王領(lǐng) 劉佳偉 趙詩藝 谷志卓 張守文

關(guān)鍵詞 海參多肽;抗衰老;功效評價;化妝品

海參多肽具有延緩衰老、提高免疫力等生理功效。選取30名有效受試者為研究對象，采用無創(chuàng)性儀器、圖像分析、受試者主觀評價等方式，在第0天、第14天、第28天對眼部皺紋分值、紋理分值、皮膚粗糙度、面部角質(zhì)層含水量、皮膚彈性進(jìn)行檢測，結(jié)合受試者主觀評價，利用SPSS數(shù)據(jù)統(tǒng)計軟件對實驗結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，含有海參多肽的精華液能減少眼部皺紋分值、改善粗糙度、提高皮膚角質(zhì)層含水量、增強皮膚彈性，說明其具有良好的延緩衰老及保濕功效，可為海參多肽在化妝品中的應(yīng)用提供理論依據(jù)和數(shù)據(jù)支撐。

隨著物質(zhì)文化生活水平的提高，人們?nèi)找骊P(guān)注自己的皮膚健康。皮膚老化是隨著年齡的增長不可避免會出現(xiàn)的現(xiàn)象，衰老是生物個體在生命周期中必然發(fā)生的、難以逆轉(zhuǎn)的退行性變化[1]，影響皮膚衰老的主要因素包括外源性因素（光老化）和內(nèi)源性理論，外源性衰老因素主要是光老化、環(huán)境污染等;內(nèi)源性衰老理論主要包括遺傳理論、自由基理論、端粒理論和線粒體理論等[2-4]。皮膚衰老外在表現(xiàn)為皮膚干燥、松弛、粗糙、彈性下降、出現(xiàn)細(xì)紋和深紋等[5-6]。

生物多肽具有安全穩(wěn)定、分子量小、易水溶、易吸收等優(yōu)點，也有抗氧化、清除過剩自由基、抗衰老等生物活性，不僅能夠促進(jìn)皮膚細(xì)胞的增殖，還可為皮膚提供營養(yǎng)，延緩皮膚老化，促進(jìn)皮膚創(chuàng)傷修復(fù)[7]。近年來，多肽在抗衰老化妝品中的應(yīng)用越來越廣泛[8]。

海參為棘皮動物門海參綱動物，含有海參多糖、海參皂苷、脂肪酸、海參多肽等多種生物活性物質(zhì)[9]。研究表明，海參多肽能清除過剩的DPPH自由基、超氧陰離子自由基、羥自由基，對DNA、蛋白質(zhì)、脂肪等大分子物質(zhì)，對細(xì)胞或組織的氧化損傷有保護(hù)作用[10]。柴玉超等[11]研究了海參肽對人成纖維細(xì)胞的影響，并與常用的化妝品抗皺劑進(jìn)行了對比，發(fā)現(xiàn)海參肽能促進(jìn)人成纖維細(xì)胞NIH/3T3的生長，表明其可作為主要功效原料添加到延緩衰老護(hù)膚品中。付學(xué)軍等[12]研究發(fā)現(xiàn)，分子量不同的海參多肽表現(xiàn)出不同的抗氧化性。

本研究所用的海參多肽凍干粉由煙臺新生代生物科技有限公司提供，該多肽為木瓜蛋白酶水解新鮮海參，離心取上清液，超濾，純化、濃縮，凍干后得到小分子量海參多肽。多肽中含有酪氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、組氨酸等氨基酸，90%以上的分子質(zhì)量低于2000Da。擬通過無創(chuàng)性儀器測定法檢測受試者涂抹含海參多肽的化妝品前后眼部皺紋、紋理、粗糙度、角質(zhì)層含水量和皮膚彈性等指標(biāo)的變化，驗證其延緩衰老和補水保濕等功效，以期為其在化妝品中的應(yīng)用提供理論依據(jù)和數(shù)據(jù)支撐。

材料與方法

01材料與儀器

測試產(chǎn)品為含有海參多肽的精華液，實驗室自制，詳見表1。

VISIA面部影像分析系統(tǒng)（Canfield公司，美國），皮膚水分測試儀Corneometer（CM825，德國CK公司），皮膚彈性測試探頭Cutometer（MPA580，德國CK公司），皮膚顯微鏡及活性皮膚表面分析系統(tǒng)VisioScan（VC20plus，德國CK公司）。

02精華液配方組成與制備工藝

該精華液制備方法：將A相中卡波姆在水中預(yù)分散，分散溶脹均勻后再加入A相中其他原料，將燒杯放置在75～80℃的水浴鍋中，用電動攪拌器勻速攪拌30min左右，直至A相組分全部溶解;將燒杯從水浴鍋中取出，冷卻至65℃時加入B相組分對羥基苯乙酮，攪拌均勻，冷卻至40～45℃時加入CH10（辛酰羥肟酸、1，2-己二醇、1，3-丁二醇），攪拌均勻;待溫度降至35℃，依次加入C相原料，慢速攪拌均勻，得到精華液。

03方法

3.1受試者篩選

受試者篩選工作參考2015版《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》。根據(jù)《赫爾辛基宣言》，受試者的選擇遵循人體測試的醫(yī)學(xué)和倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，所有受試者的測試都必須出于受試者本人自愿，并在測試前簽署知情同意書。

選取健康女性受試者30名，年齡為30～50歲。受試者遴選標(biāo)準(zhǔn)符合《化妝品接觸性皮炎診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則》納入、排除標(biāo)準(zhǔn)。

3.2產(chǎn)品使用及測試安排

（1）受試者每天早晚各使用一次，取0.5mL（2泵量），以指腹輕柔涂抹肌膚，輕輕按壓眼部皮膚直至精華完全吸收即可，連續(xù)使用28天。

（2）受試者在第0天、第14天、第28天各隨訪1次，共3次，要求受試者每次隨訪為日間同一時間。每次測試前，受試者需用清水清洗面部，使用不含熒光劑的紙巾擦干面部水分，在恒溫恒濕環(huán)境（溫度為21.0±1.0℃，相對濕度為50%±10%RH）靜坐30min之后，由技術(shù)人員進(jìn)行皮膚指標(biāo)的測定。

（3）儀器測試方法和評價指標(biāo)：使用VISIA面部影像分析系統(tǒng)拍攝受試者左側(cè)面、正面、右側(cè)面圖像，記錄眼部皺紋分值和紋理分值;使用VisioScanVC20plus測量眼角紋理粗糙度，測量3次取平均值;使用CorneometerCM825測量受試者左右眼尾部位角質(zhì)層含水量，記錄角質(zhì)層水分含量值，測量3次取平均值;使用CutometerMPA580測量受試者左右眼尾部位的皮膚彈性，記錄皮膚總彈性R2值、回彈與拉伸的彈塑性總面積之比Q1值。

（4）受試者主觀評估：30名受試者分別在第0天、第14天、第28天隨訪時完成自我評估問卷調(diào)查，根據(jù)個人主觀感受對測試精華液進(jìn)行功效評價。

3.3數(shù)據(jù)分析

應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和統(tǒng)計分析。所有指標(biāo)數(shù)據(jù)，進(jìn)行配對T檢驗，比較第0天、第14天、第28天時的值，分析使用產(chǎn)品前后皮膚參數(shù)是否具有顯著性差異，顯著性標(biāo)注方法：“n.s”表示無統(tǒng)計學(xué)差異，P>0.05;“*”表示有顯著性差異，0.01≤P<0.05;“**”表示顯著性差異明顯，0.001≤P<0.01，“***”表示有極顯著差異，P<0.001。

結(jié)果與討論

01人體功效評價實驗結(jié)果

1.1眼部皮膚皺紋和紋理分值測試結(jié)果

皮膚紋理是皮膚表面微小的、呈多角形的皮丘皮溝，它使皮膚富有彈性并使皮脂腺、汗腺中的分泌物能沿其紋路擴(kuò)展到整個皮膚表面，隨年齡增加而逐漸加深。皺紋是衰老或過度暴露于陽光等外界因素作用下，后天形成的皮膚老化重要標(biāo)志之一[13]。皺紋和紋理度是反映肌膚年輕的重要指標(biāo)，其數(shù)值的變化趨勢能反映一款延緩衰老產(chǎn)品的實際功效和性能，皺紋分值和紋理分值越小，皺紋和紋理改善效果越好。

測試結(jié)果如圖1所示，從圖中可以看出，使用海參多肽精華液后，眼部皮膚皺紋分值呈現(xiàn)下降趨勢。與初始值相比，使用測試精華液28天后，皺紋分值由11.79下降為9.69，下降率為17.77%，有顯著性差異（P<0.05）。圖2為一名受試者使用前后對比圖，從中可以看出，受試者在使用含有海參多肽的精華液28天后，眼部皺紋具有明顯的減少或淡化的效果。詳見表2和表3。

眼部皮膚紋理分值的變化趨勢如圖3所示，與第0天相比，使用海參多肽精華液后第14天與第28天紋理分值均呈現(xiàn)下降趨勢。與初始值0天相比，使用測試產(chǎn)品14天后，紋理分值由8.95下降為8.34，下降率為6.82%，有顯著性差異（P<0.05）;使用測試產(chǎn)品28天后，紋理分值下降為8.46，下降率為5.04%，有顯著性差異（P<0.05），詳見表2和表3。

1.2眼部皮膚粗糙度測試結(jié)果

眼部皮膚粗糙度指標(biāo)是評價延緩皮膚衰老產(chǎn)品功效的一個重要參數(shù)，測量值越小則皮膚越平滑。測試周期內(nèi)，眼部皮膚粗糙度呈現(xiàn)下降趨勢，如圖2所示。使用測試產(chǎn)品14天后，粗糙度分值由8.27下降為6.30，下降率為23.82%，有顯著性差異（P<0.05）;使用測試產(chǎn)品28天后，粗糙度分值下降為5.60，下降率為32.30%，有極顯著差異（P<0.001）。圖5為一名受試者使用海參多肽精華液28天后的對比圖，從圖5中可以看出，28天后皮膚變得平滑，表面粗糙度得到明顯改善，詳見表2和表3。

1.3眼部皮膚角質(zhì)層含水量測試結(jié)果

皮膚屏障功能是衡量皮膚保水能力強弱的重要指標(biāo)。皮膚衰老時，表皮角質(zhì)層變薄，皮膚中天然保濕因子含量減少，水合能力下降，細(xì)胞皺縮，出現(xiàn)組織學(xué)結(jié)構(gòu)和形態(tài)改變而使皮膚逐漸出現(xiàn)細(xì)小皺紋[14]。角質(zhì)層水分含量可以間接反映皮膚衰老程度以及抗衰老化妝品的功效，測量值越大，表明角質(zhì)層水分含量越高，皮膚屏障功能越強。實驗結(jié)果如圖6所示，測試周期內(nèi)，皮膚角質(zhì)層含水量呈逐漸上升趨勢。與初始值相比，使用產(chǎn)品28天后，角質(zhì)層含水量數(shù)值由50.65升高至60.21，改善率為18.87%，顯著性差異明顯（0.01≤P<0.05），詳見表2和表3。

1.4眼部皮膚彈性測試結(jié)果

隨著年齡的增加，皮膚中可溶性膠原纖維減少，不溶性膠原纖維增加，皮膚的伸展度隨之減少，彈性呈現(xiàn)下降趨勢[15]，導(dǎo)致皮膚松弛和皺紋的產(chǎn)生。實驗結(jié)果如圖7所示，測試期間，皮膚彈性R2值和Q1值呈現(xiàn)上升的趨勢，皮膚彈性R2值與初始值相比，使用產(chǎn)品28天后改善率為13.08%，有極顯著差異（P<0.001）。皮膚彈性Q1值與初始值相比，使用產(chǎn)品28天后改善率為10.64%，顯著性差異明顯（0.01≤P<0.05），詳見表2和表3。

02受試者主觀評價

受試者自我評估是讓30名受試者在第14天和第28天隨訪時完成自我評價問卷，根據(jù)其個人主觀感受對測試產(chǎn)品進(jìn)行功效評價。如表4所示，使用測試樣品28天后，受試者對肌膚彈性的改善程度認(rèn)為有效的占比100%;對肌膚緊致的改善程度、光滑感的改善程度認(rèn)為有效的占比97%;對肌膚細(xì)紋改善程度、水潤改善程度、面部氣色改善程度認(rèn)為有效的占比93%;對肌膚光澤感改善程度認(rèn)為有效的占比90%;受試者對皮膚整體滿意程度及產(chǎn)品整體滿意程度分別占比93%和100%。由此可見，該款含有海參多肽的測試精華液在多方面皮膚改善程度上能夠達(dá)到所有受試者的認(rèn)可。

結(jié)論

經(jīng)過人體功效評價研究，使用含海參多肽精華液后，受試者眼部皮膚皺紋、紋理度、皮膚粗糙度、角質(zhì)層含水量和皮膚彈性等方面均有不同程度的改善效果，測試數(shù)據(jù)與可視化圖像及受試者對產(chǎn)品功效的主觀評價結(jié)果一致，這表明海參多肽具有良好的緊致肌膚、淡化皺紋、保濕等美容功效。

經(jīng)查詢，海參多肽尚未納入我國《已使用化妝品原料目錄》（2021版）中，未來可作為化妝品新原料進(jìn)行備案。待備案通過后，作為一種延緩衰老活性成分，在化妝品行業(yè)應(yīng)用前景廣闊。