王 歡 ，龔乾龍，唐春華 ，吳 杰，譚思敏，鄧治邦 *

(1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，湖南 長沙 410128;2.長沙市望城區(qū)高塘嶺街道農(nóng)業(yè)農(nóng)村綜合服務(wù)中心，湖南 長沙 410200;3.長沙市望城區(qū)農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法大隊(duì)，湖南 長沙 410200；4.長沙市農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法局，湖南 長沙 410013)

豬圓環(huán)病毒（PCV2）作為世界上最小的動(dòng)物病毒之一，其與PMWS（斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合癥）、PDNS（豬皮炎腎病綜合征）、PNP（豬增生性壞死性肺炎）、CT（新生仔豬先天性震顫）、繁殖障礙等疾病的發(fā)生密切相關(guān)[1]，嚴(yán)重影響了全球生豬產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。該病毒不但可以通過呼吸道、消化道以及相互接觸等進(jìn)行水平傳播，還可以通過胎盤、精液、生殖道等進(jìn)行垂直傳播[2]，母豬感染多引起繁殖障礙，仔豬感染則出現(xiàn)圓環(huán)病毒病，對(duì)其生長造成極大的影響。本試驗(yàn)旨在以小鼠為模型來探討PCV2對(duì)雌鼠產(chǎn)仔及仔鼠生長狀況的影響，為研究PCV2相關(guān)性繁殖障礙奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

豬圓環(huán)病毒（PCV2，TCID50=106/mL），由湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)病原分子生物學(xué)與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室贈(zèng)送；SPF級(jí)的昆明小鼠(6 周齡)公鼠6只、母鼠18只，購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。

1.2 方法

動(dòng)物病毒接種，將購買回來的SPF 級(jí)昆明小鼠先飼養(yǎng)1 周，使其適應(yīng)該環(huán)境，盡量降低應(yīng)激反應(yīng)。取4只公鼠、12只母鼠進(jìn)行腹腔接種PCV2 0.2 mL作為試驗(yàn)組，另取2只公鼠、6只母鼠腹腔接種無菌細(xì)胞培養(yǎng)液0.2 mL 作為對(duì)照組。其中公鼠和母鼠均分籠飼養(yǎng)，且試驗(yàn)組和對(duì)照組分別飼養(yǎng)在環(huán)境條件相似的不同房間內(nèi)，由不同的人員進(jìn)行飼養(yǎng)。待接種病毒10天后(10dpi)，尾靜脈采血做PCR 檢測(cè)，試驗(yàn)組和對(duì)照組均按照1:3 的公、母鼠配比進(jìn)行合籠飼養(yǎng)，并記下合籠時(shí)間。

待母鼠即將生產(chǎn)或者生產(chǎn)之后將每只母鼠及其所產(chǎn)仔鼠與其他母鼠分開，并單獨(dú)飼養(yǎng)，記錄窩產(chǎn)仔數(shù)、死胎數(shù)、弱仔數(shù)（個(gè)體小、毛色差、吮乳需人工輔助）、斷奶數(shù)，并分別測(cè)定試驗(yàn)組和對(duì)照組仔鼠的初生重、7日齡重、14日齡重以及21日齡重（即斷奶重），統(tǒng)計(jì)成活率及平均日增重。在稱完21日齡重之后，每窩隨機(jī)處死仔鼠3只，取脾、肺、淋巴結(jié)做PCR 檢測(cè)，確定PCV2 的存在。

母鼠所產(chǎn)仔數(shù)及仔鼠平均日增重，應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析試驗(yàn)組與對(duì)照組的顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 PCV2 檢測(cè)結(jié)果

16只繁殖小鼠（公 4只、母 12只）在接種病毒后10天，尾靜脈血PCR 檢測(cè)結(jié)果均為PCV2 陽性，而對(duì)照組繁殖鼠為陰性。

2.2 產(chǎn)仔數(shù)及健康狀況

在每只母鼠產(chǎn)仔的當(dāng)天統(tǒng)計(jì)其產(chǎn)仔情況，試驗(yàn)組11只母鼠、對(duì)照組6只，其產(chǎn)仔數(shù)、死胎數(shù)和弱仔數(shù)統(tǒng)計(jì)，詳見表1。

表1 產(chǎn)仔數(shù)及健康狀況

由上表可以得出，試驗(yàn)組共產(chǎn)仔106只，死胎11只，弱仔42只，死胎率為10.38%，弱仔率為39.62%；對(duì)照組共產(chǎn)仔 64只，死胎 1只，弱仔4只，死胎率為1.56%，弱仔率為6.25%。根據(jù)非配對(duì)設(shè)計(jì)兩樣本平均數(shù)的差異顯著性檢驗(yàn)[3]，產(chǎn)仔數(shù)的t1=0.743＜t0.05（df=15）=2.131，即P＞0.05，表明兩樣本平均數(shù)（即平均產(chǎn)仔數(shù)）無顯著差異；試驗(yàn)天數(shù)的t2=0.969＜t0.05（df=15）=2.131，即P＞0.05，表明兩樣本平均數(shù)（即試驗(yàn)組和對(duì)照組的試驗(yàn)天數(shù)）無顯著差異。根據(jù)兩個(gè)樣本百分?jǐn)?shù)差異顯著性檢驗(yàn)[3]得出，死胎率的 1.96＜u1=2.17＜2.58，即 0.01＜p＜0.05，表明兩樣本百分?jǐn)?shù)（即死胎率）差異顯著；而弱仔率的u2=4.75＞2.58，即 P＜0.01，表明兩樣本百分?jǐn)?shù)（即弱仔率）存在極顯著差異。

2.3 PCV2 對(duì)新生仔鼠生長的影響

2.3.1 對(duì)10 窩試驗(yàn)組和6 窩對(duì)照組仔鼠的斷奶前成活數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，詳見表2。

表2 新生小鼠成活數(shù)

由上表可以得出，試驗(yàn)組產(chǎn)活仔數(shù)95只，斷奶數(shù)79只，成活率為83.2%，對(duì)照組產(chǎn)活仔數(shù)63只，斷奶數(shù)62只，成活率為98.4%。根據(jù)兩個(gè)樣本百分?jǐn)?shù)差異顯著性檢驗(yàn)[3]，成活率的 u=2.94＞2.58，即 P＜0.01，表明試驗(yàn)組和對(duì)照組的成活率存在極顯著差異。

2.3.2 每只仔鼠以上午喂食前稱重統(tǒng)計(jì)體重，并計(jì)算每窩仔鼠的平均重量和各組的總平均重，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)詳見表3。

表3 試驗(yàn)組與對(duì)照組仔鼠的窩均重

經(jīng)計(jì)算，試驗(yàn)組的平均初生重為1.24g±0.21、平均 7日齡重為 3.45g±0.42、平均 14日齡重為5.90g±0.86、平均斷奶重為9.71g±1.28，而對(duì)照組的分 別 為 1.46g ±0.20、4.61g ±0.37、7.28g ±0.24、12.61g±0.63。根據(jù)非配對(duì)設(shè)計(jì)兩樣本平均數(shù)差異顯著性檢驗(yàn)[3]，得出初生重的t1=3.75＞t0.0（1df=∞）=2.576，即P＜0.01，表明試驗(yàn)組和對(duì)照組的初生重存在極顯著差異；7日齡重的 t2=13.571＞t0.01（df=∞）=2.576，即 P＜0.01，表明試驗(yàn)組和對(duì)照組的7日齡重差異極顯著；14日齡重的t3=8.881＞t0.0（1df=∞）=2.576，即P＜0.01，表明試驗(yàn)組和對(duì)照組的14日齡重存在極顯著差異；21日齡重的t4=12.174＞t0.0（1df=∞）=2.576，即P＜0.01，表明試驗(yàn)組和對(duì)照組的21日齡重存在極顯著差異。

3 討論

PCV2 引起的豬圓環(huán)病毒相關(guān)性繁殖障礙病是引起母豬發(fā)生繁殖障礙疾病的一種，這已被國內(nèi)外的學(xué)者所認(rèn)可。加拿大的Keith H.West 等人[4]用PCR和IHC 從一個(gè)發(fā)生妊娠后期發(fā)生流產(chǎn)和產(chǎn)木乃伊胎的豬場內(nèi)發(fā)生流產(chǎn)的母豬和仔豬中檢測(cè)出PCV2；美國愛荷華州立大學(xué)的Charles S.Johnson 等人[5]，分別給懷孕86天、92天、93天的三頭母豬子宮肌內(nèi)接種PCV2 發(fā)現(xiàn)，其所產(chǎn)的37 頭仔豬中的24 頭是正常的，其他的表現(xiàn)為木乃伊胎、死胎和弱仔；Kyoung-Jin Yoon 等人[6]通過用超聲波診斷術(shù)作指導(dǎo)，對(duì)懷孕中期和晚期的各7 頭母豬進(jìn)行子宮內(nèi)接種PCV2，試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，除了幾頭母豬由于感染鏈球菌而在接種病毒后不久就發(fā)生流產(chǎn)外，其他的母豬均在預(yù)產(chǎn)期產(chǎn)下死胎，且在妊娠中期接種病毒的母豬所產(chǎn)死胎數(shù)明顯高于在妊娠晚期接種病毒的母豬所產(chǎn)的死胎數(shù)。以上數(shù)據(jù)均表明，PCV2 可以導(dǎo)致母豬發(fā)生繁殖功能障礙。

本試驗(yàn)通過給SPF 母鼠接種PCV2 10天后，與SPF 公鼠進(jìn)行合籠飼養(yǎng)，待母鼠生產(chǎn)后統(tǒng)計(jì)每窩產(chǎn)仔率、死胎率和弱仔率發(fā)現(xiàn)，雖然接種了PCV2 的母鼠平均產(chǎn)仔數(shù)與對(duì)照組無顯著差異，但是其死胎率和弱仔率都明顯高于對(duì)照組，數(shù)據(jù)表明PCV2 可以引起母鼠發(fā)生繁殖障礙。該結(jié)果與加拿大的Keith H.West[4]、美國愛荷華州立大學(xué)的Charles S.Johnson[5]和Kyoung-Jin Yoon[6]等人的研究結(jié)果基本一致。

Steven R.Bolin 等人[7]給23 頭經(jīng)剖腹產(chǎn)且沒有喂初乳的仔豬肌肉接種低劑量的PCV2，發(fā)現(xiàn)在接種2周后這些仔豬的平均日增重明顯低于對(duì)照組。由此可見，PCV2 對(duì)新生仔豬的影響十分明顯，不僅使其斷奶成活率降低，還使其日增重降低，浪費(fèi)飼料。

本試驗(yàn)通過對(duì)10 窩試驗(yàn)組仔鼠和6 窩對(duì)照組仔鼠的奶前成活數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組仔鼠的成活率低于對(duì)照組仔鼠的成活率。通過對(duì)初生、7日齡、14日齡、21日齡仔鼠稱重計(jì)算平均日增重，發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組平均日增重明顯低于對(duì)照組。由此可見，PCV2 對(duì)新生小鼠的生長影響明顯，不僅使其斷奶成活率降低，且影響其生長速度。該結(jié)果與Steven R.Bolin 等人[7]的研究結(jié)論一致。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)旨在以小鼠為模型來探討PCV2 對(duì)雌鼠產(chǎn)仔及仔鼠生長狀況的影響，試驗(yàn)結(jié)果顯示接種并感染PCV2 的雌鼠產(chǎn)仔死胎率和弱仔率都明顯高于PCV2 陰性的雌鼠，仔鼠成活率和平均日增重都明顯低于PCV2 陰性雌鼠所產(chǎn)的仔鼠，該研究結(jié)果說明，PCV2 可引起母鼠發(fā)生繁殖障礙，并且對(duì)新生小鼠的生長影響明顯，不僅使其斷奶成活率降低，且影響其生長速度。本試驗(yàn)可為動(dòng)物感染PCV2后引起不同程度繁殖功能障礙的研究提供有力參考。