陳佳婧 張明海 陳泉 楊義 任杰群 譚立新 鄭章云

(1. 重慶三峽農(nóng)業(yè)科學(xué)院， 重慶 404155；2. 重慶三峽學(xué)院， 重慶 404020)

桑果又名桑椹，其含有大量的花青素苷、蕓香苷等抗氧化活性物質(zhì)和豐富的氨基酸、維生素、礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)成分，有提高人體免疫力、消除疲勞和延緩衰老等功效，被醫(yī)學(xué)界譽(yù)為“21世紀(jì)最佳保健果品”[1]。因此，新鮮桑椹及其加工產(chǎn)品一上市就受到人們青睞，助推果桑產(chǎn)業(yè)得到快速發(fā)展。目前全國(guó)果桑栽培面積近5.33萬(wàn)hm2，桑椹年產(chǎn)量達(dá)79萬(wàn)t左右[2]?？焖侔l(fā)展的果桑產(chǎn)業(yè)面臨最大的問(wèn)題是桑椹菌核病的危害，在我國(guó)南方多濕環(huán)境條件下尤為嚴(yán)重,田間發(fā)病率高達(dá)30%～90%[1],成為阻礙果桑產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要因素之一。生產(chǎn)上用于桑椹菌核病防治的藥物以苯并米唑類(lèi)殺菌劑為主，不僅農(nóng)藥殘留易超過(guò)食品安全國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn)，并且長(zhǎng)期使用苯并米唑類(lèi)殺劑會(huì)導(dǎo)致病原菌抗性逐漸增強(qiáng)而使防效降低的情況。蒯元璋等[3]根據(jù)病原種類(lèi)、侵染循環(huán)、發(fā)病規(guī)律的研究報(bào)道，認(rèn)為可將桑椹菌核病分為桑椹肥大性菌核病、桑椹縮小性菌核病、桑椹小粒性菌核病3種類(lèi)型；鄭章云等[4]開(kāi)展了果桑品種抗性鑒定，篩選出抗性較強(qiáng)的品種以供果桑生產(chǎn)應(yīng)用；呂蕊花等[5]采用草甘膦、梁楊等[6]利用中草藥防治桑椹菌核病已取得了初步的效果；朱引根等[7]、鄭章云等[8]利用化學(xué)農(nóng)藥防治桑椹菌核病均達(dá)到了預(yù)期的防效。用于防治桑椹菌核病的化學(xué)農(nóng)藥主要以甲基硫菌靈、多菌靈、苯醚甲環(huán)唑等為主，這些藥劑也是被生產(chǎn)實(shí)踐證明其對(duì)桑椹菌核病的防治效果顯著；而利用生物制劑防治桑椹菌核病則是業(yè)界倡導(dǎo)的一種綠色防控新途徑。我們從2016年起開(kāi)展了利用生物制劑防治桑椹菌核病的藥劑篩選試驗(yàn)，篩選出的1種木霉菌生物制劑對(duì)桑椹菌核病具有一定防效，但與化學(xué)藥劑對(duì)桑椹菌核病的防效比較，還存在較大的差距。為了促進(jìn)木霉菌在桑椹菌核病防治中的應(yīng)用，我們對(duì)果桑生產(chǎn)中木霉菌的使用方案做了進(jìn)一步研究，通過(guò)將木霉菌與常規(guī)化學(xué)藥劑甲基硫菌靈交替使用，期望提高木霉菌的應(yīng)用效率并降低化學(xué)藥劑防治造成的桑椹農(nóng)藥殘留量，為高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、安全的果桑生產(chǎn)提供實(shí)用技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地及供試桑品種

試驗(yàn)地設(shè)在重慶三峽農(nóng)業(yè)科學(xué)院果桑示范園內(nèi)，園區(qū)以桑椹肥大性菌核病發(fā)生為主。供試果桑品種為無(wú)核大10，樹(shù)齡15年，種植的株行距為100 cm×167 cm。試驗(yàn)在同一地塊進(jìn)行，地形長(zhǎng)方形，地勢(shì)平坦，沙壤土，pH值為6.60。土壤詳細(xì)的養(yǎng)分情況為有機(jī)質(zhì)10.15 g/kg，堿解氮62.78 mg/kg，有效磷128.20 mg/kg，有效鉀79.64 mg/kg。2018年果桑植株的初花期是3月12日，盛花期3月20日，謝花期3月27日；桑椹始熟期4月12日，盛熟期4月23日。

1.2 供試藥劑

供試藥劑有3種，山東泰諾藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的泰諾(TENOV)木霉菌(2×108CFU/g)可濕性粉劑(WP)，網(wǎng)購(gòu)；江陰市農(nóng)藥二廠有限公司生產(chǎn)的50%多菌靈可濕性粉劑(WP)和70%甲基硫菌靈可濕性粉劑(WP)，市購(gòu)。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)共設(shè)5個(gè)處理組(表1)，分別在桑椹的初花期、盛花期、謝花期開(kāi)展桑椹菌核病的藥劑防治。每15棵植株為一個(gè)處理，采用隨機(jī)區(qū)組排列，3次重復(fù)，四周設(shè)保護(hù)行。配制的藥液采用背負(fù)式電動(dòng)噴霧器對(duì)樹(shù)內(nèi)、樹(shù)冠均勻噴霧，以滴水為度，噴藥時(shí)間掌握在上午露水稍干后噴施，不再使用其他藥劑。每個(gè)處理組定點(diǎn)調(diào)查3棵植株，分別調(diào)查受害的葉片、果實(shí)，成熟桑果粒數(shù)、病果粒數(shù)，在桑果始熟期抽樣檢測(cè)多菌靈農(nóng)藥的殘留量。

表1 藥物防治桑椹菌核病的試驗(yàn)處理組設(shè)計(jì)

1.4 調(diào)查方法

施藥后第2天調(diào)查受害的葉片和果實(shí)，每3 d調(diào)查1次。桑椹出現(xiàn)病果和成熟果時(shí),開(kāi)始分別采摘病果和成熟果，可采摘量少就隔天采摘，量多則每天采摘。分別統(tǒng)計(jì)單株病果粒數(shù)、成熟桑果粒數(shù)，計(jì)算全株桑果粒數(shù)、單株病果率和校正防效。計(jì)算公式為:全株桑果粒數(shù)=病果粒數(shù)+ 成熟果粒數(shù)；病果率(%)=全株病果粒數(shù)/全株桑果粒數(shù)×100；校正防效(EC)(%)=(CK-PT)/CK×100，其中，PT為處理區(qū)病果率，CK為對(duì)照區(qū)病果率。在桑椹始熟期依據(jù)“蔬菜水果中多菌靈等4種苯并咪唑類(lèi)農(nóng)藥殘留量的測(cè)定”(NY/T 1680-2009)標(biāo)準(zhǔn)，采用高效液相色譜法對(duì)桑椹樣品中的多菌靈農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測(cè)。甲基硫菌靈和多菌靈在結(jié)構(gòu)上同屬苯并咪唑類(lèi)殺菌劑，前者在植物體內(nèi)或在植物近旁經(jīng)代謝活化成為甲基苯并咪唑-2-氨基甲酸酯，即多菌靈。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

利用 Microsoft Excel 2007和SSPS17.0 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理與分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同用藥處理組桑椹菌核病的發(fā)生率

表2的數(shù)據(jù)顯示，發(fā)病率最高的是清水對(duì)照E處理組，發(fā)病率為84.74%；其次是3次均噴施泰諾木霉菌的A處理組，發(fā)病率為16.99%；初花期和謝花期2次噴施木霉菌、盛花期噴施甲基硫菌靈的B處理組，發(fā)病率為0.43%；在謝花期1次噴施木霉菌、初花期和盛花期分別噴施多菌靈和甲基硫菌靈的C處理組，發(fā)病率為0.35%；發(fā)病率最低的是初花期、盛花期、謝花期分別噴施甲基硫菌靈、多菌靈和甲基硫菌靈的D處理組，發(fā)病率為0.21%。從試驗(yàn)結(jié)果可以得出不同用藥處理組的桑椹發(fā)病率存在差異，其中：清水對(duì)照E處理組與A、B、C、D處理組的發(fā)病率存在顯著差異；A、B、C、D 4個(gè)藥劑使用處理組隨著木霉菌使用的次數(shù)增加，發(fā)病率呈現(xiàn)逐漸上升趨勢(shì)，A處理與B、C、D處理發(fā)病率存在顯著差異，B、C、D處理間發(fā)病率有差異但不顯著。

表2 不同用藥處理組桑椹菌核病的發(fā)生情況調(diào)查

2.2 不同用藥處理對(duì)桑椹菌核病的防治效果

A、B、C、D處理對(duì)桑椹菌核病均有較好的防治效果(表3)。其中防效最好的是初花期70%甲基硫菌靈1 000倍液、盛花期50%多菌靈600倍液、謝花期70%甲基硫菌靈1 000倍液的D處理，防效為99.75%；其次是初花期50%多菌靈600倍液、盛花期70%甲基硫菌靈1 000倍液、謝花期木霉菌300倍液的C處理，防效為99.60%；初花期和謝花期施用300倍液的木霉菌、盛花期70%甲基硫菌靈800倍液的B處理，防效為99.49%；防效最低的是3次施藥用泰諾木霉菌300倍液的A處理，防效為79.87%。B處理、C處理、D處理防效有差異但不顯著；A處理與B、C、D處理的防效存在顯著差異。

2.3 不同用藥處理對(duì)桑椹農(nóng)藥殘留的影響

桑椹始熟期采摘成熟桑椹進(jìn)行多菌靈農(nóng)藥殘留檢測(cè)(表3)，檢測(cè)結(jié)果多菌靈殘留含量最高的是初花期、盛花期、謝花期分別噴施甲基硫菌靈、多菌靈和甲基硫菌靈的D處理，多菌靈殘留量為2.88 mg/kg；其次是謝花期1次噴施木霉菌、初花期和盛花期分別噴施多菌靈和甲基硫菌靈的C處理，多菌靈殘留量為1.56 mg/kg；初花期和謝花期2次噴施木霉菌、盛花期噴施甲基硫菌靈的B處理，多菌靈殘留量為0.31 mg/kg；3次噴施泰諾木霉菌300倍液的A處理和清水對(duì)照的E處理，無(wú)多菌靈農(nóng)藥殘留。

表3 不同用藥處理組的對(duì)桑椹菌核病防治效果 及桑椹中多菌靈的殘留量

2.4 不同用藥處理對(duì)桑椹和桑葉的藥害

分別調(diào)查各處理對(duì)桑葉和桑椹的藥害，發(fā)現(xiàn)本試驗(yàn)設(shè)計(jì)各用藥處理組桑樹(shù)葉片的葉形和葉色與對(duì)照組相比均無(wú)明顯異常，也無(wú)明顯癥狀；桑椹的果形、生長(zhǎng)狀態(tài)、著色、成熟度與對(duì)照組亦無(wú)明顯差異。說(shuō)明這幾種藥劑在設(shè)計(jì)的使用濃度范圍內(nèi)，無(wú)論是單獨(dú)使用還是交替使用對(duì)果桑的葉和果均沒(méi)有藥害。

3 討論

利用生物制劑替代化學(xué)農(nóng)藥進(jìn)行植物病害防治是廣為倡導(dǎo)的趨勢(shì)。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外有關(guān)利用生物制劑防治植物病害的報(bào)道較多[9-10]，但大多還處于實(shí)驗(yàn)室和小面積田間試驗(yàn)階段，其主要原因是應(yīng)用生物制劑防治在大面積生產(chǎn)中的防效不理想且不穩(wěn)定。本試驗(yàn)以桑椹菌核病為防治對(duì)象，開(kāi)展田間生防試驗(yàn)，在不影響木霉菌拮抗活力前提下，改單一使用木霉菌為與化學(xué)藥劑交替使用防治桑椹菌核病，提高了木霉菌應(yīng)用于病害防治的使用效率，對(duì)大面積果桑生產(chǎn)中采用生物防治桑椹菌核病具有指導(dǎo)意義。

本次試驗(yàn)共設(shè)計(jì)5個(gè)處理組，不同處理組的桑椹發(fā)病率存在差異，發(fā)病率最高的是清水對(duì)照E處理，發(fā)病率為84.74%，發(fā)病率最低的是D處理其桑椹發(fā)病率僅有0.21%，發(fā)病率從高到低的處理組依次是：E處理、A處理、B處理、C處理、D處理。在重慶等氣候條件多濕的區(qū)域，桑椹菌核病對(duì)果桑大10等部分易感品種[4]具有毀滅性影響，通過(guò)本試驗(yàn)結(jié)果表明：采用生物制劑和化學(xué)農(nóng)藥交替防治是對(duì)桑椹菌核病防控可行且有效的措施。

本試驗(yàn)選用的生物制劑是山東泰諾藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的泰諾木霉菌可濕性粉劑(灰霉)，其菌落形成總數(shù)為2×108CFU/g。A處理組在桑樹(shù)初花期、盛花期、謝花期噴施泰諾木霉菌300倍液的防治效果為79.87%，與筆者在2016—2017年2年的生物制劑田間藥劑篩選試驗(yàn)獲得的防治桑椹菌核病的效果一致[11]，說(shuō)明用該生物制劑防治桑椹菌核病的效果穩(wěn)定。從試驗(yàn)結(jié)果可以看出A、B、C、D處理對(duì)桑椹菌核病均有較好的防治效果，其中：防治效果最好的是供試D處理，防效為99.75%；防效最低的是的供試A處理，防效為79.87%。D處理是采用常規(guī)化學(xué)藥劑防治[1-2,6]，B、C處理在不同發(fā)育階段的3次防治中分別用了2次和1次木霉菌，A處理是3次采用木霉菌防治。B、C、D處理對(duì)桑椹菌核病防治效果沒(méi)有明顯差異，但與A處理有顯著差異，說(shuō)明改變木霉菌應(yīng)用方案，采用木霉菌與甲基硫菌靈等化學(xué)藥劑交替使用即可明顯提高對(duì)桑椹菌核病的防治效果。

本試驗(yàn)采用的化學(xué)藥劑是甲基硫菌靈與多菌靈，二者同屬苯并米唑類(lèi)殺菌劑，甲基托布津經(jīng)植物吸收后通過(guò)一系列生化反應(yīng)轉(zhuǎn)化成多菌靈再發(fā)揮殺菌作用[12]，因此本試驗(yàn)只對(duì)多菌靈農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測(cè)。在桑椹停止用藥間隔16 d后的始熟期(4月12日)，采摘成熟桑椹進(jìn)行桑椹多菌靈農(nóng)藥殘留檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果多菌靈含量最高的是常規(guī)化學(xué)藥劑防治的D處理組樣品，多菌靈殘留量為2.88 mg/kg；其次是C處理和B處理的樣品，多菌靈殘留量分別為1.56 mg/kg和0.31 mg/kg；清水對(duì)照A處理的桑椹樣品中未檢測(cè)到多菌靈農(nóng)藥的殘留。A、B、C、D處理組桑椹樣品中的多菌靈殘留從高到低依次是D處理、C處理、B處理、A處理。在桑椹菌核病防治過(guò)程中，D處理使用苯并米唑類(lèi)殺菌劑的次數(shù)為3次、C處理使用了2次、B處理僅使用了1次，A處理則不施用苯并米唑類(lèi)殺菌劑； D、C處理最后1次施用苯并米唑類(lèi)殺菌劑與農(nóng)藥殘留檢測(cè)時(shí)間間隔分別為16 d和23 d。試驗(yàn)結(jié)果表明：桑椹中多菌靈農(nóng)藥的殘留量隨著化學(xué)農(nóng)藥使用的次數(shù)的增加而增加，隨著木霉菌使用次數(shù)增加而降低；農(nóng)藥殘留量隨著間隔時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸降低。因此，利用生物制劑木霉菌防治桑椹菌核病是降低桑椹食品中農(nóng)藥殘留的有效手段。

4 結(jié)論

對(duì)桑椹菌核病的防治效果試驗(yàn)中，B處理的防效為99.47%，與C、D處理沒(méi)有明顯差異，比單一使用木霉菌防治桑椹菌核病的A處理提高防效24.56%。食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：聚復(fù)果類(lèi)草莓[13]等食品中多菌靈最大殘留限量為0.5 mg/kg (GB2763-2016)，B處理組生產(chǎn)的桑椹多菌靈殘留為0.31 mg/kg，符合食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。因此，生產(chǎn)中建議采用B處理設(shè)計(jì)方案防治桑椹菌核病，即在桑椹初花期噴施TENOV木霉菌300倍液、盛花期噴施70%甲基硫菌靈1 000倍液、謝花期噴施TENOV木霉菌 300倍液，從而實(shí)現(xiàn)果桑生產(chǎn)的安全、優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)。