趙文浩 易少奎 蘇君曉 周 瓊 沈建忠 李大鵬 周小云

(1. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院, 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部淡水生物繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 武漢 430070; 2. 湖州師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院, 湖州 313000)

葉爾羌高原鰍(Triplophysa yarkandensis), 俗稱“狗頭魚(yú)”, 是新疆南部塔里木河水系的特有魚(yú)類,隸屬于鯉形目鰍科(Cobitidae), 條鰍亞科(Noemacheilinae), 是高原鰍屬(Triplophysa)魚(yú)類中個(gè)體最大、生長(zhǎng)速度最快的經(jīng)濟(jì)魚(yú)種, 迄今發(fā)現(xiàn)的最大個(gè)體長(zhǎng)30 cm、重305 g[1]。近幾十年來(lái), 塔里木河干流水流量日益減少, 鹽堿化程度加劇, 加之大量濫捕、外來(lái)入侵魚(yú)類捕食等, 導(dǎo)致葉爾羌高原鰍種群數(shù)量急劇減少, 即將成為繼扁吻魚(yú)和塔里木裂腹魚(yú)之后的又一瀕危物種[2]。遺傳多樣性是物種繁衍、抵抗疾病和適應(yīng)環(huán)境變化的物質(zhì)基礎(chǔ), 因此, 開(kāi)展葉爾羌高原鰍野生群體遺傳多樣性研究, 從分子水平分析其種群遺傳結(jié)構(gòu)特征和種群歷史動(dòng)態(tài), 進(jìn)而制定合理有效的保護(hù)方案, 對(duì)葉爾羌高原鰍的種質(zhì)資源保護(hù)和科學(xué)開(kāi)發(fā)利用有重要的意義。

線粒體DNA(mtDNA)是一種核外遺傳物質(zhì), 因具有基因組小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、進(jìn)化速度快、幾乎不發(fā)生重組以及不同的區(qū)域進(jìn)化速率存在差異等特點(diǎn), 成為物種鑒定和群體遺傳學(xué)研究的理想分子標(biāo)記[3]。在mtDNA中, 細(xì)胞色素b(Cytochromeb,Cytb)基因的進(jìn)化速度適中, 許多學(xué)者選擇其作為分子標(biāo)記, 用于分析種群母系起源、系統(tǒng)進(jìn)化、遺傳結(jié)構(gòu)和遺傳多樣性等[4—6]; 控制區(qū)(D-loop)是線粒體上的一段非編碼區(qū), 由于受選擇壓力較小, 其進(jìn)化速率是線粒體其他區(qū)域的5—10倍, 研究發(fā)現(xiàn), 用D-loop序列進(jìn)行群體遺傳多樣性和系統(tǒng)進(jìn)化研究,獲得的信息更全面、結(jié)果更準(zhǔn)確[7,8]。近年來(lái), 通過(guò)分析Cytb和D-loop序列的堿基信息研究水產(chǎn)動(dòng)物遺傳多樣性已被廣泛應(yīng)用, 如Guo等[9]用Cytb和D-loop序列對(duì)雅魯藏布江6個(gè)地理群體的拉薩裸裂尻魚(yú)(Schizopygopsis younghusbandi)進(jìn)行遺傳多樣性分析, 發(fā)現(xiàn)各群體的遺傳多樣性水平均較低, 并且遺傳變異主要來(lái)自群體內(nèi)部; 杜景豪等[8]用Cytb和D-loop序列對(duì)5個(gè)日本囊對(duì)蝦(Penaeus japonicus)群體分析結(jié)果顯示, 群體間遺傳分化較明顯, 近期未曾經(jīng)歷瓶頸效應(yīng)和種群擴(kuò)張。上述研究都為種質(zhì)資源的保護(hù)與開(kāi)發(fā)利用提供了重要的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

目前, 關(guān)于葉爾羌高原鰍的研究主要集中在基礎(chǔ)生物學(xué)[11,12]、繁殖習(xí)性[1,10]、肌肉營(yíng)養(yǎng)成分[13]和耐鹽堿性[14,16]等方面, 而在遺傳多樣性方面, 僅見(jiàn)王錦秀等[15]用SSR標(biāo)記對(duì)塔里木河5個(gè)群體的研究報(bào)道。為了更多地了解塔里木河葉爾羌高原鰍的遺傳多樣性現(xiàn)狀, 本研究采用線粒體Cytb基因和Dloop序列對(duì)塔里木河8個(gè)地理群體的遺傳多樣性進(jìn)行分析, 研究其種群結(jié)構(gòu)和歷史動(dòng)態(tài)信息等, 旨在為葉爾羌高原鰍的資源保護(hù)與科學(xué)開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

本研究所用葉爾羌高原鰍為2019年5至10月從塔里木河支流渭干河和車爾臣河采集, 其中拜城大宛其(DWQ)22尾、托克遜(TKX)20尾、且末第二分水樞紐(JDT)22尾、阿克提坎村(AKT)11尾、蘇外斯埂管護(hù)站(SWS)23尾、且末五葦場(chǎng)(WWC)28尾、瓦石峽鄉(xiāng)(WSX)21尾和臺(tái)特瑪湖(TTM)27尾, 共174尾(圖 1)。根據(jù)形態(tài)學(xué)特征確認(rèn)物種后,取鰭條于100%乙醇中暫存, 運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室后置于–80℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

圖1 葉爾羌高原鰍采樣點(diǎn)Fig. 1 The sampling locations of T. yarkandensis

1.2 DNA提取、序列擴(kuò)增及測(cè)序

取鰭條約30 mg, 用醋酸銨/異戊醇法提取基因組DNA[17], 分別用1%的瓊脂糖凝膠電泳和Nano-Drop 2000紫外分光光度計(jì)(Thermo Scientific,USA)檢測(cè)DNA的質(zhì)量和濃度。將合格的DNA稀釋至50 ng/μL用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

分別采用Xiao等[18]和Liu等[19]的引物擴(kuò)增Cytb和D-loop序列, 具體為: CytbF: 5′-GACTTG AAAAACCACCGTTG-3′, R: 5′-CTCCGATCTCCG GATTACAAGAC-3′; D-loop F: 5′-ACCACTGGC TCCCAAAGC-3′, R: 5′-ATCTTAGCATCTTCAGTG-3′。PCR反應(yīng)體系30 μL, 包括: DNA模板3 μL、上下游引物各0.75 μL(10 μmol/L), 2×PCR Master Mix 15 μL, ddH2O 10.5 μL。PCR程序?yàn)? 94℃預(yù)變性5min, 35個(gè)循環(huán)[94℃變性30s, 退火30s(Cytb為56℃,D-loop為54℃), 72℃延伸50s], 72℃延伸10min。PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)為單一明亮的條帶后送公司測(cè)序。

1.3 數(shù)據(jù)分析

測(cè)序結(jié)果用Bio Edit 7.0.5軟件[20]進(jìn)行編輯并人工校對(duì), 然后用MEGA 7.0[21]將其與NCBI中葉爾羌高原鰍mtDNA(KT224367)中的Cytb和D-loop序列同源比對(duì), 確認(rèn)測(cè)序結(jié)果的準(zhǔn)確性, 并統(tǒng)計(jì)序列的堿基組成、變異和群體間遺傳距離; 用鄰接法(Neighbor-joining, NJ)基于Kimura2-parameter(K2-p)模型構(gòu)建樣本系統(tǒng)發(fā)育樹(shù), 用Bootstrap(1000次)檢驗(yàn)聚類樹(shù)各分支的置信度。用DnaSP 5.1[24]統(tǒng)計(jì)多態(tài)位點(diǎn)數(shù)目(Number of polymorphic sites, S)、核苷酸多樣性指數(shù)(Nucleotide diversity,Pi)、單倍型數(shù)目(Number of haplotype,H)、單倍型多樣性指數(shù)(Haplotype diversity,Hd)等。用PopART[22]構(gòu)建單倍型網(wǎng)絡(luò)進(jìn)化圖。用Barrier v.2.2[23]分析群體間的遺傳障礙。用Arlequin 3.5[25]進(jìn)行AMOVA分析(Analysis of molecular variance)計(jì)算群體內(nèi)和群體間的遺傳變異, 并進(jìn)行Tajima’sD[26]和Fu’sFs[27]中性檢驗(yàn)以及核苷酸不配對(duì)分布分析(Mismatch distribution)研究群體是否發(fā)生擴(kuò)張。

2 結(jié)果

2.1 序列組成及變異

測(cè)序結(jié)果經(jīng)校正和比對(duì)后, 分別選取1079 bp的Cytb和887 bp的D-loop序列用于后續(xù)分析。結(jié)果顯示, 兩序列的A、T、C、G平均含量分別為24.0%、33.1%、25.7%、17.2%和32.5%、31.1%、21.3%、15.1%、63.6%, A+T含量(Cytb, 57.1%; D-loop,63.6%)均顯著高于G+C含量(Cytb, 42.9%; D-loop,36.4%)。Cytb的多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)為50個(gè), 包括40個(gè)簡(jiǎn)約信息位點(diǎn)和10個(gè)單一突變位點(diǎn); D-loop的多態(tài)位點(diǎn)數(shù)為57個(gè), 包括47個(gè)簡(jiǎn)約信息位點(diǎn)和10個(gè)單一突變位點(diǎn); 兩序列的堿基轉(zhuǎn)換與顛換比分別為9.8﹕1和2.9﹕1。堿基突變位點(diǎn)如圖 2所示。

2.2 群體遺傳多樣性

基于Cytb序列共檢測(cè)到41個(gè)單倍型(圖 2), 其中, Hap-41為8個(gè)群體共有單倍型。單倍型多樣性指數(shù)(Hd)為0.9247±0.0124, 核苷酸多樣性指數(shù)(Pi)為0.0065±0.0034; SWS群體的Hd和Pi指數(shù)最高,JDT群體最低?；贒-loop序列共檢測(cè)到51個(gè)單倍型, 沒(méi)有發(fā)現(xiàn)所有群體的共享單倍型,Hd為0.9776±0.0032,Pi為0.0115±0.0058; AKT群體的Hd指數(shù)最高, 而TKX群體的Pi指數(shù)最高。此外, 基于D-loop分析得到的單倍型數(shù)量、Hd和Pi均高于基于Cytb序列的分析結(jié)果(表 1)。

表1 葉爾羌高原鰍各群體的遺傳多樣性參數(shù)Tab. 1 Genetic diversity parameters in each population of T. yarkandensis

圖2 葉爾羌高原鰍Cytb (a)與D-loop (b)序列的變異位點(diǎn)圖Fig. 2 The genetic variation loci of T. yarkandensis in Cytb (a) and D-loop (b) sequences

2.3 群體遺傳結(jié)構(gòu)與系統(tǒng)發(fā)育

遺傳分化指數(shù)(Fst)表示群體間的遺傳分化程度, 通常分為3個(gè)等級(jí): 弱分化(Fst<0.05)、中度分化(0.05≤Fst≤0.25)和高度分化(Fst>0.25)[28]。在本研究中, 除TTM和TKX群體與其他群體間的Fst在0.05—0.25, 屬于中度分化外, 其他群體間的Fst均小于0.05, 屬于弱分化水平(圖 3)。同時(shí), 各群體間的遺傳距離小, 其范圍分別為0.0055—0.0071(Cytb)和0.0092—0.0128(D-loop; 表 2), 表明群體間具有較高的遺傳同質(zhì)性。

表2 基于Cytb(對(duì)角線下)和D-loop(對(duì)角線上)序列的葉爾羌高原鰍群體間遺傳距離Tab. 2 Genetic distance between populations of T. yarkandensis based on Cytb (under the diagonal) and D-loop (on the diagonal)sequences analysis

圖3 基于Cytb(a)和D-loop(b)序列的群體間遺傳分化指數(shù)(Fst)Fig. 3 Pairwise Fst between pairs of populations based on Cytb (a) and D-loop (b) sequences

AMOVA分析結(jié)果顯示, 基于Cytb和D-loop序列獲得的群體內(nèi)變異貢獻(xiàn)率分別為96.57%和95.25%, 而群體間的變異貢獻(xiàn)率僅為3.43%和4.75%(表 3)。為了解支流間的遺傳變異, 本研究將8個(gè)群體按支流分為兩個(gè)亞群(渭干河亞群和車爾臣河亞群), AMOVA分析發(fā)現(xiàn), 遺傳變異依然主要來(lái)自群體內(nèi)部(Cytb, 93.55%; D-loop, 92.65%), 而支流間(Cytb, 5.40%; D-loop, 4.71%)和支流內(nèi)群體間(Cytb,1.05%; D-loop, 2.64%)遺傳變異較小。但是, 遺傳分化指數(shù)分析結(jié)果顯示, 兩支流之間出現(xiàn)了一定程度的遺傳分化(Cytb,Fct=0.0540,P<0.05; D-loop,Fct=0.0471,P<0.05; 表 3)。

表3 基于Cytb和D-loop序列的葉爾羌高原鰍群體間AMOVA分析結(jié)果Tab. 3 AMOVA analysis results of inter-population based on Cytb and D-loop sequences

基于各樣本的Cytb和D-loop序列構(gòu)建的NJ系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)顯示, 8個(gè)群體的樣本交錯(cuò)分布, 沒(méi)能形成明顯的地理聚類(圖 4)。為了驗(yàn)證結(jié)果的準(zhǔn)確性,本研究進(jìn)一步構(gòu)建了單倍型網(wǎng)絡(luò)進(jìn)化圖, 結(jié)果顯示,不同群體間共享單倍型較多, 也沒(méi)能形成明顯的地理聚群和譜系結(jié)構(gòu)(圖 5)。這與上述分析中各群體間遺傳分化指數(shù)Fst值小、遺傳距離值低的結(jié)果相一致。用BARRIER軟件分析兩支流的群體間是否存在遺傳障礙, 基于Cytb和D-loop序列的分析結(jié)果一致, 均顯示渭干河與車爾臣河群體之間存在潛在的遺傳障礙(圖 6)。

圖4 基于Cytb (a)和D-loop (b)序列構(gòu)建的葉爾羌高原鰍各樣本NJ系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig. 4 NJ phylogenetic trees of T. yarkandensis samples based on Cytb (a) and D-loop (b) sequences

圖5 基于Cytb (a)和D-loop (b)序列構(gòu)建的葉爾羌高原鰍單倍型網(wǎng)絡(luò)圖Fig. 5 Median-Joining network of Cytb (a) and D-loop (b) haplotypes from eight populations of T. yarkandensis

圖6 基于Cytb (a)和D-loop (b)遺傳距離的遺傳障礙圖Fig. 6 Map of genetic barriers based on Cytb (a) and D-loop (b)genetic distances圓點(diǎn)表失8個(gè)葉爾羌高原鰍所在地理位置, 紅色箭頭a, b代表遺傳障礙Circle points represent the locations of the eight T. yarkandensis labeled by abbreviations of their populations, the red arrows a and b represent genetic barriers

2.4 群體歷史動(dòng)態(tài)信息

Tajima’sD和Fu’sFs中性檢驗(yàn)結(jié)果如表 4所示,除SWS和WWC兩個(gè)群體的Fs值為負(fù)值且統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果顯著(P<0.05)外, 其他6個(gè)群體的D值和Fs值的統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果都不顯著(P>0.05)。隨后, 我們將所有個(gè)體作為一個(gè)整體進(jìn)行Tajima’sD和Fu’sFs檢驗(yàn), 得到的D值和Fs值均為負(fù)值, 但D值的統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果不顯著(P>0.05), 結(jié)合大部分群體D值與Fs值都為正值且統(tǒng)計(jì)學(xué)不顯著的結(jié)果, 說(shuō)明沒(méi)有明顯偏離中性突變。此外, 雖然錯(cuò)配分析擬合度檢驗(yàn)結(jié)果支持?jǐn)U張假設(shè)(P>0.05; 表 4), 但是基于Cytb與D-loop所得核苷酸錯(cuò)配分布曲線都為多峰形(圖 7a和7b)。綜合數(shù)據(jù)結(jié)果表明, 整個(gè)葉爾羌高原鰍種群相對(duì)穩(wěn)定,近期沒(méi)有經(jīng)歷過(guò)瓶頸效應(yīng)和明顯擴(kuò)張。

圖7 基于Cytb (a)和D-loop (b)序列的葉爾羌高原鰍8個(gè)群體核苷酸錯(cuò)配分布圖Fig. 7 Mismatch distribution of eight T. yarkandensis populations based on Cytb (a) and D-loop (b) sequences

表4 葉爾羌高原鰍8個(gè)群體的中性檢驗(yàn)及擬合度檢驗(yàn)Tab. 4 Neutrality test and goodness-of-test for eight T. yarkandensis populations

3 討論

3.1 序列組成及突變

本研究基于線粒體Cytb和D-loop序列對(duì)塔里木河支流渭干河和車爾臣河8個(gè)葉爾羌高原鰍群體的遺傳多樣性進(jìn)行了分析。兩序列的堿基組成分析發(fā)現(xiàn), A+T含量均顯著高于G+C含量, 呈現(xiàn)明顯的偏隨機(jī)分布, 這與多數(shù)脊椎動(dòng)物線粒體基因的編碼模式一致[29]。Meyer[30]提出, 在線粒體DNA進(jìn)化過(guò)程中, 發(fā)生轉(zhuǎn)換的頻率遠(yuǎn)高于發(fā)生顛換的頻率。葉爾羌高原鰍Cytb基因和D-loop序列的堿基轉(zhuǎn)換與顛換比值分別為9.8﹕1和2.9﹕1, 表明兩序列的堿基突變類型均以轉(zhuǎn)換為主, 這與Meyer的結(jié)論一致[30]。

3.2 種群遺傳多樣性

遺傳多樣性是物種進(jìn)化和適應(yīng)環(huán)境變化的物質(zhì)基礎(chǔ), 也是評(píng)價(jià)種群資源狀況的重要依據(jù), 一個(gè)物種的遺傳多樣性水平越高, 其對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力就越強(qiáng), 就能獲得更多的生存空間使得種群得到更好的發(fā)展, 相反, 遺傳多樣性缺乏則會(huì)導(dǎo)致物種資源衰退甚至滅絕[31]。線粒體DNA的核苷酸多樣性(Pi)和單倍型多樣性(Hd)是評(píng)價(jià)物種群體遺傳變異程度的重要指標(biāo), 也是衡量一個(gè)群體遺傳多樣性和遺傳分化的重要參數(shù)[32]。Grant和Bowen[33]認(rèn)為, 如果群體的核苷酸多樣性指數(shù)Pi>0.05且單倍型多樣性指數(shù)Hd>0.5, 則表明該群體的遺傳變異較豐富,遺傳多樣性也較高。在本研究中, 8個(gè)葉爾羌高原鰍群體的Pi指數(shù)均大于0.005、Hd指數(shù)均大于0.5,因此均屬于高核苷酸多樣性、高單倍型多樣性群體, 這與王錦秀等[15]用SSR標(biāo)記對(duì)塔里木河5個(gè)群體的葉爾羌高原鰍的研究結(jié)果類似。塔里木河葉爾羌高原鰍較高的遺傳多樣性水平, 可能是由于其對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力較強(qiáng), 在水體發(fā)生匯流時(shí)能很好地進(jìn)行遷移, 使得群體間能夠進(jìn)行基因交流, 進(jìn)而促進(jìn)了群體的遺傳變異[14—16]。此外, 基于D-loop序列獲得的各群體單倍型數(shù)、單倍型多態(tài)性指數(shù)和核苷酸多態(tài)性指數(shù)均大于基于Cytb序列分析的結(jié)果, 這可能與D-loop區(qū)不編碼蛋白質(zhì), 所受的選擇壓力小, 進(jìn)化速率會(huì)更快等因素有關(guān)[34,35], 這也與杜景豪等[8]在日本囊對(duì)蝦和Guo等[9]在拉薩裸裂尻魚(yú)中的研究結(jié)果一致。

3.3 群體遺傳結(jié)構(gòu)

遺傳距離大小是衡量物種間或同一物種不同群體間親緣關(guān)系遠(yuǎn)近的常用指標(biāo), 種群內(nèi)的遺傳距離通常小于10%, 大于6%的群體間會(huì)有明顯的亞種或種的分化[36]。在本研究中, 8個(gè)群體間的遺傳距離值均較低(Cytb, 0.0055—0.0071; D-loop, 0.0092—0.0128), 表明相互間的遺傳距離較近。根據(jù)Wright[28]的遺傳分化理論, 遺傳分化指數(shù)Fst<0.05代表遺傳分化水平較低, 在本研究中, 大部分群體間的遺傳分化指數(shù)Fst都小于0.05, 因此為低分化水平。王錦秀等[15]用SSR分析塔里木河5個(gè)葉爾羌高原鰍群體的遺傳結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn), 其遺傳距離在0.606—1.901, 明顯高于本研究結(jié)果, 并且多數(shù)群體間的遺傳分化指數(shù)在0.05—0.15, 達(dá)到中等程度的遺傳分化。產(chǎn)生上述結(jié)果差異的原因, 一方面可能是由于線粒體DNA標(biāo)記(Cytb和D-loop)與核DNA標(biāo)記(SSR)的進(jìn)化速率不同[37], 因此, 用兩種類型的遺傳標(biāo)記對(duì)群體遺傳結(jié)構(gòu)解析時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)一定的差異; 另一方面,由于種群的遺傳結(jié)構(gòu)受地理隔離、生存環(huán)境、種群瓶頸和基因流等多種因素的影響, 在王錦秀等[15]的研究中, 其5個(gè)采樣點(diǎn)分別位于不同的支流(阿爾干、臺(tái)特瑪湖、車爾臣河、阿克蘇河和臺(tái)南河),相互之間的地理位置距離較遠(yuǎn), 群體間的基因交流相對(duì)較少。此外, AMOVA分析發(fā)現(xiàn), 遺傳變異主要來(lái)源于群體內(nèi)部, 而群體間遺傳變異很小, 僅3.43%(Cytb)和4.75%(D-loop); 基于樣本構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)和單倍型構(gòu)建的網(wǎng)絡(luò)進(jìn)化圖均顯示, 各群體的樣本沒(méi)能形成明顯的地理聚群和譜系結(jié)構(gòu)。綜合上述結(jié)果表明, 本研究的8個(gè)葉爾羌高原鰍群體間存在基因交流。雖然渭干河和車爾臣河屬于塔里木河中游和下游的不同支流, 但自2000年起, 塔里木河下游啟動(dòng)了生態(tài)輸水工程[38], 這可能促進(jìn)了渭干河和車爾臣河間的葉爾羌高原鰍的基因交流。王錦秀等[15]在其研究中也發(fā)現(xiàn), 不同支流的葉爾羌高原鰍群體間存在基因交流, 并指出, 這種交流增加了群體的等位基因數(shù), 是其群體遺傳多樣性高的原因之一。

3.4 群體歷史動(dòng)態(tài)

Tajima’sD與Fu’sFs檢驗(yàn)在檢測(cè)群體是否發(fā)生擴(kuò)張方面比較敏感, 當(dāng)明顯偏離中性突變時(shí),D值與Fs值為顯著負(fù)值, 表明發(fā)生過(guò)群體擴(kuò)張事件[39]; 核苷酸錯(cuò)配分布曲線呈單峰時(shí)表明群體發(fā)生過(guò)擴(kuò)張,呈雙峰或多峰形時(shí)表明群體未經(jīng)歷擴(kuò)張, 而是保持相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)[40]。本研究基于Cytb和D-Loop序列的分析結(jié)果顯示, 大部分群體的D值與Fs值為正值且沒(méi)有顯著性差異(P>0.05), 因此不能拒絕中性突變, 即沒(méi)有發(fā)生過(guò)群體擴(kuò)張事件; 同時(shí), 核苷酸錯(cuò)配分布曲線為雙峰形。這些結(jié)果表明, 本研究中的8個(gè)葉爾羌高原鰍群體沒(méi)有經(jīng)歷擴(kuò)張, 而是保持著一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)。

綜上所述, 塔里木河葉爾羌高原鰍各群體的遺傳多樣性水平較高, 但遺傳變異主要來(lái)源于群體內(nèi)部, 群體間的遺傳分化程度較小, 各樣本沒(méi)能形成明顯的遺傳分支與地理群體聚類。雖然兩支流群體間存在潛在的遺傳障礙, 并發(fā)生了一定的遺傳分化, 但其遺傳距離只在0.05附近(Cytb,Fct=0.0540;D-loop,Fct=0.0471)。因此, 根據(jù)進(jìn)化上具有關(guān)鍵意義的單元ESU(Evolutionarily Significant Unit)設(shè)置原則[41], 本研究建議將塔里木河葉爾羌高原鰍種群作為一個(gè)保護(hù)管理單元進(jìn)行保護(hù)。