隋昆澎 李長(zhǎng)田 李 丹 李 玉

黑木耳“面包菌”病致病菌株的分離鑒定及生物學(xué)特性

隋昆澎 李長(zhǎng)田 李 丹*李 玉

（吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食藥用菌教育部工程研究中心，吉林 長(zhǎng)春 130118）

黑木耳“面包菌”病是一種發(fā)生在黑木耳代料栽培中的競(jìng)爭(zhēng)性病害，其發(fā)病特征不易察覺、傳播蔓延速度快，發(fā)病后的菌包將無法出耳，給企業(yè)和種植戶造成較大損失。通過對(duì)吉林省黑木耳栽培主產(chǎn)區(qū)發(fā)生的疑似黑木耳“面包菌”病的菌包進(jìn)行調(diào)查，以及對(duì)染病菌包致病菌株的分離純化、形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定、系統(tǒng)發(fā)育分析以及致病性檢測(cè)，確定引起黑木耳“面包菌”病的致病菌株為黃孢原毛平革菌（）。對(duì)致病菌株進(jìn)行生物學(xué)特性研究，發(fā)現(xiàn)其菌絲的最適生長(zhǎng)條件為：溫度30 ℃，可溶性淀粉作碳源，蛋白胨作氮源，pH 6.0，完全黑暗。光照對(duì)菌絲體生長(zhǎng)有一定的抑制作用。

黑木耳；“面包菌”??；黃孢原毛平革菌；生物學(xué)特性

黑木耳（），又名木耳、光木耳，隸屬于擔(dān)子菌門、蘑菇綱、木耳目、木耳科、木耳屬[1]。黑木耳多糖含量極高，還富含蛋白質(zhì)、脂肪、維生素、無機(jī)鹽和粗纖維等成分[2]，具有抗腫瘤、抗肝炎、抗?jié)?、抗輻射、抗衰老、降血脂、抗凝血、增?qiáng)人體免疫功能等作用[3-5]。

作為精準(zhǔn)扶貧的重要抓手之一，近年來我國(guó)食用菌種植量大幅增長(zhǎng)[6]，其中，黑木耳已成為我國(guó)第二大食用菌品種，2018年產(chǎn)量達(dá)674.03萬噸，占我國(guó)食用菌總產(chǎn)量的17.54%[7]。而黑木耳病蟲害的發(fā)生，給企業(yè)和菇農(nóng)造成巨大損失。

黑木耳病害主要可分為侵染性病害和競(jìng)爭(zhēng)性病害，兩者在病原物種類、發(fā)生時(shí)期、發(fā)病條件、危害情況和防控技術(shù)等方面存在諸多差異。侵染性病害會(huì)直接導(dǎo)致菌絲萎縮、凋亡，如黑木耳黑疔病等[8]。競(jìng)爭(zhēng)性病害則與黑木耳菌絲爭(zhēng)奪養(yǎng)料，阻礙菌絲體在培養(yǎng)基質(zhì)中的正常生長(zhǎng)，對(duì)黑木耳栽培生產(chǎn)危害大，一旦發(fā)生就很難防治，造成黑木耳的產(chǎn)量和質(zhì)量下降[9,10]。黑木耳栽培過程中的主要競(jìng)爭(zhēng)性致病菌有綠色木霉[11]、青霉spp.[12]、曲霉spp.[13]、脈孢霉spp.[14]等。

黑木耳“面包菌”病也是競(jìng)爭(zhēng)性病害，研究表明其致病菌為黃孢原毛平革菌[15]，此致病菌適應(yīng)性強(qiáng)，傳播蔓延速度快，染病初期為白色斑塊，后連成片，白粉狀，與黑木耳菌絲不易區(qū)分，后期局部灰黃色，一周左右即可長(zhǎng)滿菌袋。染病后栽培基質(zhì)袋料分離，消耗明顯，如同面包一樣松軟，因而得名。黑木耳菌包被綠色木霉或鏈孢霉污染，雖然會(huì)造成減產(chǎn)，但不影響菌包繼續(xù)出耳。而“面包菌”一旦爆發(fā)，菌包將不再出耳，病害嚴(yán)重時(shí)幾乎絕收。

目前，研究報(bào)道僅限于對(duì)該病害的分離鑒定，迫切需要對(duì)其生物學(xué)特性、適宜發(fā)生條件及防治方法等進(jìn)行系統(tǒng)研究，以提出綜合防控措施。

本文對(duì)吉林省黑木耳主產(chǎn)區(qū)的黑木耳“面包菌”病進(jìn)行調(diào)查，對(duì)其致病菌株進(jìn)行分離純化、形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定、系統(tǒng)發(fā)育分析以及致病性檢測(cè)，并對(duì)致病菌株的生物學(xué)特性進(jìn)行了研究，以期為該病害的早期診斷和科學(xué)防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病害調(diào)查

2019年6月，分別對(duì)吉林省蛟河市、汪清縣和安圖縣的黑木耳基地進(jìn)行“面包菌”病害調(diào)查，共調(diào)查黑木耳菌包900袋，分3次重復(fù)。選取不同地區(qū)的黑木耳棚，每個(gè)棚100袋，記錄發(fā)病菌包的數(shù)量和癥狀等。共采集典型病例的黑木耳菌包樣本10個(gè)，帶回實(shí)驗(yàn)室用于病菌分離培養(yǎng)。

1.2 致病菌株的分離、純化及保存

將采集到的發(fā)病菌包先用酒精擦拭菌包表面，然后用經(jīng)消毒的解剖刀切開發(fā)病部位，用接種針挑取離正常木耳菌絲1～2 cm處的發(fā)病部位的袋料，接種到平板培養(yǎng)基中，恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。觀察培養(yǎng)情況，并不斷挑取單一菌落轉(zhuǎn)皿分離保存。經(jīng)多次純化后獲得純培養(yǎng)物，此時(shí)培養(yǎng)皿內(nèi)只存在單一的菌落形態(tài)[16]。挑取純培養(yǎng)的菌塊接種到試管內(nèi)，待長(zhǎng)滿整個(gè)試管后，4 ℃保藏備用。試驗(yàn)對(duì)10個(gè)發(fā)病菌包分別進(jìn)行病菌分離培養(yǎng)，共獲得10個(gè)菌株。

1.3 致病菌株的鑒定

（1）形態(tài)學(xué)鑒定。將從栽培基料上分離純化得到的致病菌株菌絲或分生孢子挑到PDA平板上，置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)并觀察，待菌落形成而分生孢子剛產(chǎn)生時(shí)制片，在顯微鏡下觀察分生孢子梗和分生孢子的形態(tài)特征，并進(jìn)行數(shù)碼照相。

隨機(jī)選取一個(gè)視野，測(cè)量記錄致病菌株的分生孢子梗、分生孢子、分生孢子器的大小，觀察致病菌株的產(chǎn)孢方式以及分生孢子的形狀、顏色等，并在40倍、100倍下進(jìn)行數(shù)碼顯微拍攝。參照文獻(xiàn)[15]所描述的致病菌株的形態(tài)特征，進(jìn)行致病菌株種類鑒定，以明確致病菌株的分類地位。

（2）分子生物學(xué)鑒定。將待測(cè)致病菌株在PDA平板活化后，挑取其平板培養(yǎng)物（7 mm小菌塊3塊）接種到鋪有玻璃紙的PDA平板上，在25 ℃下避光培養(yǎng)5 天。使用基因組DNA提取試劑盒（天根生化科技有限公司，北京）提取致病菌株菌絲體基因組DNA，方法詳見說明書。經(jīng)1 %瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后，確定基因組提取質(zhì)量。

選用真菌通用引物ITS1-F（5'-CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA-3'）和ITS4-B（5'-CAGGAGACTTGTACACGGTCCAG- 3'），進(jìn)行rDNA ITS-PCR擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增體系（20 μL）：11.4 μL雙蒸無菌水，2 μL 10×buffer，2 μL MgCl2（25 mmol/L），0.4 μL dNTP（10 mmol/L），引物ITS1和ITS4各1 μL，2 μL模板DNA，0.2 μL Taq酶（Thermo）。PCR反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性5 min，然后94 ℃變性50 s，55 ℃退火50 s，72 ℃延伸1 min，共28個(gè)循環(huán)，最后72 ℃延伸10 min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1 %瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)確認(rèn)，送至華大基因公司進(jìn)行測(cè)序。將測(cè)序結(jié)果在GenBank（NCBI，http://www.ncbi.nlm.gov）中進(jìn)行BLAST序列分析，從GenBank中選取合適的序列下載，經(jīng)ClustX 1.83軟件進(jìn)行多重序列對(duì)比，再用PAUP軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。依據(jù)系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系，確定菌株的分類地位。

1.4 致病性檢測(cè)

將純化后的致病菌株和黑木耳的菌絲同時(shí)分別接種在菌袋（26 cm×15 cm）兩端的培養(yǎng)料中，共接種9個(gè)菌袋，于25 ℃下避光培養(yǎng)15 天后觀察并記錄發(fā)病情況。若出現(xiàn)病癥，對(duì)發(fā)病部位再次進(jìn)行分離和鑒定[17]，檢測(cè)發(fā)病菌包中能否分離出黑木耳菌株，同時(shí)通過質(zhì)構(gòu)儀和電子秤對(duì)發(fā)病菌包進(jìn)行硬度和重量測(cè)定。

1.5 致病菌株的生物學(xué)特性研究

（1）培養(yǎng)基配方。碳源試驗(yàn)培養(yǎng)基：3.0 g磷酸二氫鉀、2.0 g酵母膏、2.0 g蛋白胨、1.5 g硫酸鎂、15.0 g瓊脂、20.0 g碳源、1.0 L蒸餾水，pH自然。分別以葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、糊精粉、可溶性淀粉作為碳源，并設(shè)立空白對(duì)照。

氮源試驗(yàn)培養(yǎng)基：1.5 g硫酸鎂、3.0 g磷酸二氫鉀、20.0 g葡萄糖、15.0 g瓊脂、20.0 g氮源、1.0 L蒸餾水，pH自然。分別以蛋白胨、酵母膏、酵母浸粉、磷酸氫二銨、亞硝酸鈉作為氮源，并設(shè)立空白對(duì)照。

pH試驗(yàn)培養(yǎng)基：使用1.0 mol/L鹽酸和1.0 mol/L氫氧化鈉將滅菌后PDA培養(yǎng)基的pH分別調(diào)至5.0、6.0、7.0、8.0、9.0。

溫度及光照試驗(yàn)采用PDA培養(yǎng)基，pH自然。

（2）溫度對(duì)致病菌株菌絲長(zhǎng)速的影響。將15.0 mL PDA培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿（φ=9.0 cm）中，將直徑為7.0 mm的接種塊接入到PDA培養(yǎng)基中央，每組設(shè)置6次重復(fù)，分別置于15 ℃、20 ℃、25 ℃、30 ℃、35 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行黑暗培養(yǎng)。采用“十”字交叉法，在菌絲萌發(fā)后每隔12 h測(cè)量菌絲長(zhǎng)度并記錄試驗(yàn)數(shù)據(jù)。當(dāng)培養(yǎng)2 d后，根據(jù)菌絲在培養(yǎng)皿上標(biāo)記的菌落直徑，計(jì)算菌絲生長(zhǎng)速率。

菌絲生長(zhǎng)速率=（第2 d所測(cè)菌落直徑? 接種塊直徑）/ 2。

所得數(shù)據(jù)用SPSS 1.9軟件進(jìn)行方差分析。

（3）不同碳源對(duì)致病菌株菌絲長(zhǎng)速的影響。分別將15.0 mL不同碳源的試驗(yàn)培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿（φ=9.0 cm）中，將直徑為7.0 mm的接種塊接入到PDA培養(yǎng)基中央，每組設(shè)置6次重復(fù)，置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行黑暗培養(yǎng)。測(cè)量分析方法同1.5（2）。

（4）不同氮源對(duì)致病菌株菌絲長(zhǎng)速的影響。分別將15.0 mL不同氮源的試驗(yàn)培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿（φ=9.0 cm）中，將直徑為7.0 mm的接種塊接入到PDA培養(yǎng)基中央，每組設(shè)置6次重復(fù)，置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行黑暗培養(yǎng)。測(cè)量分析方法同1.5（2）。

（5）pH對(duì)致病菌株菌絲長(zhǎng)速的影響。將15.0 mL pH不同的試驗(yàn)培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿（φ=9.0 cm）中，將直徑為7.0 mm的接種塊接入到PDA培養(yǎng)基中央，每組設(shè)置6次重復(fù)，置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行黑暗培養(yǎng)。測(cè)量分析方法同1.5（2）。

（6）光照對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響。將直徑為7.0 mm的接種塊接入到PDA培養(yǎng)基（φ=9.0 cm）中央，分別設(shè)置完全光照（24 h光照）、完全黑暗（24 h黑暗）、光暗交替（12 h光照，12 h黑暗）3個(gè)處理，每個(gè)處理6次重復(fù)，25 ℃恒溫培養(yǎng)。測(cè)量分析方法同1.5（2）。

2 結(jié)果與分析

2.1 病害的發(fā)生情況

對(duì)吉林省蛟河市、汪清縣、安圖縣黑木耳栽培基地進(jìn)行病害調(diào)查的結(jié)果顯示，該地區(qū)黑木耳“面包菌”病的平均發(fā)生率為7%左右（表1）。致病菌菌絲白色，很難與黑木耳菌絲相區(qū)分。調(diào)查時(shí)用手觸摸菌包，正常菌包質(zhì)地堅(jiān)硬，而發(fā)病菌包由于基質(zhì)被病菌快速分解利用，體積縮小，質(zhì)地軟化，手感似軟面包，并出現(xiàn)嚴(yán)重的袋料分離現(xiàn)象。

表1 不同調(diào)查基地黑木耳“面包菌”病的發(fā)病情況

地點(diǎn)調(diào)查時(shí)間調(diào)查袋數(shù)發(fā)病袋數(shù)發(fā)病率/% 吉林省蛟河市2020.6.9100 5 5.00 吉林省蛟河市2020.6.10100 7 7.00 吉林省蛟河市2020.6.11100 6 6.00 吉林省汪清縣2020.6.16100 8 8.00 吉林省汪清縣2020.6.17100 5 5.00 吉林省汪清縣2020.6.181001010.00 吉林省安圖縣2020.6.21100 4 4.00 吉林省安圖縣2020.6.22100 6 6.00 吉林省安圖縣2020.6.23100 9 9.00

2.2 致病菌株分離與鑒定結(jié)果

本試驗(yàn)對(duì)10個(gè)染病菌包進(jìn)行了致病菌株分離培養(yǎng)，獲得10個(gè)菌株，觀察結(jié)果顯示各菌株菌落形態(tài)和顯微形態(tài)特征均一致，判斷為同一種真菌。并對(duì)代表菌株P(guān)C01進(jìn)行形態(tài)學(xué)和分子鑒定。

（1）形態(tài)學(xué)鑒定。普通光學(xué)顯微鏡下40×菌株P(guān)C01的菌絲和孢子形態(tài)圖如圖1（A、B、C）所示，100×如圖1（D）所示。顯示菌株P(guān)C01菌絲具有以下特征：菌絲體發(fā)達(dá)，在平板上呈擴(kuò)散狀生長(zhǎng)，有隔有分枝，小分枝頂端著生孢子或厚垣孢子，小分枝大小一般為7.5～10 μm×5～7.5 μm。

厚垣孢子呈淺黃色，通過小枝與菌絲體連接，一般著生于菌絲體分枝的起始位置，呈亞圓形或橢圓形。分生孢子呈梨形、亞圓形或橢圓形，表面光滑，無隔，無色，大小為7～10 μm×5～7.5 μm。宏觀看，產(chǎn)孢量極大，呈白色粉末狀遍布整個(gè)菌落表面。

（2）分子生物學(xué)鑒定。經(jīng)對(duì)菌株P(guān)C01的rDNA ITS-PCR擴(kuò)增和測(cè)序，獲得片段長(zhǎng)度為604 bp的DNA序列（序列已上傳至GenBank，登錄號(hào)為SUB8393371）。經(jīng)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)Blast搜索比對(duì)，發(fā)現(xiàn)該序列與的序列相似性達(dá)99%，應(yīng)為同一個(gè)物種。利用PAUP與同屬的44個(gè)不同種采用最大簡(jiǎn)約法構(gòu)建了系統(tǒng)發(fā)育樹（圖2）。分析結(jié)果表明，菌株P(guān)C01的序列比對(duì)結(jié)果與匹配。結(jié)合宏觀經(jīng)典分類學(xué)數(shù)據(jù)，進(jìn)一步確定該致病菌株為黃孢原毛平革菌。其生物學(xué)分類為：擔(dān)子菌門Basidiomycota、蘑菇綱Agaricomycetes、多孔菌目Polyporales、伏革菌科Phanerochaetaceae、顯革菌屬。

2.3 致病性檢測(cè)

將回接病原菌PC01的菌包與對(duì)照在25 ℃下避光培養(yǎng)15 天后，回接菌包出現(xiàn)與病原地所采集樣品同樣的發(fā)病癥狀（圖3）。再次對(duì)回接菌包進(jìn)行菌株分離，可得到致病菌株P(guān)C01，而無法分離得到黑木耳菌株。硬度和重量測(cè)定結(jié)果表明，染病菌包平均硬度和重量分別為663.54 g和491.65 g，較正常健康菌包的硬度（2091.31 g）和重量（608.57 g）分別減少68%和19%?？梢姡S孢原毛平革菌為黑木耳“面包菌”病的致病菌株。

圖2 基于ITS和LSU基因序列聯(lián)合分析的最大簡(jiǎn)約樹

注：陰影處為致病菌株的系統(tǒng)發(fā)育位置，MLBP（左）＞50%和MPBP（右）＞50%的值在圖中標(biāo)注。

2.4 致病菌株生物學(xué)特性

（1）溫度。不同溫度下菌株P(guān)C01的菌絲生長(zhǎng)速率見圖4，差異顯著，從大到小依次為30 ℃> 35 ℃>25 ℃>20 ℃>15 ℃。30 ℃下菌絲生長(zhǎng)最快，也最濃密。

（2）碳源。菌株P(guān)C01的菌絲在5種碳源培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速率總體差異不大（表2），但長(zhǎng)勢(shì)有不同，以可溶性淀粉培養(yǎng)基的菌絲長(zhǎng)勢(shì)好、濃密且生長(zhǎng)速率顯著快于其他處理。不同碳源培養(yǎng)基的生長(zhǎng)速率由大到小為：可溶性淀粉>蔗糖>麥芽糖>糊精>葡萄糖，最適碳源為可溶性淀粉。

A. 健康黑木耳菌袋（CK）；B. 回接致病菌株菌包

圖4 溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

（3）氮源。菌株P(guān)C01的菌絲在不同氮源培養(yǎng)基上的長(zhǎng)勢(shì)差異較大，并且生長(zhǎng)速率和菌絲密度各不相同（表3）。蛋白胨培養(yǎng)基上的菌絲生長(zhǎng)速率最快，菌絲最為濃密；而亞硝酸鈉培養(yǎng)基上的菌絲未生長(zhǎng)。菌株P(guān)C01菌絲在不同氮源培養(yǎng)基中生長(zhǎng)速率由大到小為：蛋白胨>酵母浸粉>酵母膏>磷酸氫二銨>亞硝酸鈉，最適氮源為蛋白胨，而選擇亞硝酸鈉作為氮源對(duì)該菌絲有明顯的抑制作用。

表2 不同碳源對(duì)黃孢原毛平革菌菌絲體生長(zhǎng)的影響

碳源菌落顏色菌落邊緣整齊度菌絲長(zhǎng)勢(shì)菌絲生長(zhǎng)速率*/(cm/d) 葡萄糖白整齊+4.44±0.0750 b 蔗糖白整齊++4.67±0.0828 b 麥芽糖灰白整齊++4.66±0.0577 b 糊精灰白整齊++4.58±0.0619 b 可溶性淀粉白整齊+++5.00±0.1892 a 對(duì)照(CK)白整齊++4.41±0.0210 b

注：同列數(shù)據(jù)后小寫字母不同表示在<0.05水平上差異顯著；+++表示菌絲濃密、健壯，++表示菌絲較密、長(zhǎng)勢(shì)一般，+表示菌絲長(zhǎng)勢(shì)弱；*數(shù)據(jù)為6次的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。表3同。

表3 不同氮源對(duì)黃孢原毛平革菌菌絲體生長(zhǎng)的影響

氮源菌落顏色菌落邊緣整齊度菌絲長(zhǎng)勢(shì)菌絲生長(zhǎng)速率/ (cm/d) 蛋白胨白整齊+++5.35±0.0799 a 酵母膏灰白整齊++5.01±0.0968 b 酵母浸粉灰白整齊+++ 5.23±0.1137 ab 磷酸氫二銨白不整齊+3.41±0.0498 c 亞硝酸鈉---- 對(duì)照(CK)灰白整齊++5.00±0.1931 b

注：“-”代表菌絲未生長(zhǎng)。

（4）pH。pH對(duì)菌株P(guān)C01菌絲生長(zhǎng)速率影響大（圖5）。當(dāng)pH為6.0時(shí)，菌絲生長(zhǎng)最快；pH為5.0時(shí)，生長(zhǎng)最慢。不同pH培養(yǎng)基菌絲生長(zhǎng)速率由大到小為：6.0>7.0>8.0>9.0>5.0。pH在5.0～8.0范圍內(nèi)，菌絲生長(zhǎng)均較濃密。

（5）光照。菌株P(guān)C01菌絲體生長(zhǎng)受光暗條件影響較大，不同光照處理間存在顯著差異（圖6）。以完全黑暗條件下菌絲體生長(zhǎng)速率最快，為3.99 cm/d，表明光照對(duì)菌絲體生長(zhǎng)有一定的抑制作用。

3 結(jié)論與討論

近年來，吉林地區(qū)黑木耳“面包菌”病時(shí)常爆發(fā)，對(duì)黑木耳生產(chǎn)造成不良影響。本研究確定了從吉林省收集的黑木耳“面包菌”菌包致病菌為黃孢原毛平革菌，并發(fā)現(xiàn)該菌喜溫暖（最適溫度為30 ℃）、偏酸性（pH 6.0）生長(zhǎng)條件，而黑木耳菌絲生長(zhǎng)最適溫度則為25～28 ℃，最適pH 5.0～6.0[18]。因此，中溫培養(yǎng)更能在抑制黃孢原毛平革菌菌絲體生長(zhǎng)的同時(shí)，促進(jìn)黑木耳菌絲體生長(zhǎng)。

圖5 pH對(duì)黃孢原毛平革菌菌絲長(zhǎng)速的影響

圖6 光照對(duì)黃孢原毛平革菌菌絲體生長(zhǎng)的影響

本研究結(jié)果顯示，黑暗環(huán)境更有利于黃孢原毛平革菌菌絲體生長(zhǎng)，光照存在一定的抑制生長(zhǎng)作用，這與靈芝蛛網(wǎng)病病原菌[19]和斑玉蕈蛛網(wǎng)病病原菌[20]的研究結(jié)果類似。因此，在不影響黑木耳菌絲正常生長(zhǎng)的情況下，提供一定時(shí)間的光照，避免長(zhǎng)時(shí)陰暗，有利于“面包菌”病害的防控。

黃孢原毛平革菌菌絲生長(zhǎng)的最適碳、氮源分別為可溶性淀粉和蛋白胨，而亞硝酸鈉作為氮源對(duì)其有明顯抑制作用。黑木耳菌絲生長(zhǎng)最佳碳源是蔗糖，葡萄糖次之；最佳氮源是酵母浸粉[21]?？衫么瞬町悾诤谀径囵B(yǎng)過程中選擇添加適當(dāng)?shù)奶?、氮源?/p>

黃孢原毛平革菌具有分泌木質(zhì)素過氧化物酶（Lip）[22]、錳過氧化物酶（Mnp）[23]及其他酶類的能力，被廣泛應(yīng)用于造紙、污水處理等工業(yè)研究領(lǐng)域[24-27]。但其作為黑木耳生產(chǎn)中的競(jìng)爭(zhēng)性雜菌，降解培養(yǎng)基質(zhì)速度及菌絲生長(zhǎng)速度遠(yuǎn)超黑木耳，導(dǎo)致黑木耳菌絲體無法生長(zhǎng)而絕收，造成較大經(jīng)濟(jì)損失[15]。目前，關(guān)于“面包菌”病害的種類還存有爭(zhēng)議，尚無證據(jù)證明致病過程中黑木耳菌絲被黃孢原毛平革菌菌株侵染，是否發(fā)生重寄生現(xiàn)象還有待驗(yàn)證。

由于黃孢原毛平革菌與黑木耳同屬于白腐真菌，兩者生長(zhǎng)所需的環(huán)境條件相似，對(duì)該病害的防治造成較大困難。建議在黑木耳栽培生產(chǎn)過程中，嚴(yán)格把控每個(gè)環(huán)節(jié)，培養(yǎng)料要充分拌勻，預(yù)濕透徹，滅菌徹底；篩選使用優(yōu)良菌種，規(guī)范菌種制作及接種操作；調(diào)控好菇房?jī)?nèi)環(huán)境，注意通風(fēng)。

目前，食用菌生產(chǎn)中可使用的殺菌劑很少，一些殺菌劑如百菌清等雖然對(duì)病原真菌有強(qiáng)抑制作用，但也同樣抑制食用菌菌絲生長(zhǎng)。礦質(zhì)元素銅是食用菌栽培中理想的殺菌劑，可有效抑制病原真菌生長(zhǎng)，對(duì)食用菌生長(zhǎng)影響較小，但其會(huì)提高食用菌的銅含量。銅元素在人機(jī)體代謝中起著生物催化劑作用，銅攝入量過低會(huì)導(dǎo)致貧血、發(fā)育不良等癥狀，嚴(yán)重時(shí)可引起白癜風(fēng)等疾病[28]，而銅攝入過量又會(huì)危害人體健康[29]。因此，利用銅元素作為食用菌殺菌劑還有待于進(jìn)一步研究。

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Identification and biological characteristics of “bread fungus” disease of

Sui Kunpeng Li Changtian Li Dan1*Li Yu

（Engineering Research Center of Chinese Ministry of Education for Edible and Medicinal Fungi, College of Agronomy, Jilin Agricultural University, Changchun, Jilin 130118, China）

The “bread fungus” disease ofis a competitive disease that occurs insubstituting cultivation. The characteristics of the disease are not easy to detect at the beginning, and spread quickly, greatly impacts on yield after infection. This study identified a pathogenic strain from cultivation substrate ofinJilin Province where is one of the main production regions in China. Isolation and purification test of pathogenetic fungi was conducted, and the results showed thatleads “bread fungus” disease through morphological, phylogenetic and pathogenicity test. The study of biological characteristics of pathogenic strains showed that the optimum growth conditions were as follows: temperature 30 ℃, soluble starch as carbon source, pH 6.0 and peptone as nitrogen source. The light inhibited the growth of mycelial, while darkness stimulated mycelial growth. This study provides a useful reference for effective control of the “bread fungus” disease ofr.

; “bread fungus” disease;; biological characteristics

S646

A

2095-0934（2022）02-119-08

國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃（2021YFD1600401）；中國(guó)科學(xué)院戰(zhàn)略性先導(dǎo)科技專項(xiàng)（XDA28080304）

隋昆澎（1995—），男，在讀碩士，主要從事食用菌栽培與病害防治。E-mail：skp744459033@163.com。

李丹（1983—），女，博士，實(shí)驗(yàn)師，現(xiàn)主要從事食藥用菌病害研究工作。E-mail：lidan@jlau.edu.cn。