于曉東 王雪峰 姜懌 徐濟(jì)責(zé)

(吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，長(zhǎng)春，130118) (吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院)

假臍菇(Tubaria)屬擔(dān)子菌門(Basidomycota)，傘菌綱(Agaricomycetes)，傘菌目(Agaricales)，假臍菇科(Tubariaceae)，建立于1876年，模式種 [T.furfuracea(Pers. ex. Fr) Gillet.][1]。假臍菇屬曾因形態(tài)特征與絲膜菌科(Cortinariaceae)物種相近而被歸入其中[2]，但1986年，Singer[3]因假臍菇屬孢子光滑，菌柄中生，認(rèn)為其與靴耳屬(Crepidotus)、暗褶傘(Melanophyllum)屬相近，而將其歸入靴耳科(Crepidotaceae)中；此外，Horak[4]還曾認(rèn)為假臍菇屬屬于球蓋菇科(Strophariaceae)。但是，多數(shù)分子系統(tǒng)學(xué)的研究結(jié)果均支持假臍菇屬作為獨(dú)立的分支[5-7]，Vizzini[8]于2008建立假臍菇科(Tubariaceae)，將假臍菇屬作為該科的模式屬。

假臍菇屬主要特征：子實(shí)體亞臍菇至金錢菌狀，菌蓋較??；菌褶直生至延生；菌柄中生；菌幕有或無，常有絲膜狀假根；孢子紋飾有或無，腎形、杏仁形、橢圓形至近圓柱形，無芽孔；緣生囊狀體常見，異形或近異形；側(cè)生囊狀體無；子實(shí)層菌髓規(guī)則或近規(guī)則；蓋皮菌絲平匐，色素有或無[3]。

截至目前，假臍菇屬共有90個(gè)物種。在我國(guó)，僅有4個(gè)物種被報(bào)道過，即石櫟假臍菇(TubarialithocarpicolaM. Zang)、粗糙假臍菇(Tubariaconfragosa(Fr.) Harmaja)、鱗皮假臍菇(Tubariafurfuracea(Pers.) Gillet)、鱗柄假臍菇(TubariasquamataY. Li & H. Zeng)[9-11]。本研究報(bào)道1個(gè)新記錄物種，散生假臍菇(Tubariaconspersa(Pers.) Fayod)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本采集

標(biāo)本于2021年8月采自吉林省白山市與吉林市，新鮮子實(shí)體的生境及宏觀形態(tài)照片采用佳能80D相機(jī)拍攝。詳細(xì)記錄其形態(tài)特征后，將新鮮的子實(shí)體置于電熱鼓風(fēng)干燥箱中55 ℃烘干，烘干后的標(biāo)本保存于吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院真菌標(biāo)本館中(HMJU)。

1.2 標(biāo)本形態(tài)觀察

宏觀特征描述根據(jù)標(biāo)本采集記錄以及宏觀形態(tài)照片，詳細(xì)記錄新鮮擔(dān)子體的外部形態(tài)特征，包括擔(dān)子果各部分(菌蓋、菌褶、菌肉、菌柄)的形態(tài)、尺寸、顏色等一切特征，顏色的記錄使用比色卡對(duì)照[12]。微觀特征觀察時(shí)，徒手切取干標(biāo)本的組織，選用質(zhì)量分?jǐn)?shù)3%的KOH作為浮載劑，待組織充分復(fù)水后，使用Olympus BX 53光學(xué)顯微鏡進(jìn)行觀察，必要時(shí)使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%的剛果紅染色。分別使用棉藍(lán)染液、鐵-醋酸洋紅染液、梅氏試劑，檢驗(yàn)孢子的嗜藍(lán)反應(yīng)、擔(dān)子中的嗜鐵顆粒有無以及孢子的淀粉質(zhì)。使用Cellstandard軟件進(jìn)行顯微數(shù)據(jù)測(cè)量和拍照，測(cè)量時(shí)隨機(jī)選取至少30個(gè)孢子、擔(dān)子及囊狀體，數(shù)據(jù)以(a)b—c(d)的形式記錄，其中b—c包括90%的數(shù)據(jù)，a和d代表最小值和最大值。Q代表孢子長(zhǎng)寬的比值，Qm代表Q的平均值。在掃描電鏡下觀察孢子的表面狀態(tài)，依據(jù)微觀特征使用針管筆和硫酸紙繪制線條圖。

1.3 分子系統(tǒng)學(xué)分析方法

采用生工基因組DNA提取試劑盒提取DNA。18S rDNA和28S rDNA 基因轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)序列(ITS序列)擴(kuò)增選用引物ITS1/ITS4[13]，28SrDNA大亞基序列(nrLSU序列)擴(kuò)增選用引物L(fēng)R0R/LR7[14-15]。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)程序參考Xu et al.[16]，①ITS，94 ℃ 4 min、(94 ℃ 45 s，52 ℃ 45 s，72 ℃ 1 min)×34個(gè)循環(huán)、72 ℃ 10 min；②nrLSU，94 ℃ 4 min、(94 ℃ 40 s，46 ℃ 45 s，72 ℃ 40 s)×30個(gè)循環(huán)、72 ℃ 4 min。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物送樣測(cè)序，測(cè)序由北京華大基因有限公司完成。所得序列提交至基因數(shù)據(jù)庫(kù)(Genbank)。系統(tǒng)發(fā)育分析的序列，選擇參考生物大分子序列比對(duì)搜索工具(BLAST)的比對(duì)結(jié)果與近年的系統(tǒng)發(fā)育分析研究[7，11，17]，所用的序列信息見表1。將所選序列通過MAFFT軟件比對(duì)后，在Bioedit軟件中手動(dòng)調(diào)整。模型選擇通過ModelFinder軟件完成，選用的最佳模型為GTR+F+I+G4。采用MrBayes 3.2.2軟件和IQTREE軟件分別用貝葉斯分析法(Bayes)和最大似然法(ML)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。將銹色暗皮傘(FlammulasterferrugineusMaire ex Watling)設(shè)為外群。所得拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)使用Figtree查看和修飾。

表1 系統(tǒng)發(fā)育分析所用序列信息

續(xù)(表1)

2 結(jié)果與分析

2.1 形態(tài)特征

散生假臍菇——中國(guó)新記錄種(見圖1、圖2)。

Tubariaconspersa(Pers.) Fayod, Annls Sci. Nat., Bot., sér. 7 9: 355 (1889)

≡AgaricusconspersusPers., Icon. Desc. Fung. Min. Cognit. (Leipzig) 2: pl. 50 (1800)

≡Naucoriaconspersa(Pers.) P. Kumm., Führ. Pilzk. (Zerbst): 76 (1871)

≡Inocybeconspersa(Pers.) Roze, Bull. Soc. bot. Fr. 23: 113 (1876)

≡Hylophilaconspersa(Pers.) Quél., Enchir. fung. (Paris): 103 (1886)

=Agaricusconspersusvar.ochraceusAlb. & Schwein., Consp. fung. (Leipzig): 166 (1805)

=Tubariaconspersavar.brevisRomagn., Revue Mycol., Paris 5(1): 37 (1940)

擔(dān)子果亞臍菇至金錢菌狀；菌蓋直徑0.95～1.25 cm，平展，近圓形，中央呈棕橙色(7E8)，邊緣淺棕橙色(6C4，6C5)，表面近水漬狀，有細(xì)小的白色絨毛，向邊緣漸密，邊緣平展，有淺條紋，有的存殘余菌幕；菌褶直生至稍延生，0.25 mm厚，0.8～1.2 mm寬，不等長(zhǎng)，初期呈淡灰橙色(6B3)，子實(shí)體成熟呈現(xiàn)土橙色(7C7)，稀疏，邊緣齒狀；菌柄(19.0～24.5)mm×(1.8～2.0)mm，圓柱形，整體呈淡橙色(6A5)，表面有淡的縱向條紋，密被細(xì)小的白色絨毛，基部絨毛較密集，中實(shí)。菌肉呈土橙色(7C7)，薄。

圖1 屑皮假臍菇宏觀形態(tài)特征及孢子電鏡照片

A為孢子；b為褶緣囊狀體；c為擔(dān)子；d為菌蓋皮層菌絲。標(biāo)尺：a為1 μm；b、d為10 μm；c為5 μm。

擔(dān)孢子[(4.2)4.3～5.8(5.9)]μm×[(3.1)3.2～3.9]μm，Q=(1.21)1.26～1.73，橢圓形或近淚滴形，淀粉質(zhì)，光滑，無色，薄壁。擔(dān)子[(16.2)17.2～21.7(22.3)]μm×[(4.5)5.3～7.5(8.4)]μm，棍棒形或近圓柱形，無色透明，2～4孢子，擔(dān)子小梗長(zhǎng)(2.4)2.7～5.1(5.9)μm；褶緣囊狀體[(17.8)19.9～36.3(53.7)]μm×[(6.8)7.7～13.0(14.3)]μm，簇生，窄棍棒狀至棍棒狀，無色透明，壁?。获迋?cè)囊狀體未見；菌髓菌絲平行，圓柱形，透明，薄壁，2.22～15.52 μm寬；菌蓋皮層規(guī)則，近平行，菌絲圓柱形，透明，薄壁，3.52～22.52 μm寬；菌柄皮層菌絲規(guī)則，近平行，菌絲圓柱形，透明，薄壁，4.17～14.99 μm寬。

生境：?jiǎn)紊蛏⑸卺橀熁旖涣值厣稀?/p>

分布：英國(guó)[18]；印度[19]；中國(guó)。

標(biāo)本信息：于曉東，劉汶鑫，2021年8月8日，吉林省白山市撫松縣露水河鎮(zhèn)紅松王風(fēng)景區(qū)，HMJU3949；徐濟(jì)責(zé)，于曉東，2021年8月19日，吉林省吉林市昌邑區(qū)左家鎮(zhèn)馬虎頭山，HMJU4297。

2.2 系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果

新得序列上傳至基因數(shù)據(jù)庫(kù)(登錄號(hào)：HMJU3949，ITS，OK448261，LSU，OK448330；HMJU4297，ITS，OK448262)?；贗TS的系統(tǒng)發(fā)育樹共包含40條序列，其中38條是從基因數(shù)據(jù)庫(kù)下載得到的，用最大似然法和貝葉斯法構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹得到相同的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)(見圖3)，在此僅顯示貝葉斯樹，貝葉斯分析支持率小于0.95的和最大似然分析支持率小于75的用“--”代替，新獲得的序列標(biāo)為橙色。由圖3可見：標(biāo)本HMJU3949、HMJU4297均與T. conspersa的序列聚在同一支，且有較高的支持率(貝葉斯分析支持率為1，最大似然分析支持率為100)。

圖3 依據(jù)ITS基因的系統(tǒng)發(fā)育樹

3 討論

自采標(biāo)本HMJU3949、HMJU4297，與散生假臍菇模式描述無明顯形態(tài)差異[17]，結(jié)合ITS的系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果，將其鑒定為散生假臍菇。因基因數(shù)據(jù)庫(kù)中現(xiàn)有的假臍菇屬的nrLSU序列較少，根據(jù)nrLSU序列所得的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)不具有代表性，故未參考nrLSU的系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果。

中國(guó)假臍菇屬分種檢索表如下：

1.孢子非光滑，具小刺，有側(cè)生囊狀體

石櫟假臍菇(T.lithocarpicola)

1.孢子不光滑，無側(cè)生囊狀體

2

2.有明顯的菌環(huán)，不脫落

粗糙假臍菇(T.confragosa)

2.菌環(huán)不明顯，易脫落

3

3.孢子淀粉質(zhì)

鱗皮假臍菇(T.furfuracea)

3.孢子非淀粉質(zhì)

4

4.褶緣囊狀體近棒狀圓柱狀至燒瓶形，頂部狹

鱗柄假臍菇(T.squamata)

4.褶緣囊狀體棒狀至近頭狀，頂部膨大

散生假臍菇(T.conspersa)