張 靜，陸曉雨，孫國正，范宇偉，吳興龍，李相運*

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，河北保定 071000；2.上海牧齊牧業(yè)科技有限公司，上海 201514）

薩能奶山羊產(chǎn)奶量高、抗病能力強(qiáng)，是當(dāng)今世界上乳用奶山羊的代表品種，但奶山羊,發(fā)情具有明顯的季節(jié)性，利用同期發(fā)情技術(shù)調(diào)整奶山羊的自然發(fā)情周期，能夠提高繁殖效率，為實現(xiàn)全年供奶提供技術(shù)支持。目前常見的奶山羊同期發(fā)情方法有孕酮栓（12～15 d）+馬絨毛膜促性腺激素（eCG）法、短期孕酮栓（5～6 d）+PGF2+eCG 法或短期孕酮栓（5～6 d）+PGF2+GnRH法等程序，并在撤栓后36～42 h 輸精2 次。不同的方案與輸精時間對不同季節(jié)、不同胎次、不同生理時期的薩能奶山羊的繁殖效果不同，不能滿足市場對全年供奶的需求。此外，陰道黏液的變化反映雌性的生殖狀態(tài)，將黏液狀態(tài)作為判斷發(fā)情、排卵的輔助指標(biāo)能夠更快、更便捷地確定最佳輸精時間，提高受胎率。因此，為探究適合薩能奶山羊的最佳同期發(fā)情與定時輸精方法，本實驗采用孕酮栓+eCG 的方法對過渡時期（7 月）以及繁殖季節(jié)（11 月）的母羊進(jìn)行同期發(fā)情處理，結(jié)合黏液狀態(tài)，探究適合薩能奶山羊的同期發(fā)情與定時輸精方案，提高受胎率，簡化配種工作，為薩能奶山羊的高效繁殖提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 實驗動物和場地 實驗地點位于甘肅省慶陽市環(huán)縣薩能奶山羊羊場。實驗時間分別為2019 年11 月繁殖季節(jié)和2020 年7 月過渡時期2個階段。試驗分為5 組，A 組為1 100 只繁殖季節(jié)的青年薩能奶山羊，B、C 組分別為過渡時期的245 只青年羊和259 只經(jīng)產(chǎn)母羊，D、E 組分別為泌乳后期停止擠奶的母羊125 只和46 只。試驗?zāi)秆蛟?～5 歲，體重30 kg 以上，膘情中等，無生殖道疾病。母羊全部舍飼，每天定時飼喂2 次燕麥草和苜蓿草，自由飲水和舔食礦物鹽磚。

1.2 同期發(fā)情 實驗?zāi)秆蛲ㄟ^埋置陰道海綿栓（含45 mg氟孕酮，上海牧齊牧業(yè)科技有限公司）進(jìn)行同期發(fā)情處理，埋栓當(dāng)天記為0 d，于15 d 撤栓，同時每只母羊肌肉注射馬絨毛膜促性腺激素（eCG）330 IU（1000 IU/瓶，寧波三生生物科技有限公司）。

1.3 定時輸精 為減小季節(jié)對精液的影響，采集薩能種公羊的新鮮精液后對原精活力進(jìn)行評估，選擇活力/密度>0.7 的種公羊精液，使用30℃預(yù)熱的伊利脫脂牛奶作為稀釋劑將精液稀釋5～10 倍（稀釋后精液活力>0.5，精子密度>4×10/mL），置于30℃恒溫水浴鍋內(nèi)備用。A～D 組母羊均在撤栓后40 h 和48 h 輸精2 次；E 組母羊在撤栓后48 h 和56 h 輸精2 次。輸精方法為子宮頸口內(nèi)輸精。輸精時，試驗羊倒立保定，用溫生理鹽水清洗并擦拭外陰部，通過開膣器打開陰道，使用頭燈觀察并定位子宮頸口，利用羊?qū)Ｓ幂斁鳎ū６ㄕ旧锟萍加邢薰荆┪?.3 mL 精液，并緩慢注入子宮頸口內(nèi)。若有黏液遮擋子宮頸口，則使用黏液管吸取干凈以免影響輸精。過渡期的D、E 兩組母羊在放栓時每只羊注射2 mL 苯甲酸雌二醇注射液（四川省泰信動物藥業(yè)有限公司）。

1.4 黏液檢查 輸精時詳細(xì)記錄每只母羊陰道黏液的外觀狀態(tài)，包括黏液量、粘稠度以及顏色。

1.5 妊娠檢查 輸精后40 d 由1 名固定人員使用B 超檢測儀（DP-30Vet，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）經(jīng)腹壁對受配母羊進(jìn)行妊娠檢查，統(tǒng)計每組母羊的受胎率。受胎率=妊娠母羊數(shù)/受配母羊數(shù)×100%。

1.6 統(tǒng)計分析 利用 Excel 軟件整理數(shù)據(jù)，用SPSS 19.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，各組奶山羊受胎率之間的顯著性檢驗采用卡方檢驗，<0.05 為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 同期發(fā)情方案對各組山羊同期效果的影響 撤栓后40 h 對試驗?zāi)秆蜻M(jìn)行試情，發(fā)情結(jié)果如表1 所示，繁殖季節(jié)的A 組母羊同期發(fā)情效果最好，過渡時期的B、C組母羊發(fā)情較好，但D、E 組泌乳母羊的發(fā)情效果一般，這說明本實驗的同期方案雖對不同時期的母羊均可行，但青年羊和斷奶經(jīng)產(chǎn)母羊的同期效果更好。

表1 各組奶山羊同期發(fā)情效果統(tǒng)計表

2.2 同期方案與輸精時間對不同季節(jié)和生理狀態(tài)奶山羊受胎率的影響 由表2 可知，A 組繁殖季節(jié)青年羊的受胎率為85.9%，高于相同處理的過渡時期B、C、D 組（<0.05）。B 組青年羊受配245 只，妊娠166 只，受胎率為67.8%；C 組經(jīng)產(chǎn)母羊受配259 只，妊娠159 只，受胎率為61.4%，不同胎次間受胎率差異不顯著。D 組泌乳母羊受配200 只，妊娠94 只，受胎率為47.0%；E組泌乳母羊受配69 只，妊娠35 只，受胎率為50.7%。D、E 組不同輸精時間的泌乳母羊受胎率差異不顯著。

表2 同期發(fā)情與定時授精方案對薩能奶山羊受胎率的影響

2.3 輸精時陰道黏液狀態(tài)與受胎率高低的相關(guān)性 過渡時期奶山羊在輸精時的黏液狀態(tài)與受胎率的對比情況如表3 所示，撤栓后40 h，經(jīng)產(chǎn)母羊的黏液為大量透明清亮黏液，青年羊黏液量比經(jīng)產(chǎn)羊少且呈拉絲狀，泌乳母羊呈少量半透明拉絲狀。撤栓后48 h，經(jīng)產(chǎn)母羊黏液量開始減少并出現(xiàn)拉絲狀，青年羊的黏液變化較小呈渾濁拉絲狀，泌乳母羊的黏液開始變得渾濁和粘稠。撤栓后56 h，泌乳母羊的黏液呈粘稠狀。結(jié)果顯示，在撤栓后相同輸精時間內(nèi)，經(jīng)產(chǎn)母羊的黏液最清亮，發(fā)情階段最早，受胎率較低，青年羊的黏液較粘稠且呈拉絲狀，受胎率較高。泌乳母羊黏液雖然很濃稠，但受胎率較斷奶母羊低。

表3 過渡時期薩能奶山羊輸精時的黏液狀態(tài)與受胎率高低的比較

3 討 論

3.1 不同季節(jié)對薩能奶山羊受胎率的影響 奶山羊?qū)儆诙倘照瞻l(fā)情動物，在自然條件下，非繁殖季節(jié)以及過渡時期的發(fā)情率和受胎率均低于繁殖季節(jié)。本試驗分別在繁殖季節(jié)和過渡時期對薩能奶山羊進(jìn)行了同期發(fā)情與定時輸精處理。在處理方案與輸精時間一致的條件下，A 組繁殖時期的青年羊獲得85.9%的受胎率。同時在過渡時期的B 組青年羊和C 組經(jīng)產(chǎn)母羊中獲得了較高的受胎率，D、E 組泌乳后期的母羊也獲得了近50%的受胎率。這說明本實驗的同期發(fā)情和定時輸精方法適合在繁殖季節(jié)以及過渡時期的薩能奶山羊中推廣應(yīng)用。后期將繼續(xù)在繁殖季節(jié)探究本試驗的同期方案對經(jīng)產(chǎn)羊以及泌乳后期母羊受胎率的影響。

3.2 不同胎次對薩能奶山羊受胎率的影響 本試驗分別在繁殖季節(jié)和過渡時期使用孕酮栓+eCG 的方法對薩能奶山羊進(jìn)行同期發(fā)情和人工輸精，評估胎次與受胎率之間的關(guān)系。結(jié)果表明，撤栓后40 h 和48 h 輸精兩次，繁殖季節(jié)的青年奶山羊獲得了很高的受胎率；同時過渡時期的青年羊和經(jīng)產(chǎn)母羊也獲得了不錯的受胎率，且青年羊的受胎率略高于經(jīng)產(chǎn)母羊。這些數(shù)據(jù)表明本試驗方案能夠使不同胎次的薩能奶山羊均獲得不錯的受胎率，而輸精時間更接近青年羊的排卵時間。關(guān)于排卵時間的文獻(xiàn)中指出，使用孕酮栓+hCG 同期發(fā)情的母羊從注射hCG 到排卵，青年羊比經(jīng)產(chǎn)母羊早約5～10 h。這均與本試驗的結(jié)論一致。對文登奶山羊使用孕酮栓+eCG 的方法進(jìn)行同期發(fā)情和人工輸精，第1 胎（青年羊）的受胎率（81.8% VS 57.1%）也顯著高于第2 胎（經(jīng)產(chǎn)母羊）。推斷本試驗的同期方案也存在青年羊排卵早于經(jīng)產(chǎn)羊的現(xiàn)象。因此，使用孕酮栓+eCG 對薩能奶山羊進(jìn)行同期處理并在撤栓后40 h 和48 h 輸精，青年羊和經(jīng)產(chǎn)羊均獲得較好的受胎率，若適當(dāng)推遲經(jīng)產(chǎn)羊的輸精時間6～8 h，有望獲得更高的受胎率，后期將繼續(xù)設(shè)計試驗進(jìn)行驗證。

3.3 不同輸精時間對奶山羊受胎率的影響 D、E 2 組母羊的輸精時間相差8 h，輸精較晚的E 組母羊受胎率略高，但二者差異不顯著。結(jié)果說明將輸精時間推遲到撤栓后48 h 和56 h，受胎率未受影響。大多數(shù)關(guān)于山羊定時輸精的文獻(xiàn)報道中，輸精時間都在撤栓后36～42 h 之間。而使用孕酮栓+eCG 法同期發(fā)情處理的母羊，在撤栓后54～56 h 內(nèi)進(jìn)行單次陰道輸精，獲得了較高的受胎率，這與本試驗結(jié)果一致。此外，使用孕酮栓+eCG的方法對努比亞山羊進(jìn)行同期發(fā)情處理，約65% 的母羊在撤栓后25～48 h 內(nèi)發(fā)情，27%的母羊在49～72 h 內(nèi)發(fā)情，而大部分母羊在撤栓后56 h 左右到達(dá)發(fā)情末期并輸精，這些均與E 組母羊的輸精時間一致。因此，將薩能奶山羊的輸精時間推遲至撤栓后48 h 和56 h，既能包含更多的排卵母羊以提高受胎率，又能使輸精時間相對自由，避免出現(xiàn)白天撤栓，晚間輸精的問題。

3.4 雌二醇對泌乳母羊受胎率的影響 雌二醇是一種甾體雌激素，具有很強(qiáng)的性激素作用。在放栓期間對D、E 2 組泌乳奶山羊注射2 mL 雌二醇并獲得了近50%的受胎率，猜測雌二醇起到了促進(jìn)發(fā)情的效果。有研究在繁殖季節(jié)對奶山羊注射6 mg 苯甲酸雌二醇，能夠提高羊群的發(fā)情同期性與受胎率。而在埋栓當(dāng)天給肉牛注射2 mg 雌二醇，并于7 d 后撤栓，發(fā)情比例與受胎率也均顯著升高。這與本試驗結(jié)果類似。猜測在埋栓期間注射雌二醇能夠?qū)ε怕哑鸬酱龠M(jìn)作用，提高發(fā)情的同期性和排卵率。另外，對同期發(fā)情的奶牛注射苯甲酸雌二醇12 h 后，增加了LH 的峰值和持續(xù)時間，起到了促排的作用。因此，為縮短空懷時間，實現(xiàn)全年產(chǎn)羔，對于泌乳后期的母羊可以在現(xiàn)有同期發(fā)情方案的基礎(chǔ)上，配合雌二醇的使用，促進(jìn)泌乳母羊的干奶及發(fā)情，提高妊娠率。

3.5 輸精時的黏液狀態(tài)與受胎率 陰道黏液變化可反映雌性的生殖狀態(tài)，與排卵和最佳輸精時間密切相關(guān)。反復(fù)經(jīng)直腸超聲檢測排卵時間的工作在生產(chǎn)實踐中不便執(zhí)行。因此，通過對陰道黏液狀態(tài)的直接觀察能更簡單地判斷排卵并確定最佳輸精時間。陰道黏液的變化主要由發(fā)情旺盛時期的大量、透明，隨后變?yōu)榘胪该骼z狀，再變?yōu)榘l(fā)情中后期的混濁和濃稠。本實驗對過渡時期4 組母羊黏液分泌情況的統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，在撤栓后相同的時間輸精時，青年羊的黏液呈現(xiàn)拉絲狀，發(fā)情階段晚于經(jīng)產(chǎn)母羊，獲得了較高的受胎率，即本實驗的輸精時間更接近青年羊的排卵時間。有類似的研究表明，在黏液較多且有拉絲狀的時候輸精，妊娠率獲得提高，這與本試驗結(jié)果一致。在小反芻動物中，卵泡破裂之前卵泡的直徑通常會減少，而宮頸黏液從透明狀到半透明拉絲狀的時候卵巢上有更大的有腔卵泡，說明大多數(shù)排卵發(fā)生在黏液由半透明變渾濁的階段。因此，宮頸黏液檢查的簡便性使其成為確定人工授精最佳時間的一種非常有用的方法，在黏液開始變渾濁的時期輸精能夠增加精子遇到卵子的概率，獲得更高的受胎率。

4 結(jié) 論

本實驗結(jié)果顯示，使用孕酮栓+eCG 的方法對薩能奶山羊進(jìn)行同期發(fā)情，并在撤栓后40 h 和48 h 輸精2 次，不同季節(jié)、不同胎次以及不同生理時期的母羊均獲得較好的受胎率。適當(dāng)推遲輸精時間，受胎率不受影響。此外，借助陰道黏液狀態(tài)的評估能夠更加準(zhǔn)確地判斷輸精時間。