紀(jì)曉娜， 吳文博， 任志敏， 陳國(guó)軍， 李延君

(1.長(zhǎng)春工程學(xué)院，吉林長(zhǎng)春 130012；2.吉林省城市污水處理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，吉林長(zhǎng)春 130012；3.長(zhǎng)沙圖書館，湖南長(zhǎng)沙 410005)

甲萘威(Carbaryl)又稱西維因(Sevin)，化學(xué)名稱為甲氨基甲酸-1-萘酯(1-Naphthalenyl methyl carbamate)，屬于萘基氨基甲酸酯類農(nóng)藥，目前占世界殺蟲劑市場(chǎng)份額的15%左右[1]。雖然氨基甲酸酯類殺蟲劑具有一定的水溶性，但其殘留可對(duì)生物的免疫系統(tǒng)和生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)造成非常大的損害[2]。而具有環(huán)境激素效應(yīng)的甲萘威溶解在自然水循環(huán)系統(tǒng)中加劇了生態(tài)系統(tǒng)的污染[3]。甲萘威通常采用色譜法[4]、熒光光譜法[5]和分光光度法[6,7]進(jìn)行檢測(cè)。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB/T 5009.21-2003)《糧、油、菜中甲萘威殘留量的測(cè)定》推薦了色譜法和分光光度兩種方法[7]。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB/T 5009.145-2003)《植物源性食品中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多種殘留的測(cè)定》中采用氣相色譜-氮磷檢測(cè)器[8]。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB 2763-2019)《食品中農(nóng)藥最大殘留限量》對(duì)于葉菜類蔬菜[9]中甲萘威的限量為1 mg·kg-1。高效液相色譜(HPLC)法具有普及率高、分析效率高和靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)，農(nóng)藥殘留使用液相色譜法[10]檢測(cè)更有利于推廣。本文選擇HPLC法作為檢測(cè)手段，以菠菜為例，探索可推廣應(yīng)用的蔬菜中甲萘威殘留的定性定量分析方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和試劑

Agilent 1100高效液相色譜儀，附二極管陣列檢測(cè)器(美國(guó)，安捷倫公司)；KQ -100E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；N-EVAP氮吹儀(美國(guó)，Organomation)。

甲萘威農(nóng)殘標(biāo)準(zhǔn)溶液(美國(guó)Sigma公司)；甲醇(色譜純，山東禹王)。

1.2 色譜條件

ZORBAX SB-C18柱(150 mm×4.6 mm，3 μm)，美國(guó)安捷倫公司；流動(dòng)相：甲醇-水=55∶45(V/V)；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：40.0 ℃；進(jìn)樣體積：10.0 μL；二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)：268 nm。

1.3 蔬菜樣品的前處理

新鮮菠菜去根、去土、晾干后，將莖和葉全部進(jìn)行勻漿處理，從均勻的菠菜漿液中取樣5.0 g(精確至0.001 g)，加入5.0 mL甲醇，混合均勻后放入超聲波振蕩器中振蕩1 h，使農(nóng)藥成分提取完全。待振蕩完畢后將樣品放入離心機(jī)中離心(轉(zhuǎn)速為3 000 r·min-1)，離心10 min后，再用甲醇洗沉淀3次，合并濾液。氮吹至近干，甲醇定容至5 mL，經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾，24 h內(nèi)完成HPLC測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的優(yōu)化

根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[11]，色譜柱選擇固定相為十八烷基鍵合相的ZORBA SB-C18柱，以甲醇和水配比為流動(dòng)相[12]，柱溫40.0 ℃和進(jìn)樣體積10.0 μL，進(jìn)行其他條件的優(yōu)化試驗(yàn)。

2.1.1 檢測(cè)波長(zhǎng)優(yōu)化在190～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)甲萘威進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，甲萘威的最大紫外吸收波長(zhǎng)(λmax)為268 nm，在此波長(zhǎng)下甲萘威的響應(yīng)值最高，因此選擇268 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.1.2 流動(dòng)相流速優(yōu)化在0.5～1.5 mL·min-1之間選擇5個(gè)不同的流速，分別為0.5、0.8、1.0、1.2和1.5 mL·min-1，考察流動(dòng)相流速的影響。隨著流動(dòng)相流速的增大，保留時(shí)間逐漸減小(從3.142 min減至1.043 min)，通過(guò)色譜峰的保留時(shí)間和峰寬計(jì)算柱效(理論塔板數(shù)N越大越好)，先增大后減小，流速為1.0 mL·min-1時(shí)，柱效最高(N=4 767)，因此選擇流動(dòng)相流速為1.0 mL·min-1。

2.1.3 流動(dòng)相比例優(yōu)化在甲醇-水(V/V)為50∶50～65∶35之間進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn)(以5%逐步增大甲醇的比例)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，隨著有機(jī)相中甲醇比例的增大，保留時(shí)間逐漸減小(從1.699 min減至1.596 min)，柱效先增大后減小，甲醇-水=55∶45時(shí)柱效最佳(N=5 243)。

經(jīng)過(guò)色譜條件的優(yōu)化試驗(yàn)，確定二極管陣列檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng)為268 nm，流動(dòng)相為甲醇∶水=55∶45(V/V)，流動(dòng)相流速為1.0 mL·min-1。

2.1.4 定性和定量分析取1 000 mg·L-1甲萘威標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL至10 mL容量瓶中，用甲醇定容得到100 mg·L-1甲萘威儲(chǔ)備溶液；取1 mL甲萘威儲(chǔ)備溶液稀釋至10 mL，得到10.0 mg·L-1甲萘威標(biāo)準(zhǔn)溶液，使用HPLC法分析，利用保留時(shí)間(tR=1.659 min，tM=1.033 min)定性。

分別取甲萘威儲(chǔ)備溶液0.05、0.1、0.2、0.5和1.0 mL于10 mL容量瓶，用甲醇稀釋定容，得到0.50、1.0、2.0、5.0、和10.0 mg·L-1系列甲萘威標(biāo)準(zhǔn)溶液。使用優(yōu)化的色譜條件檢測(cè)系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x)，峰面積為縱坐標(biāo)(y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，在0.50～10.0 mg·L-1質(zhì)量濃度范圍內(nèi)甲萘威濃度與峰面積成線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2=0.9997,線性方程為：y=128x-6.58。以3倍信噪比(S/N)確定檢出限，結(jié)果為11.8 μg·L-1。

2.2 菠菜樣品檢測(cè)

將從市場(chǎng)購(gòu)買的新鮮菠菜，按“1.3”對(duì)樣品進(jìn)行超聲波輔助提取前處理，提取液濃縮后按優(yōu)化的色譜條件進(jìn)行HPLC分析，外標(biāo)法定量。檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)菠菜中甲萘威的殘留量為0.882 mg·kg-1。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定葉菜類蔬菜[9]的限量為1.0 mg·kg-1，符合要求。菠菜中甲萘威殘留色譜圖如圖1所示。

圖1 菠菜中甲萘威殘留的色譜圖

2.3 精密度和回收率

連續(xù)檢測(cè)7次樣品，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.447%，滿足測(cè)試要求(表1)。對(duì)樣品進(jìn)行3水平加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)(表1)，考察方法的準(zhǔn)確度。結(jié)果表明，菠菜樣品中甲萘威的加標(biāo)回收率為82.1%～92.1%，說(shuō)明方法滿足分析要求。

表1 菠菜樣品中甲萘威的加標(biāo)回收率(n=7)

3 結(jié)論

建立了HPLC法檢測(cè)葉菜類蔬菜中甲萘威殘留，并在此基礎(chǔ)上以保留時(shí)間定性、外標(biāo)法定量，以菠菜為例進(jìn)行了甲萘威殘留的分析。該方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性相關(guān)系數(shù)(R2)、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)、回收率等指標(biāo)均滿足測(cè)試要求，具有分離效果好、檢測(cè)速度快、靈敏度高等特點(diǎn)，具有推廣應(yīng)用的前景。