甘葉青，朱九超，常曉靜，曹傳閨，孫泉云，衛(wèi)金良，夏爐明

（1.上海市嘉定區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，上海 201800；2.上海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，上海 201103）

當(dāng)前，危害我國(guó)生豬養(yǎng)殖業(yè)的疫病種類繁多，除必須嚴(yán)格控制的非洲豬瘟外，還包括豬瘟（CSF）、口蹄疫（FMD）、豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）、豬偽狂犬?。≒R）和豬流行性腹瀉（PED）等[1]。疫苗預(yù)防接種是目前規(guī)模豬場(chǎng)疫病防控的主要措施。但疫苗免疫效果受諸多因素影響，要確保豬群維持有效的免疫力，抗體水平（包括免疫抗體和感染抗體）監(jiān)測(cè)評(píng)估必不可少[2]。

上海市嘉定區(qū)目前共有2 個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)，其中一個(gè)為地方豬（梅山豬）保種場(chǎng)，生豬存欄3 000余頭；另一個(gè)為商品豬場(chǎng)，生豬存欄8 500 余頭。本研究對(duì)嘉定區(qū)2 個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)開(kāi)展FMD（O 型，以下非特指均簡(jiǎn)稱FMD）、CSF、PRRS、PR 和PED 等5 種主要疫病血清學(xué)監(jiān)測(cè)，從而掌握嘉定區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)主要疫病的免疫抗體水平、動(dòng)態(tài)變化情況和野毒感染狀況，及時(shí)發(fā)現(xiàn)疫病風(fēng)險(xiǎn)隱患，為規(guī)模豬場(chǎng)及時(shí)調(diào)整免疫程序，科學(xué)制定綜合防控措施提供數(shù)據(jù)支撐[3]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 目標(biāo)群 嘉定區(qū)現(xiàn)有2 個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)的全部存欄生豬。

1.1.2 樣本量計(jì)算 按照置信水平95%、可接受誤差5%，以及免疫抗體合格率70%合格線的要求，通過(guò)估計(jì)流行率（本研究為估計(jì)免疫抗體合格率）的樣本量計(jì)算公式計(jì)算樣本總量；在每年每個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)采樣數(shù)量方面，按照置信水平95%、試驗(yàn)敏感性95%、預(yù)期免疫抗體不合格率30%，采用發(fā)現(xiàn)疫?。ū狙芯繛榘l(fā)現(xiàn)免疫不合格的豬只）的樣本量計(jì)算公式計(jì)算每個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)的樣本量[4]。每個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)采用分層隨機(jī)抽樣策略，按照生產(chǎn)母豬、后備母豬和育肥豬3 個(gè)生產(chǎn)階段進(jìn)行血清樣品采集。2018—2021 年共采集嘉定區(qū)2 個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)血清樣品340 份，其中生產(chǎn)母豬180 份、后備母豬50 份、育肥豬（120～150 日齡）110 份。嘉定區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)FMD 等5 種疫病免疫程序見(jiàn)表1。

表1 嘉定區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)FMD 等5 種疫病免疫程序

1.1.3 試劑和儀器 FMD 抗體液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所；CSF、PRRS 以及PR 病毒gB、gp1 抗體檢測(cè)試劑盒，均購(gòu)自美國(guó)IDEXX 公司；PED 抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自法國(guó)ID.vet 公司；FMD NS 抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自荷蘭Thermo Fisher 公司。儀器包括離心機(jī)、酶標(biāo)儀（TECAN SUNRISE REMOTE）和96 通道全自動(dòng)洗板機(jī)（ELX405R）等。

1.2 方法

采用ELISA 方法，對(duì)血清樣品進(jìn)行FMD、PRRS、CSF、PR（gB）和PED 免疫抗體檢測(cè)，以及FMD非結(jié)構(gòu)蛋白（NS）和PR（gE）感染抗體檢測(cè)。操作步驟和判定標(biāo)準(zhǔn)按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 總體情況

免疫抗體方面：2018—2021 年嘉定區(qū)2 個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)FMD、PRRS、CSF、PR 等4 種疫病的免疫抗體合格率均在80%以上，表明嘉定區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)這4 種疫病的免疫程序合理，免疫措施到位，防控效果確實(shí)；PED 免疫抗體合格率僅為23.5%，未形成有效的免疫屏障，說(shuō)明規(guī)模豬場(chǎng)在PED 疫苗類型選擇、免疫程序制定、免疫頻次和計(jì)劃執(zhí)行等方面有待進(jìn)一步優(yōu)化。

感染抗體方面：FMD（NS）和PR（gE）抗體均維持在較低感染水平（表2）。

表2 嘉定區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)5 種主要疫病抗體檢測(cè)結(jié)果匯總

2.2 不同年份

2018—2021 年持續(xù)4 年對(duì)嘉定區(qū)2 個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)進(jìn)行了FMD、CSF 等5 種疫病免疫抗體和感染抗體檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果分別見(jiàn)表3 和表4。

表3 2018—2021 年嘉定區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)5 種疫病免疫抗體檢測(cè)結(jié)果匯總

表4 2018—2021 年嘉定區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)FMD、PR 感染抗體檢測(cè)結(jié)果匯總

按照年份比較，免疫抗體方面，F(xiàn)MD、CSF免疫抗體合格率呈逐年上升趨勢(shì)，PRRS 免疫抗體總體維持在較高水平，年度間差異不顯著（P＞0.05），PR 呈先降低后升高趨勢(shì)，而PED 免疫抗體水平一直較低。在感染抗體方面，F(xiàn)MD（NS）抗體均為陰性，PR（gE）抗體呈現(xiàn)顯著下降趨勢(shì)（P＜0.01），2021 年感染抗體陽(yáng)性率降至0。

2.3 不同豬場(chǎng)類型

目前，嘉定區(qū)僅有2 個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)（1 個(gè)地方豬保種場(chǎng)、1 個(gè)商品豬場(chǎng)）。從免疫抗體檢測(cè)結(jié)果看，除CSF 和PR 外，種豬場(chǎng)的FMD、PRRS 和PED免疫抗體水平整體高于商品豬場(chǎng)（P＜0.05，表5）。感染抗體方面，商品豬場(chǎng)PR（gE）抗體顯著高于種豬場(chǎng)（P＜0.01，表6）。

表5 嘉定區(qū)不同類型規(guī)模豬場(chǎng)5 種主要疫病免疫抗體檢測(cè)結(jié)果匯總

表6 嘉定區(qū)不同類型規(guī)模豬場(chǎng)FMD、PR 感染抗體檢測(cè)結(jié)果匯總

2.4 不同生產(chǎn)階段

分別采集生產(chǎn)母豬、后備母豬和育肥豬（120～150日齡，F(xiàn)MD 3 次免疫后）等3 個(gè)生產(chǎn)階段豬群的血清學(xué)樣品。從檢測(cè)結(jié)果看，5 種疫病的免疫抗體合格率基本呈現(xiàn)生產(chǎn)母豬＞后備母豬＞育肥豬的特征，而PR（gE）感染抗體陽(yáng)性率呈現(xiàn)生產(chǎn)母豬＞育肥豬＞后備母豬的規(guī)律。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表7～8。

表7 嘉定區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)不同生產(chǎn)階段豬群5 種疫病免疫抗體檢測(cè)結(jié)果匯總

3 討論

3.1 FMD

2018—2021 年，嘉定區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)均未檢測(cè)出FMD（NS）感染抗體陽(yáng)性，F(xiàn)MD 免疫抗體合格率呈逐年上升趨勢(shì)。疫苗毒株與流行毒株的匹配性是影響FMD 疫苗免疫效果的最重要因素，其次為免疫劑量、免疫頻次和免疫部位等[5]。嘉定區(qū)高度重視FMD 免疫工作，每年向規(guī)模豬場(chǎng)印發(fā)FMD 等豬群主要疫病免疫方案，要求選擇O-A FMD 二價(jià)滅活疫苗，對(duì)商品豬和后備母豬按照60、90、120日齡各免1 次的免疫程序?qū)嵤?qiáng)制免疫工作，連續(xù)4 年的檢測(cè)結(jié)果表明，嘉定區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)FMD 免疫抗體水平遠(yuǎn)超過(guò)70%的合格線，且均未檢測(cè)到感染抗體陽(yáng)性，說(shuō)明FMD 防控取得了良好效果。

表8 嘉定區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)不同生產(chǎn)階段豬群FMD、PR 感染抗體檢測(cè)結(jié)果匯總

3.2 CSF

2017 年CSF 退出國(guó)家強(qiáng)制免疫計(jì)劃，但嘉定區(qū)各規(guī)模豬場(chǎng)始終高度重視CSF 的全面免疫和補(bǔ)免工作，事實(shí)也證明高質(zhì)量的疫苗和科學(xué)合理的免疫程序?qū)SF 防控十分重要。2018—2021 年，嘉定區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)CSF 免疫抗體平均合格率為84.7%，與FMD 等其他病種相比，CSF 免疫抗體水平還有一定的提升空間。種豬場(chǎng)CSF 免疫抗體水平不高可能與保育豬免疫日齡過(guò)早，受到母源抗體干擾有關(guān)[6]。我國(guó)的CSF 兔化弱毒疫苗，對(duì)各種豬群均有高度的安全性和優(yōu)良的免疫原性，商品豬CSF免疫程序制定時(shí)要充分考慮母源抗體的干擾，可將CSF 首免日齡適當(dāng)推遲（如推遲到35～40 日齡，或根據(jù)商品豬母源抗體檢測(cè)結(jié)果來(lái)設(shè)定首免日齡），65～70 日齡二免（可用豬瘟-豬丹毒-豬肺疫三聯(lián)活疫苗代替），育肥豬可于140 日齡再補(bǔ)免1 次[6-7]。

3.3 PRRS

當(dāng)前，PRRS 仍然是影響我國(guó)生豬養(yǎng)殖的重要疫病之一，其流行范圍廣，污染面大，流行毒株復(fù)雜[8]。2018—2021 年，嘉定區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)PRRS 免疫抗體合格率達(dá)到95.6%，抗體水平整體較高。一般認(rèn)為弱毒疫苗免疫效果較好，但適用于感染豬場(chǎng)；滅活苗雖然安全性高，但免疫效果相對(duì)不佳。在PRRS 無(wú)凈化可能的條件下，建議陽(yáng)性場(chǎng)使用弱毒苗或與滅活苗聯(lián)合使用，陰性場(chǎng)則不建議使用弱毒苗。目前，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部批準(zhǔn)的高致病性PRRS 毒株多達(dá)4 種（包括JXA1-R、HuN4-F112、TJM-F92和GDr180），由17 個(gè)疫苗廠家生產(chǎn)，建議一個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)使用同一種毒株疫苗進(jìn)行免疫[6]。

3.4 PR

PR 病毒可以感染多種動(dòng)物（如狗、貓、牛、羊等），豬對(duì)其最為敏感。近年來(lái)規(guī)模豬場(chǎng)種豬調(diào)運(yùn)不規(guī)范和飼養(yǎng)密度過(guò)高等因素，導(dǎo)致PR 在豬群中持續(xù)流行傳播。PR 防控成效與凈化關(guān)系到規(guī)模豬場(chǎng)的生產(chǎn)效益和經(jīng)濟(jì)效應(yīng)[9]。從免疫抗體檢測(cè)結(jié)果看，嘉定區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)各生產(chǎn)階段豬群PR 免疫抗體水平良好，形成了良好的免疫屏障；從gE 感染抗體檢測(cè)結(jié)果分析，攜帶PR 病毒的高風(fēng)險(xiǎn)群體是生產(chǎn)母豬，因此PR 凈化工作需要從培育健康陰性后備豬群做起[10]。近年來(lái)，嘉定區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)按照《豬偽狂犬病凈化規(guī)程》（DB31/T 1050—2017），采取“檢測(cè)—淘汰陽(yáng)性豬只—培育陰性后備豬群”的凈化策略[11]，同時(shí)積極開(kāi)展引種檢疫、隔離和消毒等工作[12]，取得了明顯的凈化效果。

3.5 PED

2011 年左右，仔豬PED 疫情的流行，給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)乃至國(guó)民經(jīng)濟(jì)帶來(lái)了沉重打擊，曾經(jīng)一度扭轉(zhuǎn)豬價(jià)多年逐波下行的趨勢(shì)，造成豬價(jià)快速飆升。近年來(lái)，PED 疫情雖然得到了一定的控制，但局部流行或散發(fā)現(xiàn)象仍然時(shí)有發(fā)生。目前，來(lái)源正規(guī)的“豬傳染性胃腸炎（TGE）＋PED”二聯(lián)滅活疫苗、“TGE+PED”二聯(lián)活疫苗和“TGE+PED+豬輪狀病毒（RV）”三聯(lián)活疫苗對(duì)PED 的免疫效果均不夠理想，免疫抗體難以激發(fā)或保護(hù)性抗體持續(xù)時(shí)間不長(zhǎng)。針對(duì)該病的防控，除做好生物安全、飼養(yǎng)管理和持續(xù)監(jiān)測(cè)外，建立適合本場(chǎng)豬群特點(diǎn)的免疫程序十分重要。由于冬春季節(jié)是該病的高發(fā)期，必須在11 月之前建立起有效的免疫力，堅(jiān)持全群免疫，母豬在每年9—10 月普免2 次，從11 月到次年5 月，對(duì)所有懷孕母豬做好產(chǎn)前的跟胎免疫，這樣可達(dá)到有效防止產(chǎn)房仔豬發(fā)生PED 的目的[13]。

規(guī)模豬場(chǎng)除因地制宜地制定符合生產(chǎn)實(shí)際的個(gè)性化免疫程序外，健全防疫制度、嚴(yán)格生物安全管理、完善飼養(yǎng)管理、降低飼養(yǎng)密度、保障良好的豬群健康水平等綜合防控措施也是構(gòu)筑堅(jiān)實(shí)、牢固免疫保護(hù)屏障的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[14]。

3.6 樣品代表性與局限性

嘉定區(qū)現(xiàn)有2 個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)，存欄生豬約1.1 萬(wàn)頭。本研究對(duì)象為FMD、CSF 等5 種疫病的免疫群體，從2018—2021 年4 年的合計(jì)檢測(cè)量來(lái)看，采用估計(jì)流行率（免疫抗體合格率）的樣本量計(jì)算公式，樣本總量達(dá)到了代表性要求；本研究每年每場(chǎng)的檢測(cè)量為40～50 頭，依據(jù)發(fā)現(xiàn)疫?。庖卟缓细瘢┑臉颖玖坑?jì)算公式，檢測(cè)數(shù)量亦達(dá)到代表性要求。在FMD 和PR 感染抗體陽(yáng)性率方面，按照估計(jì)流行率的樣本量計(jì)算公式，嘉定區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)FMD 感染抗體陽(yáng)性率極低，每年每個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)的檢測(cè)數(shù)量均具有代表性，但PR 感染抗體的檢測(cè)數(shù)量達(dá)不到代表性要求[4]。主要原因：一是本研究監(jiān)測(cè)疫病種類多，檢測(cè)項(xiàng)目多，難以兼顧；二是在非洲豬瘟疫情防控的大背景下，入場(chǎng)采樣難度大，只能依靠各個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)送檢，具有一定的不可控性。今后需要繼續(xù)加大PR 感染抗體的監(jiān)測(cè)力度。