張振興，王 斌，朱麗華，曾 毅，宋建領(lǐng)

（1.云南省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院，云南省熱帶亞熱帶動物病毒病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南昆明 650224；2.威信縣動物疫病預(yù)防控制中心，云南威信 657900；3.玉龍縣龍?bào)脆l(xiāng)畜牧產(chǎn)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，云南玉龍 674100；4.水富市兩碗鎮(zhèn)人民政府，云南水富 657803）

豬瘟（classical swine fever，CSF）是由豬瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）引起的一種重要傳染病，被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列為須通報(bào)動物疫病。目前，CSF 發(fā)病以非典型癥狀為主，但可引起斷奶仔豬持續(xù)高溫，生長受阻甚至死亡。近幾年，CSF 流行復(fù)雜多變，給我國生豬養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大挑戰(zhàn)。豬繁殖與呼吸障礙綜合征（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS），又稱豬藍(lán)耳病，是由繁殖與呼吸障礙綜合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起的一種高度傳染性疾病，主要引起妊娠母豬頻發(fā)性流產(chǎn)，產(chǎn)死胎，哺乳仔豬發(fā)育遲緩，斷奶仔豬高死亡率。自1996 年我國首次分離出PRRSV[1]以來，國內(nèi)已有30 多個省（自治區(qū)、直轄市）流行或暴發(fā)該病，給我國生豬養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失[2]。偽狂犬?。╬seudorabies，PR）是由偽狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）引起的一種急性高度接觸性傳染病，主要引起種豬繁殖性障礙，新出生仔豬典型神經(jīng)癥狀或頑固性腹瀉以及高死亡率（90%以上），育肥豬呼吸道癥狀或者增重減慢[3]。2011 年P(guān)R 流行毒株又發(fā)生變異，其防控與凈化形勢變得更加嚴(yán)峻[4-5]。

疫苗免疫是常見的防控上述3 種豬病毒病的有效手段之一。而定期對養(yǎng)殖場豬群進(jìn)行免疫抗體水平檢測，可以有效評估豬場免疫效果。為了解云南省豬群這3 種病毒的總體抗體水平，2020 年針對免疫這3 種疫病疫苗的規(guī)模豬場采集血清進(jìn)行了抗體檢測，以期為豬場上述3 種疫病的潛在風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)控制以及疫苗選擇和免疫程序調(diào)整等提供參考。

1 材料和方法

1.1 血清采集

2020 年1—8 月，對云南省8 個州市CSF、PRRS、PR 疫苗免疫比較規(guī)范，生物安全措施執(zhí)行比較好的46 個有代表性豬場進(jìn)行采樣，每個豬場隨機(jī)采集15～30 份血液樣品（表1），其中公豬、妊娠母豬、保育豬、育肥豬、哺乳仔豬5 個生長階段各3～6 份，共采集934 份（表2）。血液樣品室溫放置4～6 h，待血液凝固后，放置在4 ℃冰箱2 h，分離血清置于-20 ℃冰箱保存待測。

表1 2020 年云南省不同市州豬場采集信息

表2 2020 年云南省不同州市不同階段豬群采集樣品數(shù)量分布 單位：份

1.2 檢測試劑盒與主要儀器

CSFV、PRRSV、PRV-gE、PRV-gB 抗體檢測試劑盒，均為美國IDEXX 公司產(chǎn)品；酶標(biāo)儀，型號HTX，美國伯騰儀器有限公司產(chǎn)品；離心機(jī)，型號X-15R，美國貝克曼庫爾特有限公司產(chǎn)品。

1.3 檢測與結(jié)果判定

按照CSFV、PRRSV、PRV-gE 和PRV-gB 病毒抗體檢測試劑盒說明書進(jìn)行操作?；静僮鬟^程如下：加入稀釋血清、陰性血清和陽性血清孵育→洗滌→加入酶標(biāo)抗體孵育→洗滌→加入底物孵育→加入終止液→OD 值測定與分析。3 種病毒抗體檢測結(jié)果按說明書標(biāo)準(zhǔn)判定（表3）。阻斷率=（陰性對照OD450-被檢樣品OD450）/陰性對照OD450×100%；S/P=（樣本OD650-陰性對照OD650平均值）/（陽性對照OD650平均值-陰性對照OD650平均值）；S/N=樣本OD650/陰性對照OD650平均值。樣品檢測結(jié)果運(yùn)用Excel 2013 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理與分析。

表3 不同病毒抗體檢測結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)

2 結(jié)果與分析

2.1 總體檢測情況

云南省8 個市州934 份血清樣品中，CSFV 抗體平均阻斷率為72.40%，抗體陽性率為86.51%，免疫水平較高；PRRSV 抗體平均S/P值為0.86，抗體陽性率為48.61%，未達(dá)到70%的最低標(biāo)準(zhǔn)，免疫水平較低；PRV-gI 抗體平均S/N值為0.87，抗體陽性率為3.97%，說明豬場存在一定的野毒感染；PRV-gB 抗體平均S/N值為0.23，抗體陽性率為79.11%，說明免疫效果不甚理想。具體結(jié)果見表4。

表4 3 種病毒性疾病病原血清抗體檢測結(jié)果

2.2 不同病原抗體檢測情況

2.2.1 CSFV 不同州市統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表5）顯示：云南省8 個州市均表現(xiàn)出較高的CSFV 抗體陽性率和平均阻斷率，陽性率為57.14%～100%，平均阻斷率為48.21%～89.66%。高于總體水平的州市有5個，分別為紅河、昆明、玉溪、曲靖、保山，其中紅河、昆明、玉溪抗體陽性率均達(dá)到100%；低于抗體總陽性率的州市有3 個，分別為文山、楚雄、德宏，其中德宏最低，抗體陽性率為57.14%，平均抗體阻斷率為48.21%。不同生長階段統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表6）顯示：各階段豬群的CSFV 抗體平均陽性率較為均衡，但公豬陽性率相對較高（92.05%），哺乳仔豬較低（80.56%）。結(jié)果表明，云南省豬場CSF 免疫效果總體較好，但文山、德宏、楚雄等州市應(yīng)加強(qiáng)CSF 疫苗免疫，提高豬群免疫抗體水平，尤其是哺乳仔豬。

表5 云南省不同地區(qū)豬群CSFV 抗體檢測結(jié)果

表6 云南省不同地區(qū)豬群各生長階段CSFV 抗體檢測結(jié)果 %

2.2.2 PRRSV 不同州市統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表7）顯示：云南省8 個州市PRRSV 平均抗體陽性率和平均抗體S/P值有較大差異，陽性率為21.43%～100%，平均抗體S/P值為0.26～1.90，除紅河州抗體陽性率為100%外，其他7 個州市的平均抗體陽性率均在70%以下。不同生長階段豬群的統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表8）顯示：各個階段的PRRSV 平均抗體陽性率為38.33%～56.19%，其中哺乳仔豬最低。結(jié)果表明，云南省豬場不同生長階段豬群的PRRS 免疫水平較低，尤其是哺乳仔豬。

表8 云南省不同地區(qū)豬群各生長階段PRRSV 抗體檢測結(jié)果 %

2.2.3 PRV-gB 不同州市統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表9）顯示：保山市豬群PRV-gB 抗體陽性率最高，為100%，S/N值為0.14；其次是曲靖、德宏和玉溪，平均陽性率為77.78%～87.71%；紅河陽性率最低，平均陽性率為43.33%。不同生長階段豬群的統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表10）顯示：各階段豬群的平均抗體陽性率變化不大，其中妊娠母豬最高（80.00%），哺乳仔豬陽性率最低（72.03%）。結(jié)果表明，云南省各市州豬場的PR 免疫抗體水平總體不高，需要加強(qiáng)疫苗免疫，特別是哺乳仔豬。

表9 云南不同地區(qū)豬群PRV-gB 抗體檢測結(jié)果

表10 云南省不同地區(qū)豬群各生長階段PRV-gB 抗體檢測結(jié)果 %

2.2.4 PRV-gI 不同州市統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表11）顯示：玉溪市和曲靖市存在一定比例的PRV-gI抗體陽性。其中：玉溪市PRV-gI 抗體陽性率為11.11%，平均抗體S/N值為0.78；曲靖市為10.70%，平均抗體S/N值為0.84。這2 個市州檢出的陽性樣品來源于除公豬外的其他各生長階段豬群（表12）。結(jié)果表明，除公豬外玉溪市和曲靖市的各生長階段豬群存在一定的PR 野毒感染。

表11 云南不同地區(qū)豬群PRV-gI 抗體檢測結(jié)果

表12 云南省曲靖、玉溪各生長階段豬群PRV-gI 抗體檢測結(jié)果 %

3 討論

CSF 免疫是豬場主要的基礎(chǔ)免疫之一，其免疫效果直接影響整個豬群的健康狀況[6]。王世玉等[7]對云南省部分地區(qū)豬群CSF 血清抗體檢測發(fā)現(xiàn)，各地CSFV 抗體陽性率都在92%以上，多數(shù)地方抗體陽性率達(dá)到100%，各地區(qū)CSFV 抗體水平整齊度較高，免疫效果較好。本次調(diào)查云南省8 個州市的檢測結(jié)果與其有較大差異，可能與王世玉等只調(diào)查了紅河州、楚雄州部分地區(qū)，部分生長階段豬（哺乳仔豬、保育豬和育肥豬）血清樣本采集比例偏多有關(guān)。另外，也可能與非洲豬瘟疫情發(fā)生后，部分豬場減少了CSF 疫苗免疫頻率相關(guān)?？傮wCSFV 抗體陽性率為86.51%，雖然總體達(dá)到國家免疫方案中CSFV 抗體合格率≥70%的標(biāo)準(zhǔn)，但是個別州市CSFV 抗體陽性率偏低，如德宏為57.14%，楚雄為62.26%。特別是楚雄，從之前王世玉等[7]調(diào)查的CSFV 抗體陽性率99.63%降到62.26%，降幅達(dá)到37.37%。當(dāng)然也不排除2020 年豬價(jià)上漲導(dǎo)致散養(yǎng)戶和養(yǎng)殖專業(yè)戶急劇增加，沒有科學(xué)合理進(jìn)行規(guī)范化養(yǎng)殖等因素的影響。建議針對自身情況，查找具體原因，繼續(xù)加大CSF 免疫防控力度。

PRRS 自被發(fā)現(xiàn)以來在云南省廣泛流行，其易造成機(jī)體的免疫抑制，且對母豬繁殖和仔豬呼吸道危害較大。王釗哲等[2]發(fā)現(xiàn)，云南省的PRRS 流行時間主要集中在6—8 月，根據(jù)2010—2014 年P(guān)RRS 發(fā)病率調(diào)查結(jié)果，PRRSV 血清抗體陽性率2010—2013 年逐年遞減，2014 年有升高趨勢，說明云南省因經(jīng)緯度跨度較大，不同時間和不同地區(qū)的PRRS 發(fā)病率、血清抗體陽性率均不相同。目前，我國各省份均對當(dāng)?shù)刎i場PRRS 進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，為該病防控提供了一定依據(jù)。蔡丙嚴(yán)等[8]對2016—2018 年江蘇省規(guī)模豬場PRRS 進(jìn)行血清學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，PRRSV 血清抗體陽性率呈現(xiàn)逐年下降趨勢，從76.41%下降至57.72%。王艷芬等[9]對云南省紅河州蒙自市PRRSV 免疫抗體監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，2017—2019 年P(guān)RRSV 血清抗體陽性率從73.13%下降至65.66%。譚丹等[10]對湖南省長沙市部分豬場PRRS 免疫效果監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，2018—2020 年長沙市PRRSV 抗體免疫水平由85.0%下降至54.5%，呈現(xiàn)逐年下降趨勢。2020 年本實(shí)驗(yàn)室在云南省PRRSV 血清抗體調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，PRRSV 抗體陽性率為48.61%。這可能與PRRS 退出強(qiáng)制免疫以及增強(qiáng)生物安全防控意識相關(guān)，尤其2018 年8 月我國發(fā)生非洲豬瘟以來，養(yǎng)豬場普遍加大了生物安全措施的執(zhí)行力度，為了降低豬群應(yīng)激和交叉污染概率，減少了部分疫苗免疫頻次。建議生物安全措施比較完善的豬場，加大生物安全措施執(zhí)行力度；生物安全措施存在薄弱環(huán)節(jié)的豬場，在完善生物安全措施的同時，還應(yīng)加強(qiáng)PRRS 疫苗免疫。

PRV-gB 血清抗體陽性率為43.33%～100%，大部分地區(qū)達(dá)到了國家免疫方案中規(guī)定的免疫抗體合格率≥70%的標(biāo)準(zhǔn)，S/N值為0.14～0.54。早期使用PRV 基因缺失疫苗，使該病在我國得到了有效控制[11]，但是2011 年以后我國很多免疫豬場又暴發(fā)PR[12]。檢測場均使用PRV 基因缺失疫苗免疫，因此檢測到PRV-gI 抗體即可確診為存在PRV 野毒感染[13]。2020 年P(guān)RV-gI 血清抗體監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，曲靖陽性率為10.70%，S/N值為0.84，玉溪陽性率為11.11%，S/N值為0.78，說明這些州市仍存在PRV野毒感染豬場。因此，現(xiàn)階段除了需要提高生物安全等防控意識之外，還需要通過血清學(xué)、病原學(xué)等檢測方法，定期監(jiān)測PRV 野毒感染狀態(tài)，根據(jù)實(shí)際情況合理制定免疫措施，及時淘汰感染豬，避免因受其他免疫抑制疾病影響，臨床帶毒豬群恢復(fù)排毒及出現(xiàn)臨床發(fā)病癥狀，使豬場疫病控制更加艱難化、復(fù)雜化[5，14]。

本研究雖然對云南省2020 年部分豬場CSFV、PRRSV、PR 抗體檢測陽性率進(jìn)行了分析統(tǒng)計(jì)，但是也存在一定的局限性：一是本次抗體檢測抽檢時間在2020 年1—8 月，未能統(tǒng)計(jì)全年12個月3 種病毒的抗體陽性率；二是部分豬場的血清樣品未能達(dá)到相應(yīng)的抽檢比例；三是各州市所含縣市區(qū)未能做到全覆蓋。下一步將進(jìn)一步優(yōu)化抽檢策略，擴(kuò)大抽檢范圍，使得檢測數(shù)據(jù)更具有針對性和代表性。

4 結(jié)論

云南省CSF 免疫水平總體達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)，但是個別州市免疫水平不高，應(yīng)加強(qiáng)免疫防護(hù)；不同生長階段豬群的PRRS 免疫水平均較低，需要按程序進(jìn)行免疫；部分地區(qū)多個生長階段豬群存在一定的PRV 野毒感染，且免疫抗體水平總體不高，需要加強(qiáng)免疫和綜合防控。