STZ)購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，丙二醛(MDA)測(cè)定試劑盒(TBA法)、還原型谷胱甘肽(GSH)測(cè)定試劑盒(分光光度法)和總超氧化物歧化酶(SOD)測(cè)定試劑盒(WST-1 法)購(gòu)自南京建成生物工程研究所，IL-1β、IL-6和TNF-αELISA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)Biovision，BCA試劑盒購(gòu)自南京凱基生物科技有限公司，Nrf2抗體和HO-1抗體購(gòu)自艾博抗(上海)貿(mào)易有限公司，p-p65抗體和p65抗體購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology，GAPDH抗體購(gòu)自北京義翹神州科技股份有限公司。

1.2 動(dòng)物飼養(yǎng) 雄性清潔級(jí)SD大鼠60只，體質(zhì)量220～250 g，在20～25℃、明暗交替(12 h/12 h)條件下飼養(yǎng)。所有大鼠自由飲水和進(jìn)食。待大鼠適應(yīng)環(huán)境1周后，進(jìn)行分組造模及給藥處理。本研究符合動(dòng)物倫理要求，并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.3 模型的建立及給藥處理 將60只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、法舒地爾低劑量組、法舒地爾高劑量組，每組各12只。依照參考文獻(xiàn)[8]建立DPN大鼠模型。模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、法舒地爾低劑量組、法舒地爾高劑量組大鼠用高脂飼料喂養(yǎng)6周，對(duì)照組大鼠用標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)6周。6周后，除對(duì)照組外，其余組大鼠腹腔注射STZ(35 mg/kg)，對(duì)照組大鼠注射等量溶劑。72 h后，大鼠禁食禁水12 h，采集大鼠尾靜脈血，血糖儀檢測(cè)各組大鼠空腹血糖值，血糖值>16.7 mmol/L者即為糖尿病模型造模成功。對(duì)照組大鼠用標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，其余組大鼠用高脂飼料喂養(yǎng)。陽(yáng)性對(duì)照組大鼠灌胃普瑞巴林(30 mg/kg)[9]；法舒地爾低劑量組和法舒地爾高劑量組分別灌胃法舒地爾(15 mg/kg和30 mg/kg)[10]，每天給藥1次，對(duì)照組和模型組灌胃生理鹽水，連續(xù)給藥8周后，進(jìn)行大鼠行為學(xué)測(cè)試。

1.4 血糖檢測(cè) 給藥結(jié)束后，各組大鼠禁食不禁水12 h，測(cè)量各組大鼠體重。隨后用血糖儀檢測(cè)各組大鼠空腹血糖值。

1.5 熱板實(shí)驗(yàn) 參考文獻(xiàn)[11]，采用Eddy熱板法檢測(cè)各組大鼠熱傷害性閾值。給藥結(jié)束后，將各組大鼠置于熱板儀內(nèi)，熱板儀溫度(55±0.5)℃，記錄第一次反應(yīng)(閃爍、舔后爪或跳躍)所需的時(shí)間，即為熱縮腿潛伏期(Thermal withdrawal latency，TWL)。截?cái)鄷r(shí)間設(shè)為15 s，以避免組織損傷。

1.6 Von Frey實(shí)驗(yàn) 參考文獻(xiàn)[12]，采用Von Frey法檢測(cè)各組大鼠機(jī)械性超敏反應(yīng)，確定其對(duì)傷害性刺激的痛閾。給藥結(jié)束后，將各組大鼠轉(zhuǎn)移到高架鐵絲網(wǎng)籠子中，待大鼠適應(yīng)環(huán)境20 min后，用 Von Frey壓力施加器對(duì)后肢足底中部施加持續(xù)增加的壓力刺激。用數(shù)字式壓力計(jì)記錄動(dòng)物出現(xiàn)反應(yīng)(縮爪或輕快抬起)的最大壓力，即為壓力-縮腿閾(Paw-Withdrawal Threshold，PWT)。

1.7 Randall Selitto實(shí)驗(yàn) 參考文獻(xiàn)[13]，采用Randall-Selitto法測(cè)定機(jī)械性痛覺(jué)超敏(Mechanical allodynia，MWT)，確定機(jī)械性傷害閾值。給藥結(jié)束后，將各組大鼠固定后，用Randall-Selitto痛覺(jué)測(cè)試儀對(duì)后肢表面施加持續(xù)增加的壓力刺激，用數(shù)字壓力計(jì)記錄動(dòng)物表現(xiàn)出反應(yīng)(爪子縮回、吱吱叫或掙扎)的最大壓力，即為MWT。

1.8 神經(jīng)傳導(dǎo)速度(Nerve conduction velocity，NCV)檢測(cè) 給藥結(jié)束后，3%戊巴比妥鈉(50 mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠，仰臥位固定，隨后暴露右側(cè)坐骨神經(jīng)。參考文獻(xiàn)[14]，采用雙極針電極(24G)對(duì)坐骨神經(jīng)進(jìn)行單次刺激(5V)。使用數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)記錄M波和H波反射。人工記錄兩個(gè)刺激點(diǎn)之間的距離。運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度(Motor nerve conduction velocity，MNCV)(m/s)=距離/M波潛伏期，感覺(jué)神經(jīng)傳導(dǎo)速度(Sensory nerve conduction velocity，SNCV)=距離/H波潛伏期。

1.9 HE染色檢測(cè)坐骨神經(jīng)病理學(xué)變化 末次給藥結(jié)束后，3%戊巴比妥鈉(50 mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈采血。取出坐骨神經(jīng)，4%多聚甲醛固定，梯度酒精脫水，二甲苯透明。組織塊石蠟包埋，切片機(jī)切片。最后將切片置于溫箱中烘干。石蠟切片二甲苯、梯度酒精脫蠟至水，蒸餾水沖洗切片后，蘇木素染色液染色15 min，切片流水沖洗1 min，1%鹽酸乙醇分化3 s后，氨水返藍(lán)，伊紅染色液染色10 s后，流水沖洗。切片梯度酒精脫水、二甲苯脫水透明，中性樹(shù)膠封固，顯微鏡下觀察。

1.10 甲苯胺藍(lán)染色檢測(cè)坐骨神經(jīng)軸突數(shù)量 取新鮮坐骨神經(jīng)，10%甲醛液固定組織，常規(guī)脫水包埋。對(duì)包埋的組織塊進(jìn)行修塊后，切片機(jī)切片。石蠟切片常規(guī)脫蠟至水。加入甲苯胺藍(lán)染色液，將切片置于60℃溫箱中孵育40 min。蒸餾水清洗切片后，1%鹽酸乙醇分化3 s，切片梯度酒精脫水、二甲苯脫水透明，中性樹(shù)膠封固，顯微鏡下觀察。

1.11 MDA、GSH和SOD含量測(cè)定 取坐骨神經(jīng)，加入預(yù)冷提取液，制備組織勻漿。組織勻漿離心取上清液，根據(jù)MDA、GSH和SOD檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)所示，檢測(cè)上清液中MDA、GSH和SOD的含量。

1.12 IL-1β、IL-6和TNF-α含量測(cè)定 給藥結(jié)束后，腹主動(dòng)脈采血，分離血清后，根據(jù)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)所示，測(cè)定血清中IL-1β、IL-6和TNF-α含量。

1.13 Western blot檢測(cè)Nrf2、HO-1、p-p65和p65蛋白水平 取坐骨神經(jīng)，加入液氮研磨，隨后加入含1 mmol/L苯甲基磺酰氟的RIPA裂解緩沖液，充分混勻后，冰上反應(yīng)30 min。離心收集上清液，BCA試劑盒檢測(cè)上清液蛋白濃度。根據(jù)所測(cè)濃度，取30 μg蛋白加入凝膠上樣孔內(nèi)，進(jìn)行SDS-PAGE電泳和轉(zhuǎn)膜操作。5%脫脂奶粉室溫封閉3 h。隨后加入Nrf2抗體(1:1000)、HO-1抗體(1:1000)、p-p65抗體(1:2000)、p65抗體(1:1000)和GAPDH抗體(1:5000)，于4℃條件下孵育過(guò)夜。加入特異性二抗(1:5000)，室溫條件下孵育1 h后，凝膠成像系統(tǒng)檢測(cè)蛋白條帶。Image J軟件分析各蛋白條帶的灰度值。

2 結(jié)果

2.1 法舒地爾對(duì)DPN大鼠體質(zhì)量和血糖水平的影響 與對(duì)照組相比，模型組大鼠體質(zhì)量顯著降低(P<0.05)，血糖顯著升高(P<0.05)；陽(yáng)性對(duì)照組、法舒地爾低劑量組和法舒地爾高劑量組大鼠體重和血糖水平與模型組相比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)；法舒地爾高劑量組大鼠體重和血糖水平與法舒地爾低劑量組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠體質(zhì)量和血糖水平比較Table 1 Comparison of body weight and blood glucose level of rats in each group

2.2 法舒地爾對(duì)DPN大鼠行為學(xué)的影響 與對(duì)照組相比，模型組大鼠TWL、MWT和PWT顯著降低(P<0.05)；與模型組相比，陽(yáng)性對(duì)照組、法舒地爾低劑量組、法舒地爾高劑量組大鼠TWL、MWT和PWT顯著升高(P<0.05)；與法舒地爾低劑量組相比，法舒地爾高劑量組大鼠TWL、MWT和PWT顯著升高(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠行為參數(shù)的比較Table 2 Comparison of behavioral parameters of rats in each group

2.3 法舒地爾對(duì)DPN大鼠MNCV和SNCV的影響 與對(duì)照組相比，模型組大鼠MNCV和SNCV顯著降低(P<0.05)；與模型組相比，陽(yáng)性對(duì)照組、法舒地爾低劑量組、法舒地爾高劑量組大鼠MNCV和SNCV顯著升高(P<0.05)；與法舒地爾低劑量組相比，法舒地爾高劑量組大鼠MNCV和SNCV顯著升高(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠MNCV和SNCV的比較Table 3 Comparison of MNCV and SNCV of rats in each group

2.4 法舒地爾對(duì)DPN大鼠坐骨神經(jīng)病理學(xué)變化和軸突密度的影響 對(duì)照組大鼠坐骨神經(jīng)纖維分布均勻，排列緊密整齊，形態(tài)正常。神經(jīng)髓鞘細(xì)胞染色均勻，結(jié)構(gòu)完整清晰，形態(tài)正常，與對(duì)照組相比，模型組大鼠坐骨神經(jīng)表現(xiàn)出明顯神經(jīng)病變，并伴有明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，神經(jīng)纖維數(shù)量減少且纖維分布稀疏，神經(jīng)髓鞘細(xì)胞變性、腫脹，部分神經(jīng)髓鞘溶解脫失，染色不均，軸突數(shù)量顯著降低(P<0.05)；與模型組相比，陽(yáng)性對(duì)照組、法舒地爾低劑量組、法舒地爾高劑量組大鼠坐骨神經(jīng)病理學(xué)變化均有不同程度的改善，神經(jīng)纖維排列趨于規(guī)則，神經(jīng)髓鞘細(xì)胞病變減輕，各組大鼠軸突數(shù)量均顯著升高(P<0.05)，其中陽(yáng)性對(duì)照組和法舒地爾高劑量組改善效果最為明顯；與法舒地爾低劑量組相比，法舒地爾高劑量組大鼠坐骨神經(jīng)病理學(xué)變化得到進(jìn)一步改善，軸突數(shù)量顯著升高(P<0.05)。見(jiàn)圖1、2和表4。

表4 各組大鼠軸突數(shù)量的比較Table 4 Comparison of the number of axons in each group of rats

圖1 HE染色檢測(cè)坐骨神經(jīng)病理學(xué)變化(400×)Figure 1 HE staining was used to detect the pathological changes of sciatic nerve注：A.對(duì)照組；B.模型組；C.陽(yáng)性對(duì)照組；D.法舒地爾低劑量組；E.法舒地爾高劑量組

圖2 甲苯胺藍(lán)染色檢測(cè)坐骨神經(jīng)軸突數(shù)量(400×)Figure 2 Toluidine blue staining was used to detect the number of sciatic nerve axons 注：A.對(duì)照組；B.模型組；C.陽(yáng)性對(duì)照組；D.法舒地爾低劑量組；E.法舒地爾高劑量組

2.5 法舒地爾對(duì)DPN大鼠坐骨神經(jīng)氧化應(yīng)激的影響 與對(duì)照組相比，模型組大鼠坐骨神經(jīng)組織中MDA顯著升高(P<0.05)，GSH和SOD含量顯著降低(P<0.05)；與模型組相比，陽(yáng)性對(duì)照組、法舒地爾低劑量組、法舒地爾高劑量組大鼠坐骨神經(jīng)組織中MDA顯著降低(P<0.05)，GSH和SOD含量顯著升高(P<0.05)；與法舒地爾低劑量組相比，法舒地爾高劑量組大鼠坐骨神經(jīng)組織中MDA顯著降低(P<0.05)，GSH和SOD含量顯著升高(P<0.05)。見(jiàn)表5。

表5 各組大鼠坐骨神經(jīng)氧化應(yīng)激反應(yīng)的比較Table 5 Comparison of oxidative stress response of sciatic nerve of rats in each group

2.6 法舒地爾對(duì)DPN大鼠坐骨神經(jīng)炎癥反應(yīng)的影響 與對(duì)照組相比，模型組大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α含量顯著升高(P<0.05)；與模型組相比，陽(yáng)性對(duì)照組、法舒地爾低劑量組、法舒地爾高劑量組大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α含量顯著降低；與法舒地爾低劑量組相比，法舒地爾高劑量組大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α含量顯著降低(P<0.05)。見(jiàn)表6。

表6 各組大鼠炎癥反應(yīng)的比較Table 6 Comparison of inflammatory response in each group of rats

2.7 法舒地爾對(duì)DPN大鼠坐骨神經(jīng)Nrf2/ARE和NF-κB途徑的影響 與對(duì)照組相比，模型組大鼠坐骨神經(jīng)中Nrf2和HO-1蛋白水平顯著降低(P<0.05)，p-p65/p65蛋白水平顯著升高(P<0.05)；與模型組相比，陽(yáng)性對(duì)照組、法舒地爾低劑量組、法舒地爾高劑量組大鼠坐骨神經(jīng)中Nrf2和HO-1蛋白水平顯著升高(P<0.05)，p-p65/p65蛋白水平顯著降低(P<0.05)；與法舒地爾低劑量組相比，法舒地爾高劑量組大鼠坐骨神經(jīng)中Nrf2和HO-1蛋白水平顯著升高(P<0.05)，p-p65/p65蛋白水平顯著降低(P<0.05)。見(jiàn)圖3、4和表7。

圖3 Western blot檢測(cè)大鼠坐骨神經(jīng)中Nrf2和HO-1蛋白表達(dá)Figure 3 Western blot was used to detect the expression of Nrf2 and HO-1 protein in rat sciatic nerve

圖4 Western blot檢測(cè)大鼠坐骨神經(jīng)中p-p65/p65蛋白表達(dá)Figure 4 Western blot was used to detect the expression of p-p65/p65 protein in rat sciatic nerve

表7 各組大鼠Nrf2、HO-1、p-p65和p65蛋白水平比較Table 7 Comparison of Nrf2，HO-1，p-p65 and p65 protein expression in each group of rats

3 討論

與糖尿病視網(wǎng)膜病變、糖尿病心肌病變等糖尿病并發(fā)癥相比，DPN具有起病早、發(fā)病率高的特點(diǎn)。DPN的典型病理表現(xiàn)為包括有髓神經(jīng)纖維再生和脫髓鞘、軸突脫位、神經(jīng)元變性和再生延遲[15]。有研究[16]表明，DPN的發(fā)生與多種機(jī)制有關(guān)，包括物質(zhì)代謝紊亂、炎癥信號(hào)通路的激活、過(guò)量氧化應(yīng)激和鈣穩(wěn)態(tài)紊亂等，最終導(dǎo)致糖尿病進(jìn)展過(guò)程中的神經(jīng)損傷。不斷探究新的藥物對(duì)DPN的作用及其可能的作用機(jī)制，對(duì)于開(kāi)發(fā)新的DPN治療藥物具有重要意義。

目前，法舒地爾已被廣泛用于緩解一系列中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的癥狀，包括脊髓損傷、中風(fēng)、帕金森病、實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎、神經(jīng)性疼痛和癲癇[17]。已有證據(jù)顯示，法舒地爾通過(guò)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化，改善實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎[18]。法舒地爾還可治療實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎(Experimental autoimmune neuritis，EAN)。法舒地爾可明顯抑制EAN小鼠坐骨神經(jīng)炎癥反應(yīng)和脫髓鞘細(xì)胞數(shù)增多[19]。此外，法舒地爾還在糖尿病相關(guān)并發(fā)癥中發(fā)揮明顯的保護(hù)作用。法舒地爾通過(guò)抑制炎癥反應(yīng)和抑制轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1和基質(zhì)金屬蛋白酶-9/基質(zhì)金屬蛋白酶-1的表達(dá)，從而抑制炎癥反應(yīng)和減輕糖尿病肝纖維化[20]。本研究結(jié)果顯示，雖然法舒地爾對(duì)DPN大鼠體質(zhì)量和血糖無(wú)明顯影響，但是法舒地爾治療可明顯升高DPN大鼠TWL、MWT、PWT、MNCV和SNCV，改善DPN大鼠坐骨神經(jīng)病理學(xué)變化，增加坐骨神經(jīng)軸突數(shù)量。表明法舒地爾可在DPN中發(fā)揮保護(hù)作用。

氧化應(yīng)激被認(rèn)為是高血糖條件下細(xì)胞損傷的最終共同途徑。長(zhǎng)期持續(xù)的高血糖會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)元葡萄糖攝取過(guò)多，糖酵解對(duì)細(xì)胞內(nèi)葡萄糖的處理不足。細(xì)胞內(nèi)升高的葡萄糖隨后驅(qū)動(dòng)替代的多元醇途徑，導(dǎo)致氧化應(yīng)激和絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)激活，產(chǎn)生葡萄糖神經(jīng)毒性[21]。Nrf2/ARE途徑是抗氧化應(yīng)激損傷的主要反應(yīng)機(jī)制。在應(yīng)激狀態(tài)下，Nrf2從Keap1中解離出來(lái)，轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞核中，并上調(diào)抗氧化劑相關(guān)酶的轉(zhuǎn)錄，如血紅素加氧酶-1(Heme oxygenase-1，HO-1)、NAD(P)H醌氧化還原酶1和谷氨酸-半胱氨酸連接酶催化亞單位，從而發(fā)揮抗氧化作用[22]。研究[23]表明，Nrf2/ARE途徑在神經(jīng)炎癥中發(fā)揮重要的作用，激活Nrf2/ARE途徑可改善硝酸甘油誘導(dǎo)的偏頭痛大鼠神經(jīng)源性炎癥，從而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。目前，已有相關(guān)研究[24]表明，法舒地爾具有較強(qiáng)抗氧化活性，其通過(guò)激活Nrf2通路，抑制氧化應(yīng)激水平減少脂多糖誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷。本研究結(jié)果顯示，DPN大鼠坐骨神經(jīng)中MDA含量明顯升高，GSH和SOD含量明顯降低，Nrf2和HO-1蛋白水平明顯降低。而法舒地爾治療可明顯降低MDA含量，升高GSH和SOD含量以及Nrf2和HO-1蛋白水平。表明法舒地爾可能通過(guò)激活Nrf2/ARE途徑在DPN中發(fā)揮保護(hù)作用。

NF-κB通路參與許多生理過(guò)程，包括先天免疫、炎癥和許多細(xì)胞過(guò)程，如細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化和凋亡。NF-κB通路的異常激活可促進(jìn)炎癥因子的表達(dá)，如IL-1β、IL-6和TNF-α，導(dǎo)致炎性級(jí)聯(lián)和大量中性粒細(xì)胞聚集，最終引發(fā)一系列病理?yè)p傷[25]。已有研究[26]表明，四味健補(bǔ)湯通過(guò)抑制NF-κB通路，抑制IL-1β、IL-6和TNF-α等炎癥因子的產(chǎn)生，從而緩解小鼠紫杉醇誘導(dǎo)的周圍神經(jīng)病理性疼痛。同樣的，周夏慧等[27]的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，靶向抑制NF-κB通路可導(dǎo)致IL-6和TNF-α水平降低，減輕神經(jīng)氧化應(yīng)激損傷，從而改善DPN大鼠周圍神經(jīng)損傷狀態(tài)，促進(jìn)神經(jīng)傳導(dǎo)的恢復(fù)。目前，已有研究[28]顯示，法舒地爾具有較強(qiáng)抗炎活性，其通過(guò)抑制NF-κB通路改善脂多糖誘導(dǎo)的帕金森病模型中多巴胺神經(jīng)元炎癥反應(yīng)。本研究結(jié)果顯示，DPN大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α水平明顯升高，而法舒地爾治療可明顯降低IL-1β、IL-6和TNF-α水平以及p-p65/p65蛋白水平。表明法舒地爾可能通過(guò)抑制NF-κB途徑在DPN中發(fā)揮保護(hù)作用。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，法舒地爾可能通過(guò)激活Nrf2/ARE途徑和抑制NF-κB途徑，抑制DPN大鼠氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，從而在DPN中發(fā)揮保護(hù)作用，為明確法舒地爾對(duì)DPN的作用機(jī)制及開(kāi)發(fā)新的DPN治療策略提供了新的科學(xué)依據(jù)。