沈佳妍，徐婧淇，劉淼，王丹，陳倩，王濤，劉夢揚(yáng)（天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院，天津 300190）

酒精性肝?。╝lcoholic liver disease，ALD）是長期過量飲酒引起的一種常見的肝臟疾病，通常由早期酒精性脂肪肝發(fā)展為酒精性脂肪性肝炎，進(jìn)而引發(fā)肝纖維化和肝硬化，最終可能導(dǎo)致肝癌的發(fā)生。隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和生活方式的改變，全球酒精消耗量逐年遞增，與之相關(guān)ALD的發(fā)病率也在逐年攀升。僅2016年，全球就有60.7萬人死于酒精引起的肝硬化，因此，對ALD的防治已成為目前肝病研究的重點(diǎn)。

研究表明，肝臟脂肪變性、氧化應(yīng)激、乙醛介導(dǎo)的肝毒性以及炎癥反應(yīng)等多種因素都參與了ALD的病理過程，然而ALD的確切發(fā)病機(jī)制仍不完全清楚。臨床診斷上，常通過超聲、瞬時(shí)彈性成像、磁共振、血清生物標(biāo)志物測定和肝臟活檢組織學(xué)等手段來評估肝臟炎性損傷和纖維化程度。目前戒酒和藥物聯(lián)合治療是ALD的主要干預(yù)方法。但對于酒精性肝炎和纖維化的治療，除了運(yùn)用糖皮質(zhì)激素、美他多辛等藥物緩解短期癥狀外，仍然缺乏有效的、可長期使用的治療藥物。近年來，美國食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的新藥逐漸減少，但其中天然藥物所占比例卻穩(wěn)步上升，超過60%的上市藥物與天然藥物有很大的相關(guān)性。因此，提取自天然藥物的各種化合物可能是未來ALD相關(guān)藥物開發(fā)的重要來源。

黃酮類化合物是指由兩個(gè)苯環(huán)（A環(huán)、B環(huán)）通過三碳鏈相互連接而成的一類成分，大多具有6C-3C-6C的基本骨架。根據(jù)B環(huán)連接位置、C環(huán)氧化程度、C環(huán)是否成環(huán)等特點(diǎn)將黃酮類化合物分為黃酮類、黃酮醇類、二氫黃酮類、二氫黃酮醇類、異黃酮類等。黃酮類化合物廣泛存在于自然界植物中，特別在蕓香科、唇形科、姜科、玄參科、豆科等植物中含量豐富。研究表明，黃酮類化合物藥理學(xué)活性廣泛且毒性相對較低，能夠通過調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、抗氧化、抗炎、減少鐵沉積、調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖、抗凋亡、促進(jìn)自噬等多種途徑減輕酒精對肝臟的損傷。因此，本文對近年來天然黃酮類化合物治療ALD的研究進(jìn)展進(jìn)行系統(tǒng)性總結(jié)，對基于黃酮類化合物相關(guān)創(chuàng)新藥物的研究和開發(fā)具有重要意義。

1 ALD發(fā)病機(jī)制

1.1 乙醇代謝及氧化應(yīng)激

人體攝入酒精后，酒精的主要成分乙醇會透過胃腸黏膜進(jìn)入血液，而肝臟和大腦流入的血量最多，因此受到的影響最大。在肝臟中，大多數(shù)的乙醇在乙醇代謝關(guān)鍵酶——乙醇脫氫酶（ADH）的作用下被代謝為乙醛，乙醛又被乙醛脫氫酶（ALDH）代謝為乙酸。乙醇和乙醛對肝臟的毒性作用是導(dǎo)致ALD發(fā)生的重要因素。過量的乙醛能夠與微管蛋白結(jié)合，損害微管系統(tǒng)，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)正常分泌的蛋白質(zhì)滯留胞內(nèi)，造成脂肪排泌障礙，引起肝細(xì)胞的腫脹。同時(shí)，乙醛還能直接與蛋白質(zhì)、脂質(zhì)以及DNA結(jié)合形成共價(jià)化合物，進(jìn)而影響細(xì)胞穩(wěn)態(tài)，改變蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，并導(dǎo)致DNA損傷或突變。此外，乙醛還可以刺激肝星狀細(xì)胞（HSC）中轉(zhuǎn)化生長因子（TGF-

β

）信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，推動ALD的發(fā)展進(jìn)程。乙醛也能夠直接引發(fā)肝臟炎癥和細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）代謝失衡，導(dǎo)致其纖維化。

另一個(gè)參與乙醇代謝的關(guān)鍵酶是細(xì)胞色素氧化酶P450（CYP2E1），主要存在于肝細(xì)胞的滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，在肝細(xì)胞的線粒體內(nèi)也有表達(dá)。乙醇在CYP2E1的氧化作用下，產(chǎn)生過量的超氧離子、過氧化氫、羥基自由基等活性氧（ROS），當(dāng)這些代謝產(chǎn)物不斷積累超過超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GPX）等抗氧化酶的分解代謝能力時(shí)，會導(dǎo)致肝臟的氧化損傷。同時(shí)，ROS對線粒體膜磷脂中的多不飽和脂肪酸產(chǎn)生毒性，導(dǎo)致線粒體功能障礙，誘發(fā)TNF受體超家族成員6（Fas）介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。此外，ROS還通過誘導(dǎo)線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔的開啟來促進(jìn)BCL2相關(guān)X蛋白（Bax）從細(xì)胞質(zhì)向線粒體內(nèi)的轉(zhuǎn)位，導(dǎo)致線粒體通透性增加并釋放細(xì)胞色素C，引發(fā)肝細(xì)胞凋亡。受體相互作用蛋白激酶3（RIP3）介導(dǎo)的壞死也在ALD中發(fā)揮重要作用。Roychowdhury等研究發(fā)現(xiàn)，小鼠喂食酒精后可以明顯上調(diào)肝臟RIP3的表達(dá)水平，而RIP3缺失則能顯著減輕酒精喂食引發(fā)的肝細(xì)胞壞死。核因子E2相關(guān)因子2（NRF2）是肝臟中抗氧化應(yīng)激表達(dá)過程的重要轉(zhuǎn)錄因子，同時(shí)也是維持細(xì)胞內(nèi)氧化還原穩(wěn)態(tài)的中樞調(diào)節(jié)者，在減輕乙醛毒性反應(yīng)和氧化應(yīng)激過程中發(fā)揮重要的作用。Sun等研究發(fā)現(xiàn)，與野生型小鼠相比，NRF2敲除小鼠在酗酒后的病死率及肝臟損傷明顯增加，ALDH活性顯著降低。此外，酒精的過度攝入會抑制NRF2蛋白的表達(dá)及活化，從而影響其下游血紅素加氧酶1（HO-1）、NAD（P）H：醌氧化還原酶1（NQO1）等抗氧化蛋白的組成型和誘導(dǎo)型表達(dá)水平，加重肝臟的氧化損傷。

1.2 脂質(zhì)代謝

盡管酒精及其代謝物乙醛不會直接促進(jìn)脂肪酸合成，但乙醛代謝物乙酸酯能夠轉(zhuǎn)化為乙酰輔酶A，而乙酰輔酶A可作為脂質(zhì)合成的前體物質(zhì)直接參與脂肪酸合成。因此，酒精過度攝入初期引起的常見肝臟反應(yīng)多表現(xiàn)為過量的脂肪堆積。且長時(shí)間酒精過量攝入對三酰甘油的產(chǎn)生、脂肪酸攝取和氧化、三酰甘油輸出、肝細(xì)胞脂質(zhì)儲存等方面都會產(chǎn)生持續(xù)影響，進(jìn)而影響細(xì)胞脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)，導(dǎo)致細(xì)胞代謝異常，引發(fā)肝細(xì)胞氧化應(yīng)激和炎癥，加速肝臟損傷的發(fā)展進(jìn)程。

過量攝入酒精后，多種機(jī)制都能夠影響肝臟的脂肪生成，從而引發(fā)肝臟過度脂質(zhì)蓄積。急性和慢性酗酒均可導(dǎo)致小鼠肝臟固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1c（SREBP-1c）蛋白表達(dá)上調(diào)，進(jìn)而影響乙酰輔酶A羧化酶（ACC）、脂肪酸合成酶（Fasn）和硬脂酰輔酶A去飽和酶1（SCD1）等脂肪酸合成相關(guān)基因的表達(dá)，導(dǎo)致脂肪酸的合成增加。此外，機(jī)體過度攝入酒精會抑制沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶1（Sirt1）和腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）的表達(dá)，使AMPK對ACCSer79位點(diǎn)的磷酸化降低，導(dǎo)致ACC活性增強(qiáng)，脂肪酸合成增加。同時(shí)酒精還能通過直接抑制AMPK活性，降低其對SREBP-1c的磷酸化水平而促進(jìn)SREBP-1c激活，進(jìn)而誘導(dǎo)肝細(xì)胞胞漿中脂素1（Lipin-1）蛋白表達(dá)上調(diào)，并增強(qiáng)Lipin-1的磷脂酸磷酸酶（PAP）活性，促進(jìn)肝臟中三酰甘油合成，導(dǎo)致脂肪酸的酯化比例升高，進(jìn)一步加重肝臟的脂質(zhì)蓄積。除了促進(jìn)脂質(zhì)的合成外，過量的酒精還會影響脂肪酸的動員和清除。酒精的攝入提高了還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）和氧化型NAD的比例（NADH/NAD），抑制了脂肪酸

β

氧化，加劇肝臟脂肪變性。另一方面，酒精的過度攝入還會引發(fā)過氧化物酶體增殖物激活受體

α

（PPAR

α

）失活，導(dǎo)致線粒體功能障礙，導(dǎo)致能量動員不足。最近研究發(fā)現(xiàn)，慢性酒精攝入還會顯著抑制肝細(xì)胞的脂噬作用，從而減少胞內(nèi)脂噬介導(dǎo)的脂質(zhì)清除。

1.3 炎癥反應(yīng)

研究發(fā)現(xiàn)，機(jī)體中促炎因子過度釋放所致的免疫反應(yīng)失衡與ALD的發(fā)生和發(fā)展也存在密切的關(guān)系。酗酒會造成以巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞浸潤為特征的肝臟炎癥。慢性酒精暴露會引起腸道通透性增大，使循環(huán)系統(tǒng)中腸道來源的脂多糖（LPS）增多。有研究發(fā)現(xiàn)肝損傷的嚴(yán)重程度與血清LPS水平存在正相關(guān)。高水平的LPS由門靜脈循環(huán)進(jìn)入肝臟，通過LPS結(jié)合蛋白（LBP）與肝臟Kupffer細(xì)胞表面的CD14結(jié)合，激活Toll樣受體4（TLR4）信號通路，繼而激活核轉(zhuǎn)錄因子

κ

B（NF-

κ

B），誘導(dǎo)Kupffer細(xì)胞分泌腫瘤壞死因子（TNF-

α

）、白細(xì)胞介素6（IL-6）、白細(xì)胞介素8（IL-8）、白細(xì)胞介素17（IL-17）等炎癥因子，導(dǎo)致ALD的發(fā)生。動物肝炎模型和人類肝炎患者的肝臟活檢樣品中，TNF-

α

和IL-6的表達(dá)水平顯著增加。因此對于部分ALD患者，TNF-

α

和IL-6的表達(dá)水平可以間接反映ALD的嚴(yán)重程度。炎癥因子的大量釋放一方面通過炎癥反應(yīng)加劇肝細(xì)胞的損傷和壞死，另一方面通過再次影響腸道通透性進(jìn)而加劇肝臟的炎性損傷。研究表明酒精喂食引發(fā)的炎性介質(zhì)的釋放會激活細(xì)胞凋亡的外部途徑，誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡。其中Fas/Fas配體以及TNF受體1（TNF-R1）/TNF-

α

系統(tǒng)發(fā)揮了主要作用。在ALD患者肝臟細(xì)胞中均能夠檢測到顯著上調(diào)的Fas受體和TNF-R1。Iimuro等研究發(fā)現(xiàn)，TNF-

α

抗體治療能夠減輕肝臟炎癥和壞死，明顯改善ALD大鼠的肝損傷。Yin等研究發(fā)現(xiàn)，與野生型小鼠比，TNF-R1敲除能夠明顯改善過度攝入酒精造成的肝損傷，進(jìn)一步證實(shí)了TNF-

α

通過TNF-R1途徑在早期酒精性肝損傷的發(fā)生中發(fā)揮重要作用。最近研究發(fā)現(xiàn)，含NLR家族PYRIN域蛋白3（NLRP3）炎癥小體在ALD中也發(fā)揮著重要作用。Cui等研究結(jié)果表明，在乙醇處理后的小鼠巨噬細(xì)胞中，NLRP3、白細(xì)胞介素1

β

（IL-1

β

）和切割活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1（Caspase-1）表達(dá)水平明顯上調(diào)，導(dǎo)致肝臟中性粒細(xì)胞浸潤和炎癥反應(yīng)的發(fā)生。Wree等研究表明，NLRP3 過度激活會導(dǎo)致小鼠發(fā)生嚴(yán)重的肝臟炎癥，誘導(dǎo)肝細(xì)胞焦亡的發(fā)生。此外，酒精還能通過叉形頭轉(zhuǎn)錄因子O1（FoxO1）降低ALD小鼠肝細(xì)胞中miR-148a的表達(dá)，促進(jìn)硫氧還蛋白互作蛋白（TXNIP）過表達(dá)和NLRP3炎性小體激活，從而誘導(dǎo)肝細(xì)胞焦亡。與此同時(shí)，NLRP3炎性小體的激活還能夠誘導(dǎo)HSC活化和膠原沉積的增加，誘導(dǎo)ALD相關(guān)肝纖維化的發(fā)生。此外，Kupffer細(xì)胞產(chǎn)生的大量炎癥因子和生長因子也能夠促進(jìn) HSC的激活，進(jìn)而促進(jìn)肝臟纖維化的發(fā)生。有證據(jù)表明，酒精攝入引發(fā)的免疫失衡還會破壞自然殺傷（NK）細(xì)胞的抗纖維化功能，進(jìn)一步加速ALD的發(fā)展進(jìn)程。

2 ALD的治療手段

在既往的40年中，ALD的治療手段仍然以戒酒、營養(yǎng)支持和糖皮質(zhì)激素干預(yù)為主。當(dāng)前，在營養(yǎng)支持和戒酒的基礎(chǔ)上，通過藥物治療減輕ALD的損傷程度，改善已存在的繼發(fā)性營養(yǎng)不良，對癥治療酒精性肝硬化及其并發(fā)癥是治療ALD的主要原則。由于ALD的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前仍然缺乏有效的針對性治療藥物。有研究表明，美他多辛能加速乙醇從血液中清除，一定程度上改善了酒精中毒癥狀。糖皮質(zhì)激素則主要用于重癥ALD，且只對患者的短期生存率有一定的改善作用。已酮可可堿、

N

-乙酰半胱氨酸（NAC）和粒細(xì)胞集落刺激因子（G-CSF）在實(shí)驗(yàn)中顯示出對ALD的改善作用，但其可靠性仍需要大量實(shí)驗(yàn)證明。但當(dāng)ALD患者肝功能受到嚴(yán)重?fù)p傷引發(fā)肝衰竭時(shí)，只能通過肝移植進(jìn)行治療，因此，亟需篩選并尋找有效的抗ALD新型藥物。

3 黃酮類化合物對ALD的治療作用及機(jī)制

3.1 黃酮類

3.1.1 黃芩苷 黃芩苷是從雙子葉唇形科植物黃芩（

Scutellaria baicalensis

Georgi）的干燥根中提取分離出來的一種黃酮類化合物，是黃芩的主要活性成分。黃芩具有抗腫瘤、抗炎、抗菌等多種藥理作用，能有效保護(hù)心血管、肝、腎相關(guān)臟器，被廣泛應(yīng)用于中藥復(fù)方中。近年來，黃芩苷對肝臟的保護(hù)作用越來越受到人們的關(guān)注。有研究表明，黃芩苷對病毒性肝炎、脂肪肝、膽汁淤積性肝損傷和肝癌等都有很好的防治作用。研究發(fā)現(xiàn)，黃芩苷可以通過調(diào)控肝臟鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶Ⅱ（CaMKK

β

）/AMPK/ACC通路，降低肝臟脂肪酸合成，減輕肝臟脂質(zhì)蓄積。Dai等運(yùn)用定量化學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)肉毒堿棕櫚?；D(zhuǎn)移酶1A（CPT-1A）為黃芩苷調(diào)控脂質(zhì)代謝的新靶點(diǎn)，CPT-1A可以直接與黃芩苷結(jié)合并被黃芩苷變構(gòu)活化，從而減輕肝臟的脂肪變性。Wang等證實(shí)，黃芩苷可以有效減輕乙醇誘導(dǎo)的肝損傷，提高ALD大鼠的抗氧化能力。機(jī)制上，黃芩苷主要通過激活NRF2，促進(jìn)其下游抗氧化酶NQO1和HO-1的表達(dá)，從而增強(qiáng)ALD大鼠肝臟抗氧化能力，在慢性酒精性肝損傷小鼠模型中，也觀察到同樣的肝保護(hù)作用。He等給予小鼠黃芩苷[200 mg/（kg·d）]不僅能夠增強(qiáng)NRF2核轉(zhuǎn)移還能夠下調(diào)CYP2E1以及ROS產(chǎn)生相關(guān)酶類NADPH氧化酶2（NOX2）、NADPH氧化酶亞基（P67PHOX）、黃嘌呤氧化酶（XOD）和一氧化氮合成酶（iNOS）的表達(dá)，減輕過量ROS對肝臟的損害。鐵過載也會增加體內(nèi)ROS生成，與酒精發(fā)揮協(xié)同效應(yīng)，因此胞內(nèi)鐵水平也參與ALD的發(fā)展進(jìn)程。Xu等用檸檬酸鐵和酒精聯(lián)合刺激HepG2細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的凋亡和蛋白氧化的程度明顯加重，而黃芩苷預(yù)處理則能夠顯著抑制酒精與鐵結(jié)合引起的氧化應(yīng)激及細(xì)胞凋亡。有研究表明，音猬因子（SHH）信號與細(xì)胞炎癥和氧化應(yīng)激密切相關(guān)，盡管酒精的過度攝入會應(yīng)激性激活SHH通路，但是黃芩苷處理能夠顯著增加SHH及其下游受體蛋白Patched1（Ptc-1）、Smoothened（Smo）和核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子膠質(zhì)瘤相關(guān)癌基因1（GLI-1）蛋白的表達(dá)，進(jìn)一步促進(jìn)SHH通路的動員激活，減輕酒精所致L02細(xì)胞損傷和死亡。Kim等研究發(fā)現(xiàn)，黃芩苷可以有效改善酒精性脂肪肝大鼠的血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）水平異常升高，減少炎性細(xì)胞浸潤，降低肝臟炎癥反應(yīng)，其作用機(jī)制可能是黃芩苷通過抑制TLR4和髓樣分化因子88（MYD88）的表達(dá)，并減少NF-

κ

B的核轉(zhuǎn)移來發(fā)揮抗炎作用。3.1.2 漢黃芩素 漢黃芩素是從黃芩中提取的一種黃酮化合物，具有抗病毒、抗氧化、抗腫瘤、神經(jīng)保護(hù)等藥理活性。大量的體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明，漢黃芩素具有良好的肝臟保護(hù)作用。近期研究發(fā)現(xiàn)，漢黃芩素能夠通過促進(jìn)體內(nèi)、外肝細(xì)胞中PPAR

α

和脂聯(lián)素受體2（AdipoR2）的表達(dá)，減輕脂肪積累造成的肝細(xì)胞毒性。在ALD小鼠模型中，Li等發(fā)現(xiàn)漢黃芩素可以通過激活PPAR

γ

，顯著抑制NF-

κ

B的磷酸化和核轉(zhuǎn)移活性，減輕酒精引發(fā)的肝臟炎癥。此外，Du等研究證明漢黃芩素能夠增強(qiáng)Caspase-9、Caspase-3的活化，提高Bax/B淋巴細(xì)胞瘤2（Bcl-2）的比值，從而抑制HSC的活化，減輕肝臟纖維化。Khan等發(fā)現(xiàn)漢黃芩素還能夠通過激活ROS/ERK/NRF2信號通路發(fā)揮較強(qiáng)的抗炎抗氧化作用。研究發(fā)現(xiàn)，漢黃芩素通過激活A(yù)KT/GSK-3

β

信號通路可以有效減少乙醇誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激引起的肝細(xì)胞死亡，在ALD中發(fā)揮治療作用。Hong等研究證明，漢黃芩素通過靶向糖原合成酶激酶3

β

（GSK-3

β

），能夠有效誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞周期阻滯，抑制腫瘤增殖，調(diào)控細(xì)胞代謝。因此，漢黃芩素可能對酒精性肝硬化、肝癌均有潛在的治療作用。3.1.3 木蝴蝶素 木蝴蝶素也是提取自黃芩的一種黃酮類成分，對于肝臟損傷也能夠發(fā)揮獨(dú)特的保護(hù)作用。研究表明，給予ALD小鼠木蝴蝶素[40 mg/（kg·d）]處理可以明顯減輕慢性酒精喂食導(dǎo)致的小鼠肝臟脂肪蓄積、肝細(xì)胞腫脹以及炎性細(xì)胞浸潤等病理改變。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，木蝴蝶素能夠激活PGC-1

α

/Mfn2信號通路，減少酒精誘導(dǎo)引起的線粒體ROS積累，減輕肝臟氧化損傷。同時(shí)，木蝴蝶素通過抑制NLRP3炎癥小體通路中Caspase-1的活化，減輕肝細(xì)胞焦亡。除此之外，木蝴蝶素還能通過下調(diào)

SREBP-1c

、

Fasn

、

Scd1

等脂質(zhì)生成相關(guān)基因的表達(dá)，上調(diào)

Ppara

、

Cpt-1a

等脂肪酸氧化相關(guān)基因的表達(dá)，減輕酒精誘導(dǎo)的L02細(xì)胞脂質(zhì)蓄積。Jin等研究發(fā)現(xiàn)，木蝴蝶素還可以通過調(diào)控Yes相關(guān)蛋白（YAP）通路，減少L02細(xì)胞P16、P21和Hmga1等衰老標(biāo)志物的表達(dá)，減輕酒精造成的肝臟細(xì)胞衰老。而Zhang等發(fā)現(xiàn)木蝴蝶素也可以通過抑制YAP/HIF-1

α

信號，減少肝竇狀內(nèi)皮細(xì)胞（LSEC）的血管生成，減輕小鼠肝纖維化。酒精代謝異常會造成機(jī)體發(fā)生氧化應(yīng)激，而氧化應(yīng)激與肝臟的纖維化密切相關(guān)。在肝纖維化小鼠模型中，木蝴蝶素能夠通過調(diào)控PI3K/AKT/mTOR通路誘導(dǎo)自噬的激活，從而抑制活化的HSC分泌促炎細(xì)胞因子，減輕肝臟炎癥及纖維化。此外，Wei等研究發(fā)現(xiàn)，木蝴蝶素可以通過激活PKM1/HNF4

α

，減少肝癌細(xì)胞的增殖，提示其在治療ALD相關(guān)肝癌中也具有一定的作用。3.1.4 牡荊素 牡荊素是一種廣泛存在于植物中的黃酮類化合物，具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤等藥理活性。研究證明，牡荊素可以明顯改善酒精性肝損傷小鼠血清AST、ALT、總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、總膽紅素（TBIL）的異常升高及肝臟病理形態(tài)改變，使ALD小鼠轉(zhuǎn)氨酶、血脂、尿酸等指標(biāo)趨向正常發(fā)展。在體外實(shí)驗(yàn)中，牡荊素能恢復(fù)L02肝細(xì)胞的細(xì)胞活力，抑制酒精引起的AST升高。Yuan等研究發(fā)現(xiàn)，與正常細(xì)胞相比，酒精刺激后的L02細(xì)胞P53總蛋白和乙?；疨53表達(dá)均明顯上調(diào)，同時(shí)

Sirt1

和

Bcl-2

的基因表達(dá)明顯受到抑制，而牡荊素能夠顯著逆轉(zhuǎn)酒精導(dǎo)致的肝臟損傷，表明牡荊素可能通過Sirt1/P53介導(dǎo)的線粒體凋亡途徑對乙醇誘導(dǎo)的L02細(xì)胞損傷發(fā)揮保護(hù)作用。此外，牡荊素處理還能夠顯著降低ALD小鼠肝臟MDA含量和TNF-

α

的蛋白表達(dá)水平，并增加SOD的活性，抑制ALD小鼠肝臟氧化應(yīng)激和炎癥，減輕肝損傷。3.1.5 芹菜素 芹菜素，又稱芹黃素、洋芹素，是廣泛存在于溫?zé)釒卟酥械囊环N黃酮類化合物，尤以芹菜中含量為高。芹菜素具有心腦血管保護(hù)、抗腫瘤、抗病毒等多種生物活性。在56%酒精灌胃誘導(dǎo)的ALD小鼠中，Wang等研究發(fā)現(xiàn)芹菜素能夠通過增加肝臟谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和谷胱甘肽還原酶（GR）的活力，降低MDA含量和CYP2E1的蛋白表達(dá)，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力，減輕酒精暴飲導(dǎo)致的肝臟氧化損傷。同時(shí)芹菜素能夠抑制TNF-

α

的表達(dá)，減輕肝臟炎癥。此外，芹菜素可以調(diào)控脂質(zhì)代謝相關(guān)蛋白PPAR

α

、SREBP-1c、Fasn表達(dá)，減少小鼠肝臟脂質(zhì)過度蓄積，調(diào)控肝臟脂質(zhì)代謝。Li等研究發(fā)現(xiàn)，芹菜素還能通過P38-P21信號通路抑制肝癌細(xì)胞的生長。綜上所述，芹菜素可減輕ALD的肝臟炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激和脂質(zhì)積聚，有效減緩ALD的發(fā)展進(jìn)程。

3.2 黃酮醇類槲皮素

槲皮素是一種天然的黃酮醇類化合物，其具有抗氧化、抗病毒、抗炎等多種生物活性。槲皮素可以降低乙醇所致的脂滴包被蛋白2（PLIN2）的過度表達(dá)，刺激自噬溶酶體增多，恢復(fù)線粒體形態(tài)，從而增強(qiáng)脂質(zhì)自噬，減輕小鼠酒精性脂肪肝。P2X7受體（P2X7R）可以被細(xì)胞外ATP激活，在脂質(zhì)代謝、炎癥分子釋放、氧化應(yīng)激等方面發(fā)揮重要作用。Zhao等研究證明，通過阻斷P2X7R，抑制NLRP3炎性小體的生成，能夠有效抑制酒精攝取導(dǎo)致的脂質(zhì)過度積累、炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激。另一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生可導(dǎo)致氧化應(yīng)激，并進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)和肝臟纖維化。而槲皮素則可以通過P2X7R介導(dǎo)PI3K/Keap-1/NRF2信號通路減輕酒精誘導(dǎo)的肝臟脂肪變性，抑制炎癥因子的過度產(chǎn)生釋放。此外，槲皮素還可以通過提高機(jī)體抗氧化酶的活性，抑制MDA及ROS的生成，上調(diào)NRF2及HO-1蛋白的表達(dá)水平，對酒精誘導(dǎo)的肝細(xì)胞氧化應(yīng)激發(fā)揮保護(hù)作用。長期飲酒導(dǎo)致機(jī)體儲存鐵增多，發(fā)生鐵過載，從而產(chǎn)生大量過氧化物質(zhì)，損傷肝細(xì)胞，作為一種天然的螯合劑，槲皮素能夠螯合機(jī)體中的鐵，減少鐵過載導(dǎo)致的氧化損傷。此外，槲皮素還能夠通過BMP6/SMAD4信號通路增加鐵的轉(zhuǎn)運(yùn)，減少溶酶體中鐵的含量，進(jìn)一步改善酒精性肝損傷。

3.3 二氫黃酮類——柑橘類黃酮

柑橘類黃酮包括柚皮素、橙皮素、陳皮素和橘皮素等500多種化合物，主要存在于柑橘屬植物果實(shí)的外皮中。根據(jù)黃酮結(jié)構(gòu)命名大致可分為黃酮苷類和多甲氧基黃酮等。它們在抗炎、抗氧化、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝和改善胰島素敏感性方面都具有很好的作用。

提前給予小鼠含有川陳皮素和橘皮素的柑橘提取物能夠有效預(yù)防酒精過度攝入導(dǎo)致的肝臟脂質(zhì)代謝障礙和氧化應(yīng)激，其作用機(jī)制主要是通過激活A(yù)MPK調(diào)控脂質(zhì)代謝，并通過增加NRF2的表達(dá)，提高機(jī)體抗氧化能力，實(shí)現(xiàn)肝保護(hù)作用。此外，柚皮素還能減少細(xì)胞凋亡和DNA損傷，通過調(diào)控

Cyp2y3

、

Cyp3a56

、

Hmgcra

、

Hmgcrb

、

Fasn

、

Fabp10

、

Fads2

和

Echs1

等脂質(zhì)代謝相關(guān)基因，能夠明顯改善酒精導(dǎo)致的肝臟脂肪蓄積及肝臟脂肪變性。多項(xiàng)研究證明，柚皮素可以提高ALD大鼠酒精代謝酶的活性，提高機(jī)體抗氧化能力，減輕酒精所致的脂質(zhì)蓄積及肝損傷。此外，柚皮素還能顯著降低ALD大鼠血清的AST、ALT水平，降低TNF-

α

、IL-6、NF

κ

B、環(huán)氧合酶2（COX-2）、巨噬細(xì)胞炎性蛋白2（MIP-2）、CD14等炎癥標(biāo)志物的表達(dá)水平，減輕酒精喂食所致的大鼠肝臟炎癥性損傷。此外，Meng等研究證明，由橙皮素結(jié)構(gòu)修飾而成的橙皮素衍生物4-甲基香豆素-[5，6-g]-橙皮素（4-MCH）可以顯著減少酒精刺激所致的小鼠原代巨噬細(xì)胞及RAW264.7細(xì)胞中IL-6和TNF-

α

的釋放，抑制NF-

κ

B的激活，上調(diào)PPAR

γ

的蛋白表達(dá)，從而減輕酒精所致肝臟炎癥反應(yīng)。

3.4 二氫黃酮醇類

3.4.1 二氫楊梅素 二氫楊梅素又名雙氫楊梅素、蛇葡萄素，為二氫黃酮醇類化合物，存在于葡萄科、楊梅科、杜鵑科、藤黃科、大戟科及柳科等植物中，其中在葡萄科的藤茶中含量最高。除具有黃酮類化合物的一般生物學(xué)功能外，二氫楊梅素還具有解除醇中毒、預(yù)防酒精肝、脂肪肝、抑制肝細(xì)胞惡化、降低肝癌的發(fā)病率等藥理活性。研究發(fā)現(xiàn)，二氫楊梅素能夠有效緩解乙醇中毒癥狀，減輕乙醇對肝臟的損傷，目前二氫楊梅素已經(jīng)在美國作為防止酒精宿醉的營養(yǎng)補(bǔ)充劑使用。Shen等研究發(fā)現(xiàn)二氫楊梅素可以改善大鼠酒精暴露后產(chǎn)生的戒斷跡象，包括乙醇耐受性、焦慮增加和癲癇易感性，為酒精使用障礙相關(guān)藥物的研發(fā)提供了啟發(fā)。Liu等給予人肝微粒體二氫楊梅素處理，體外檢測八種人肝臟CYP亞 型（即1A2、3A4、2A6、2E1、2D6、2C9、2C19和2C8）變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)二氫楊梅素能有效抑制CYP3A4和CYP2E1的活性，顯示其對ALD治療的潛在作用。事實(shí)上，二氫楊梅素對乙醇誘導(dǎo)的小鼠的肝臟脂肪變性、三酰甘油積累和肝臟炎癥損傷均有治療作用。對酒精喂養(yǎng)的ALD小鼠進(jìn)行腹腔注射二氫楊梅素（5、10 mg·kg），能夠顯著提高乙醇代謝相關(guān)酶的表達(dá)，并降低小鼠血清中炎性細(xì)胞因子和趨化因子的水平。同時(shí)，二氫楊梅素能夠通過激活A(yù)MPK通路，增強(qiáng)CPT-1A和ACC的表達(dá)，加速ALD小鼠的脂質(zhì)代謝。體外實(shí)驗(yàn)中，二氫楊梅素也能夠改善酒精誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞中炎癥因子和趨化因子的表達(dá)異常，減輕細(xì)胞炎癥。Qiu等研究發(fā)現(xiàn)，在酒精誘導(dǎo)的肝損傷小鼠中，二氫楊梅素能夠顯著降低慢性酒精暴露引起的AST、ALT、血清堿性磷酸酶（ALP）水平異常升高，部分恢復(fù)肝臟細(xì)胞病理形態(tài)，并顯著下調(diào)炎癥細(xì)胞因子IL-1

β

和IL-6的表達(dá)水平，減輕肝臟炎癥。在作用機(jī)制上，二氫楊梅素可恢復(fù)肝臟中CYP2E1、Kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關(guān)蛋白1（Keap-1）、NRF2和HO-1的表達(dá)，改善NF-

κ

B和NRF2的核定位異常，減輕酒精誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激所致的肝臟損傷。此外，二氫楊梅素也可以通過減少TGF-

β

的表達(dá)，抑制肝臟纖維化，并影響肝癌細(xì)胞增殖及遷移，誘導(dǎo)小鼠肝癌細(xì)胞凋亡，從而起到多重肝保護(hù)作用。3.4.2 水飛薊素 水飛薊素是提取于水飛薊植物的干燥果實(shí)及種子的一種天然的黃酮木脂素類化合物，其主要成分為水飛薊賓、異水飛薊賓、水飛薊寧和水飛薊亭。水飛薊素是一種自由基清除劑，能夠調(diào)節(jié)與氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)和纖維化發(fā)生相關(guān)的酶，起到肝保護(hù)作用。Das等研究發(fā)現(xiàn)，水飛薊素可以通過增強(qiáng)機(jī)體抗氧化酶含量，減輕酒精導(dǎo)致的機(jī)體氧化應(yīng)激壓力。Song等研究表明，水飛薊素能夠以劑量依賴的方式下調(diào)血清中ALT的含量，減輕肝細(xì)胞壞死和脂質(zhì)沉積，從而減輕急性酒精攝入引起的肝損傷，進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，水飛薊素主要是通過減少肝臟TNF-

α

的產(chǎn)生來發(fā)揮作用。此外，水飛薊素對慢性酒精性脂肪肝也有改善作用，能夠明顯減輕酒精飼料喂食引起的肝臟脂質(zhì)過度積聚和炎癥，這些作用主要是通過下調(diào)NF-

κ

B、細(xì)胞間黏附分子1（ICAM-1）、IL-6等蛋白的表達(dá)實(shí)現(xiàn)的，其抗炎、抗氧化作用顯著，耐受性好，不良事件發(fā)生率低，目前已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于酒精相關(guān)性肝病的治療中。大量臨床研究結(jié)果顯示，水飛薊素可以明顯降低酒精肝患者的轉(zhuǎn)氨酶水平，并增強(qiáng)肝臟抗氧化酶活性，減輕酒精性肝損傷。此外，在ALD合并肝硬化患者中，長期攝入水飛薊素還能有效降低患者的病死率。

3.5 異黃酮類——葛根素

葛根素是從豆科植物葛及野葛的根中分離出的異黃酮類衍生物。Liu等研究發(fā)現(xiàn)，葛根素能夠通過調(diào)控AMPK

α

/ACC信號通路，減輕酒精誘導(dǎo)的肝臟脂肪變性。此外，葛根素還能夠明顯改善乙醇所致的肝臟三酰甘油和膽固醇異常上升，調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝相關(guān)基因（

Cyp2y3

、

Cyp3a65

、

Adh8a

、

Adh8b

、

Hmgcrb

和

Fasn

）、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和DNA損傷相關(guān)基因（

Chop

、

Edem1

和

Atf6

）的表達(dá)，并降低炎癥因子（IL-1

β

、TNF-

α

）表達(dá)水平，從而減輕肝臟脂質(zhì)蓄積及炎癥。Tian等研究發(fā)現(xiàn)，葛根素還可以調(diào)節(jié)COX-2和花生四烯酸-5-脂氧合酶（ALOX5）途徑，減輕乙醇所致的大鼠慢性酒精性肝損傷。此外，葛根素也能夠通過抑制聚ADP核糖聚合酶1（PARP1）的表達(dá)來減輕小鼠肝纖維化程度。

4 前景與展望

隨著ALD發(fā)病率的逐年升高，由其引發(fā)的肝硬化和肝癌發(fā)生也明顯增多。目前戒酒仍然是臨床上ALD防治的主要手段，但即便是完全酒精戒斷，仍有約73%的患者會最終發(fā)展為慢性肝炎及肝纖維化。因此開發(fā)新的ALD針對性藥物顯得越來越重要。越來越多的研究表明，黃酮類化合物具有突出的肝保護(hù)作用，可能為ALD相關(guān)治療藥物的研發(fā)提供新的思路和借鑒。其中二氫楊梅素能夠明顯減輕酒精中毒癥狀和使用依賴，有望開發(fā)為酒精使用障礙相關(guān)藥物；芹菜素、槲皮素、葛根素等均有明顯的減少脂質(zhì)合成、增強(qiáng)促進(jìn)脂質(zhì)代謝的作用，能夠減輕酒精引起的肝臟脂質(zhì)蓄積；水飛薊素、漢黃芩素、柑橘類黃酮等抗炎抗氧化作用顯著，有望成為防治酒精性肝炎的待開發(fā)藥物成分；而漢黃芩素、黃芩素、木蝴蝶素等對肝臟纖維化有明顯改善作用，能夠有效減緩ALD的纖維化發(fā)展進(jìn)程。目前，黃酮類化合物防治ALD的臨床研究還處于起步階段，相關(guān)化合物影響ALD的具體機(jī)制、其臨床應(yīng)用的安全性和長期有效性還有待進(jìn)一步研究。但鑒于其在防治ALD各個(gè)病程階段的顯著作用，對近年來天然黃酮類化合物抗ALD的基礎(chǔ)研究進(jìn)行系統(tǒng)性總結(jié)具有非常重要的意義。在此本文歸納綜述了天然藥物中的黃酮類化合物對ALD的改善作用及相關(guān)機(jī)制的研究進(jìn)展（見表1及圖1），揭示黃酮類化合物在ALD治療方面有開發(fā)潛力，為天然藥物更高效地應(yīng)用于臨床提供新的思路，也為基于黃酮類化合物治療ALD的新藥研發(fā)和應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)和參考。

圖1 黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)Fig 1 Structure of flavonoids

表1 天然藥物中的黃酮類化合物對ALD的作用機(jī)制及分子靶點(diǎn)
Tab 1 Molecular targets of flavonoids from natural medicines on ALD and related mechanism

種類 名稱 ALD模型 給藥劑量 藥理活性 分子靶點(diǎn)和通路 文獻(xiàn)黃酮 黃芩苷 Wistar大鼠 50 mg/（kg·d）灌胃14 d 抗氧化 NRF2/HO-1/NQO1 [24]小鼠 200 mg/（kg·d）腹腔注射11 d 抗氧化 NRF2，CYP2E1 [25]Wistar大鼠L02細(xì)胞120 mg/（kg·d）灌胃4周25/50 μmol·L－1處理24 h抗氧化，抗炎 SHH，Smo，Ptc-1，GLI-1 [27]SD大鼠 200 mg·kg－1腹腔注射2次 抗炎 TLR4 [28]HepG2細(xì)胞 25/50 μmol·L－1處理24 h 抗氧化，抗凋亡 iNOS [26]漢黃芩素 C57BL/6J小鼠NCTC 1469細(xì)胞20 mg/（kg·d）灌胃2周25 μmol·L－1處理12 h減少脂肪毒性 PPARα，AdipoR2 [29]C57BL/6小鼠RAW264.7細(xì)胞25/50/100 mg/（kg·d）灌胃16 d 20 μg·mL－1處理24 h抗炎 PPARγ，NF-κB [30]C57BL/6小鼠HSC-T6細(xì)胞，LX2細(xì)胞10/20/40 mg/（kg·d）腹腔注射5 d 1.25 μg·mL－1處理36 h抗纖維化 Caspase-3，Caspase-9，Bax/Bcl-2[31]HepG2細(xì)胞，MHCC97L細(xì)胞10/20 μmol·L－1處理24 h 調(diào)控細(xì)胞增殖 GSK-3β [34]木蝴蝶素 ICR小鼠L02細(xì)胞40 mg/（kg·d）灌胃4周20 μmol·L－1處理24/48 h抗炎、抗細(xì)胞焦亡PGC-1α/Mfn2 NLRP3，Caspase-1[35]L02細(xì)胞 20 μmol·L－1處理24 h 減少脂質(zhì)合成，增強(qiáng)脂質(zhì)代謝SREBP-1c，F(xiàn)asn，SCD1，PPARα，CPT-1A，HIF-1a[36]ICR小鼠 40 mg/（kg·d）灌胃4周 抗纖維化 YAP/HIF-1α [38]C57BL/6小鼠原代肝星狀細(xì)胞20/30/40 mg/（kg·d）腹腔注射4周40 μmol·L－1處理24 h抗炎，激活自噬，抗纖維化PI3K/AKT/mTOR [39][40]HepG2細(xì)胞 6/8/10/15/20/25 μmol·L－1處理72/96 h調(diào)控細(xì)胞增殖 PKM1/HNF4α [41]牡荊素 昆明小鼠L02 細(xì)胞20/40/80 mg/（kg·d）灌胃4周5/10/20 μmol·L－1處理24 h抗凋亡、抗氧化 Sirt1/P53 [42]芹菜素 昆明小鼠 150/240/300 mg/（kg·d）灌胃30 d 增強(qiáng)脂質(zhì)代謝，抗氧化PPARα，SREBP-1c，F(xiàn)ASN [43]HepG2細(xì)胞 10/20 μmol·L－1，處理24 h 調(diào)控細(xì)胞增殖 P38-P21 [44]黃酮醇 槲皮素 C57BL/6J 小鼠 100 mg/（kg·d）12周灌胃 增強(qiáng)脂質(zhì)自噬 LC3，P62，PLIN2，AMPK [45]

續(xù)表1

種類 名稱 ALD模型 給藥劑量 藥理活性 分子靶點(diǎn)和通路 文獻(xiàn)斑馬魚 25/50/100 μmol·L－1處理48 h 減輕脂肪變性 P2X7R，PI3K/Keap-1/NRF2[46]SD大鼠原代肝細(xì)胞25/50/100/150/200 μmol·L－1 處理2 h 抗氧化 NRF2/HO-1 [47][48]C57BL/6小鼠 100 mg/（kg·d）灌胃15周 減少鐵沉積 BMP6/SMAD4 [49-51]二氫黃酮 陳皮素 C57BL/6小鼠 50/100/200 mg/（kg·12 h）灌胃3次 抗氧化，增強(qiáng)脂質(zhì)代謝AMPK，NRF2 [53]橘皮素柚皮素 斑馬魚 2.5/5/10 mg·L－1處理48 h 增強(qiáng)脂質(zhì)代謝，減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，抗凋亡Cyp2y3，Cyp3a65，Hmgcra，Hmgcrb，F(xiàn)abp10，F(xiàn)ads2，Echs1，F(xiàn)asn，Chop，Edem1[54]Wistar大鼠 50 mg/（kg·d）灌胃14 d 抗炎 TNF-α，IL-6，NF-κB，COX-2，MIP-2，CD14[55]二氫黃酮醇 水飛薊素 C57BL/6 小鼠 200 mg/（kg·12 h）灌胃3次 抗炎 TNF-α [68]BALB/c小鼠 200 mg/（kg·d）灌胃12周 抗氧化，抗炎 IL-10，TNF-α，IFN-γ，VEGF-A，TGF-β，IL-14[67]SD大鼠 100/150/200 mg/（kg·d）灌胃6周 抗氧化，抗炎 NF-κB，ICAM-1，IL-6 [69]二氫楊梅素C57BL/6J小鼠HepG2 細(xì)胞，VL-17細(xì)胞5/10 mg/（kg·d）腹腔注射6周（每周5次）2.5/5 μmol·L－1處理24 h增強(qiáng)脂質(zhì)代謝，減輕乙醇毒性AMPK，ACC，CPT-1A [62]C57BL/6小鼠 75/100 mg/（kg·d）加入飲食給藥6周 增強(qiáng)自噬，抗氧化P62，Keap-1，HO-1，CYP2E1[63]小鼠Hepal-6 細(xì)胞10/50/100 μmol·L－1處理48 h 調(diào)控細(xì)胞增殖和遷移TGF-β [64]異黃酮 葛根素 斑馬魚 12.5/25/50 μmol·L－1處理48 h 增強(qiáng)脂質(zhì)代謝，減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，抗炎Cyp2y3，Cyp3a65，Adh8a，Adh8b，Hmgcrb，F(xiàn)asn，Chop，Edem1，ATF6，IL-1β，TNF-α[70]SD大鼠 1 g/（kg·d）灌胃2周 抗氧化，增強(qiáng)脂質(zhì)代謝ALOX-5，COX-2 [71]