顧曉風(fēng)，金偉斌，楊 袁

（江蘇省蘇州市藥品檢驗(yàn)檢測研究中心，江蘇 蘇州 215104）

微晶纖維素（MCC）由含纖維素植物的纖維漿制得，作為常用藥用輔料，具有賦形黏合、吸水膨脹等作用，在藥劑中主要用作直接壓片的黏合劑、崩解劑和填充劑，能改善流動(dòng)性及提高藥物的穩(wěn)定性［1-3］。微晶纖維素的生產(chǎn)工藝路線通常以甘蔗渣、玉米芯、稻草秸稈等為原材料，先采用稀酸部分水解，然后進(jìn)行洗滌、干燥、粉碎，得到白色或類白色粉末或顆粒狀粉末［4-5］。其制備過程中所用稀酸主要為鹽酸，也有部分工藝采用硫酸進(jìn)行水解，或在水解前利用氫氧化鈉、硫酸鈉、過氧化氫進(jìn)行預(yù)處理，故產(chǎn)品中可能會(huì)殘留氯離子和硫酸根離子。2020年版《中國藥典（四部）》采用比濁法評(píng)價(jià)氯離子的殘留控制水平，但對(duì)硫酸根離子的殘留未作控制［6］，且比濁法無法使氯離子和硫酸根離子的殘留量化，不便用于評(píng)價(jià)工藝控制水平。離子色譜法可利用被測物質(zhì)的離子性進(jìn)行分離和檢測，操作簡單、快速靈敏、分離能力強(qiáng)，廣泛用于藥物制劑、原料藥和藥用輔料中陰離子、陽離子、糖類物質(zhì)的定量分析［7-13］。本研究中參考文獻(xiàn)［14-16］，建立了同時(shí)測定藥用輔料微晶纖維素中氯離子和硫酸根離子含量的離子色譜法?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

DIONEX ICS-5000+型離子色譜儀（美國Thermo Fisher Scientific公司），配有EG-5型淋洗液自動(dòng)發(fā)生器、AERS 500（4 mm）陰離子抑制器、DC-5型電導(dǎo)檢測器和AS-AP型自動(dòng)進(jìn)樣器、Chromeleon色譜工作站；XS205DU型電子天平（瑞士Mettler Toledo公司，精度為0.01 mg）；Milli-Q型超純水儀（密理博＜中國＞有限公司）。

1.2 試藥

水中氯離子標(biāo)準(zhǔn)溶液（批號(hào)為18031）、水中硫酸根離子標(biāo)準(zhǔn)溶液（批號(hào)為20103），均購自中國計(jì)量科學(xué)研究院，質(zhì)量濃度均為1 000μg/mL；微晶纖維素樣品15批（廠家A，批號(hào)分別為HZ2002038，P219833529，M020067-2101001，M020067-2009004，M020067-2004003，M020067-2003002；廠家B，批號(hào)為1000002179；廠家C，批號(hào)分別為66101203822，66101704032，56102202217；廠家D，批號(hào)為21010006；廠家E，批號(hào)分別為AB012-2/2，AB155-2/2；廠家F，批號(hào) 分別 為20210119，20210110；樣品編號(hào)分別為1～15，除廠家F所產(chǎn)樣品為食品級(jí)外，其余樣品均為藥用輔料級(jí)）；氫氧化鉀為優(yōu)級(jí)純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Dionex IonPac AS19柱（250 mm×4 mm，5μm），IonPac AG19 Guard柱（50 mm×4 mm，5μm）；流動(dòng)相：氫氧化鉀（KOH），梯度洗脫（0～29 min時(shí)10 mmol/L，30～31 min時(shí)40 mmol/L，32～35 min時(shí)10 mmol/L）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：25μL。采用抑制電導(dǎo)檢測，電導(dǎo)檢測器溫度為30℃。

2.2 溶液制備

精密量取水中氯離子標(biāo)準(zhǔn)溶液和水中硫酸根離子標(biāo)準(zhǔn)溶液，加水稀釋成質(zhì)量濃度各為1.0μg/mL的混合對(duì)照品溶液。取樣品0.16 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加水30 mL，振搖10 min，加水定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。以水作為空白對(duì)照溶液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：精密量取2.2項(xiàng)下3種溶液各25μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相同保留時(shí)間處有相應(yīng)色譜峰，氯離子峰和硫酸根離子峰理論板數(shù)均大于10 000，分離度大于1.5，且陰性對(duì)照無干擾。色譜圖見圖1。

圖1 離子色譜圖1.Chloride ion 2.Sulfate ion A.Mixed reference solution B.Test solution C.Blank control solutionFig 1 Ion chromatograms

線性關(guān)系考察：精密量取水中氯離子標(biāo)準(zhǔn)溶液和水中硫酸根離子標(biāo)準(zhǔn)溶液各適量，加水制成氯離子質(zhì)量濃度分別為0.02，0.05，0.10，0.50，1.00，1.50μg/mL，硫酸根離子質(zhì)量濃度分別為0.1，0.2，0.5，0.8，1.0，1.5μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積，以相應(yīng)離子質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果見表1。

表1 線性關(guān)系考察結(jié)果及檢測限與定量限Tab.1 Results of the linear relation test，L O Ds and LOQs

定量限與檢測限確定：取2.2項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，倍比稀釋，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。以信噪比為10∶1和3∶1時(shí)的質(zhì)量濃度分別作為定量限和檢測限。結(jié)果見表1。

精密度試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定6次，記錄峰面積。結(jié)果氯離子和硫酸根離子峰面積的R SD分別為0.82%和1.05%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下供試品溶液，室溫下分別于0，6，12，18，24 h時(shí)按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積，結(jié)果氯離子和硫酸根離子峰面積的R S D分別為0.82%和2.16%（n=5），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批（編號(hào)1）樣品6份，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計(jì)算離子濃度。結(jié)果氯離子和硫酸根離子濃度的RSD分別為1.13%和2.09%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取樣品（編號(hào)1）0.16 g，精密稱定，置100 mL容量瓶中，平行制備9份，分別精密加入一定質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液0.6，1.0，1.4 mL，加水60 mL，振搖10 min，加水定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液進(jìn)樣測定，以外標(biāo)法計(jì)算氯離子和硫酸根離子的含量，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表2。

表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）Tab.2 Results of the recovery test（n=9）

2.4 樣品含量測定

取15批樣品，按2.2項(xiàng)下方法平行制備2份供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算氯離子和硫酸根離子的含量。結(jié)果見表3。

表3 15批樣品的含量測定結(jié)果（%，n=2）Tab.3 Results of content determination of chloride ion and sul?fate ion in 15 batches of samples（%，n=2）

3 討論

本研究預(yù)試驗(yàn)中考察了KOH淋洗液等度洗脫和梯度洗脫2種方式，以10 mmol/L KOH等度洗脫時(shí)，硫酸根離子無法較好洗脫，故選用梯度洗脫，并進(jìn)一步考察其可用最高濃度。最高濃度為50 mmol/L時(shí)，硫酸根離子不能與空白溶液中的雜峰完全分離；最高濃度為30 mmol/L時(shí)，保留時(shí)間大于30 min，峰形拖尾較嚴(yán)重。故選擇KOH淋洗的最高濃度為40 mmol/L，硫酸根離子與相鄰雜峰能達(dá)到基線分離。微晶纖維素在水中幾乎不溶，故以水作為溶劑，可簡單、有效地將氯離子和硫酸根離子提取出來。經(jīng)考察，振搖10 min，6個(gè)廠家的微晶纖維素樣品均可均勻分散于溶劑中，濾過后即可得到樣品溶液。

2020年版《中國藥典》中微晶纖維素的氯離子標(biāo)準(zhǔn)限度為不超過0.03%，本研究中測得15批樣品的含量在0.002 6%～0.006 8%之間，中位值為0.003 5%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.001 5，說明氯離子殘留水平整體較低，15批樣品均未超出限度。2020年版《中國藥典》對(duì)硫酸根離子未作控制，而15批樣品中均測得硫酸根離子，含量在0.003 3%～0.011 0%之間，中位值為0.006 1%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.002 1，參考氯離子限度，硫酸根離子殘留水平同樣較低。樣品14和樣品15為食品級(jí)，其氯離子和硫酸根離子含量與藥用輔料級(jí)無明顯差異。

藥用輔料是制劑的重要組成部分，同藥物活性成分一樣參與體內(nèi)的吸收、分布、代謝、排泄過程，故藥用輔料的安全性直接影響藥物制劑的安全性［17］。隨著臨床由輔料引起不良反應(yīng)的報(bào)道日益增多［18］，輔料的安全性也越來越受到重視。2010年版《中國藥典》從定義上特別強(qiáng)調(diào)了對(duì)藥用輔料的安全性評(píng)估，采用新的分析技術(shù)，控制輔料的安全性指標(biāo)，已成為藥品研究的重要方向［19］?！吨袊幍洹肥蛰d的標(biāo)準(zhǔn)是藥用輔料生產(chǎn)、選用、審評(píng)審批及監(jiān)管的重要依據(jù)，更新完善藥用輔料的標(biāo)準(zhǔn)體系，深入研究更多的新輔料標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)于我國的藥品發(fā)展有重要意義。

綜上所述，本研究中建立的離子色譜法操作簡單，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于同時(shí)檢測微晶纖維素中氯離子和硫酸根離子的含量，可為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高和產(chǎn)品安全性的控制提供參考。