郝彬 景鵬 張宗林 李淑盈

(陜西郝其軍制藥股份有限公司，陜西 西安 710075)

升血小板膠囊是由青黛、連翹、牡丹皮等五味中藥組成的中藥復方制劑，具有清熱解毒，涼血止血，散瘀消斑的功效，用于治療原發(fā)性血小板減少性紫癜。原制備工藝為連翹提取揮發(fā)油，將揮發(fā)油噴灑在顆粒上燜放一定時間，然后密封包裝，揮發(fā)油在貯藏中較易損失。為了提高連翹揮發(fā)油在制劑中的穩(wěn)定性，本研究用β-環(huán)糊精對升血小板膠囊中的連翹揮發(fā)油進行包合，并采用正交試驗法選擇包合工藝的最佳條件。

1 儀器與試藥

79-1A型恒溫磁力攪拌器(天津鑫博得儀器有限公司)，101電熱鼓風干燥箱(北京科偉永興儀器有限公司)，YP1002N電子天平(上海精密科學儀器有限公司)，β-環(huán)糊精(天津市光復精細化工研究所)，連翹揮發(fā)油(陜西郝其軍制藥有限公司提取車間自提，方法為：連翹加水浸泡4 h，水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油6 h)，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1包合物的制備 β-環(huán)糊精包合物的制備方法有飽和水溶液法、研磨法、超聲法等，進行預試驗研究，根據(jù)試驗結果初步確定包合物制備方法。

2.1.1飽和溶液法 取β-環(huán)糊精40 g，加水320 mL，40 ℃攪拌30 min使溶解，滴入等體積無水乙醇稀釋的揮發(fā)油10 mL，邊加邊攪拌，攪拌1 h，低溫冷藏24 h，抽濾，用少量無水乙醇洗滌包合物，包合物置烘箱中于50 ℃干燥，粉碎，即得。

2.1.2超聲法 取β-環(huán)糊精40 g，加水320 mL，40 ℃超聲30 min使溶解，滴入等體積無水乙醇稀釋的揮發(fā)油10 mL，超聲1 h，低溫冷藏24 h，抽濾，用少量無水乙醇洗滌包合物，包合物置烘箱中于50 ℃干燥，粉碎，即得。

2.1.3研磨法 取β-環(huán)糊精40 g，加水320 mL，研磨30 min，滴入等體積無水乙醇稀釋的揮發(fā)油10 mL，繼續(xù)研磨1 h，低溫冷藏24 h，抽濾，用少量無水乙醇洗滌包合物，包合物置烘箱中于50 ℃干燥，粉碎，即得。

2.2空白回收率的測定 精密量取連翹揮發(fā)油1 mL，置500 mL燒瓶中，加水320 mL，按照中國藥典2015年版四部揮發(fā)油測定項下甲法測定，按下公式計算空白回收率：

2.3揮發(fā)油包合率和包合物收得率的測定 取制得的包合物，稱定重量，置于500 mL燒瓶中，加水320 mL，按照中國藥典2015年版四部揮發(fā)油測定項下甲法測定，按下公式計算揮發(fā)油包合率，結果見表1。

包合物收得率=

100%

表1 包合物制備預試驗結果(%)

結果表明，飽和溶液法制得的包合物揮發(fā)油包合率和收得率均較高，因此，選擇飽和溶液法作為包合物制備方法，并進一步研究出最佳包合條件。

2.4最佳包合工藝選擇 選擇揮發(fā)油(mL)∶β-環(huán)糊精(g)比例、包合溫度、攪拌時間、加水倍數(shù)四個因素，各取三個水平，按照L9(34)進行正交試驗，因素水平表見表2。

2.4.1綜合評價指標 揮發(fā)油包合率是衡量包合效果的重要指標，包合率越高，包合效果越好，可作為包合工藝篩選的主要指標，權重系數(shù)定為80%；包合物收得率在大生產(chǎn)中也很有意義。在β-環(huán)糊精和揮發(fā)油投入量一定的情況下，收得率越高，包合效果越好，故將包合物收得率作為次要篩選指標，權重系數(shù)定為20%。

綜合評分=包合率(%)×80%+收得率(%)×20%

2.4.2正交試驗結果與分析 按L9(34)正交表的安排進行試驗，結果見表3。由直觀分析可知，影響揮發(fā)油包合的因素順序為：揮發(fā)油(mL)和β-環(huán)糊精(g)比例、攪拌時間、加水倍數(shù)和包合溫度，最佳工藝為A3B2C2D1；方差分析見表3。由方差分析可知，揮發(fā)油(mL)和β-環(huán)糊精(g)比例對揮發(fā)油包合有顯著性影響，其余均無顯著性影響，影響次序為A>C>D>B，和直觀分析一致。因此，將包合工藝參數(shù)定為：揮發(fā)油(mL)∶β-環(huán)糊精(g)比例(1∶8)，包合溫度40 ℃，攪拌時間2 h、加水倍數(shù)8倍量。

表3 正交試驗結果

表4 方差分析表 F0.05(2.2)=19 F0.01(2.2)=99

2.5驗證試驗

2.5.1包合率和收得率驗證 按照最佳揮發(fā)油包合工藝條件，進行三批驗證試驗。

取連翹揮發(fā)油5 mL，加無水乙醇5 mL振搖使溶解，取β-環(huán)糊精40 g，加水320 mL，40 ℃攪拌30 min使溶解，滴入等體積無水乙醇稀釋的揮發(fā)油10 mL，邊加邊攪拌，40 ℃攪拌2 h，低溫冷藏24 h，抽濾，用少量無水乙醇洗滌包合物，包合物于50 ℃干燥，粉碎，即得。三批驗證試驗結果見表5。

表5 β-環(huán)糊精包合揮發(fā)油驗證試驗結果

結果表明，該揮發(fā)油包合工藝穩(wěn)定，具有重現(xiàn)性和可操作性。

2.5.2TLC法驗證 比較揮發(fā)油、β-環(huán)糊精揮發(fā)油混合物、β-環(huán)糊精包合物、包合物中回收的揮發(fā)油以及β-環(huán)糊精五個樣品在同一薄層色譜條件下的斑點差異。

2.5.2.1供試品溶液制備方法 連翹揮發(fā)油供試品溶液的制備：精密量取連翹揮發(fā)油1 mL，加無水乙醇稀釋至20 mL，搖勻，即得。

包合物中回收的揮發(fā)油供試品溶液的制備：精密量取包合物中回收的揮發(fā)油1 mL，加無水乙醇稀釋至20 mL，搖勻，即得。

連翹揮發(fā)油和β-環(huán)糊精混合物溶液的制備：取β-環(huán)糊精8 g，再精密量取連翹揮發(fā)油1 mL，噴入環(huán)糊精中，混勻，加無水乙醇20 mL，振搖使溶解，濾過，取續(xù)濾液，即得。

連翹揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物溶液的制備：取連翹揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物8 g，加無水乙醇20 mL，振搖使溶解，濾過，取續(xù)濾液，即得。

β-環(huán)糊精溶液的制備：取β-環(huán)糊精8 g，加無水乙醇20 mL，振搖使溶解，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.5.2.2試驗方法 精密吸取上述五種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(8∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視，結果見圖1。

1.連翹揮發(fā)油；2.包合物中回收的揮發(fā)油；3.連翹揮發(fā)油β-環(huán)糊精混合物；4.連翹揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物；5.β-環(huán)糊精

圖1 TLC色譜圖

2.5.2.3試驗結果 由圖可知，連翹揮發(fā)油、包合物中回收的揮發(fā)油以及揮發(fā)油和β-環(huán)糊精混合物在相同的Rf值上，有相同顏色的斑點；而連翹揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物和β-環(huán)糊精，在此Rf值上，沒有斑點。結果表明，β-環(huán)糊精對揮發(fā)油進行包合后形成新物相，包合效果非常好，同時也表明包合工藝并未改變揮發(fā)油化學性質(zhì)。

2.6包合物的穩(wěn)定性考察 將揮發(fā)油和β-環(huán)糊精混合物和揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物分別置40 ℃和60 ℃放置10 d，分別于第0天、第5天和第10天取樣，按揮發(fā)油測定法測定揮發(fā)油的收率，結果見表6。

表6 高溫試驗結果

試驗結果表明：40 ℃放置10 d，包合物中的揮發(fā)油幾乎沒有損失，混合物中的揮發(fā)油損失約89.8%；60 ℃放置10 d，包合物中的揮發(fā)油損失約12.5%；混合物中的揮發(fā)油損失約92.3%。由此可見，包合物中的揮發(fā)油熱穩(wěn)定性明顯高于混合物，說明包合工藝是成功可行的。

3 討論

β-環(huán)糊精包合連翹揮發(fā)油，能有效防止連翹揮發(fā)油揮發(fā)，提高其穩(wěn)定性，從而保證療效。該方法工藝操作簡便，實用性強，對提高升血小板膠囊中揮發(fā)油的穩(wěn)定性有著積極意義。

正交試驗的直觀分析和方差分析都表明，揮發(fā)油(mL)和β-環(huán)糊精(g)比例對包合結果又顯著影響，其他因素對包合影響次之，但在包合物制備過程中，攪拌時間長，可在一定范圍內(nèi)提高包合物的包合率；包合溫度升高，反應速度加快，包合物生成量增多，但是溫度過高，部分揮發(fā)油會損失，包合率反而下降，溫度過低，β-環(huán)糊精溶解度降低，包合物生成減少。因此，控制其他包合因素也是很有實際意義的。

用薄層色譜法驗證包合效果為一種有效可行的方法，該法直觀、簡單可行。

對β-環(huán)糊精包合物和混合物進行40 ℃和60 ℃條件下穩(wěn)定性考察，能比較出兩者對溫度的穩(wěn)定性，從而進一步證明進行揮發(fā)油包合是必要的，有意義的。