黎晏辰 劉自強(qiáng) 趙 敏 譚 新 黃志鵬 馬迎飛* 尤曉顏

1(河南科技大學(xué) 河南省食品微生物工程技術(shù)研究中心 洛陽 471000)

2(中國科學(xué)院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院 深圳合成生物學(xué)創(chuàng)新研究院 中國科學(xué)院定量工程生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廣東省合成基因組學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 深圳市合成基因組學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 深圳 518055)

1 引 言

金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，S. aureus)是一類革蘭氏陽性致病菌，屬于微葡萄球菌科(Micrococcaceae)葡萄球菌屬(Staphylococcus)[1]。其主要存在于哺乳動(dòng)物的前頸部和皮膚表面[2]，是引起群體感染的主要病原菌之一，可引起輕微的皮膚感染，甚至導(dǎo)致嚴(yán)重的感染性休克，也是菌血癥和感染性心內(nèi)膜炎以及骨關(guān)節(jié)、皮膚和軟組織、胸膜肺、脊髓硬膜外膿腫等的主要誘因[3-4]。此外，金黃色葡萄球菌易在異物裝置表面形成難以根除的生物膜，從而引發(fā)器械感染[5]。20 世紀(jì) 40 年代中期，Kirby 發(fā)現(xiàn)部分金黃色葡萄球菌菌株產(chǎn)生了質(zhì)粒編碼的青霉素酶，該酶可水解青霉素的 β-內(nèi)酰胺環(huán)，形成青霉素抗性，導(dǎo)致群體中由耐青霉素的金黃色葡萄球菌引起的感染比例增加[6]。1961年，Barber[7]發(fā)現(xiàn)了耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌(Methicillin-resistantStaphylococcus aureus，MRSA)菌株。但是，目前耐甲氧西林金黃色葡萄球菌已對(duì)許多抗生素都產(chǎn)生了耐藥性。金黃色葡萄球菌的臨床感染不僅增加了微生物的耐藥性，而且臨床疾病的范圍也在不斷變化，對(duì)耐藥菌感染的預(yù)防和治療都帶來了挑戰(zhàn)[8]。

噬菌體是地球上數(shù)量最多、種類最多的生物實(shí)體[9]，是一種可特異性地裂解細(xì)菌的病毒[10]，1917 年，F(xiàn)élix d’Hérelle[11]將一種可裂解細(xì)菌的物質(zhì)命名為噬菌體。噬菌體的生命周期主要有兩種，一種是溶源性生命周期：噬菌體將其基因組整合到宿主基因組上，可在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定存在若干代，而非直接殺死宿主細(xì)胞[12]；另一種是裂解性生命周期：噬菌體感染細(xì)菌后迅速殺死宿主細(xì)胞[13]。對(duì)于細(xì)菌感染中常存在的生物膜，由于其被多糖包裹，抗生素不易穿透，采用特異性強(qiáng)、裂解能力強(qiáng)的噬菌體更容易殺死細(xì)菌，且噬菌體對(duì)宿主生物及其他有益菌無害，副作用小[14]，因此被視為治療細(xì)菌感染的潛在藥物。噬菌體用于治療金黃色葡萄球菌的感染已有相關(guān)報(bào)道。2018 年，楊航等[15]發(fā)現(xiàn)來自噬菌體裂解酶 PlyV12 的細(xì)胞壁結(jié)合結(jié)構(gòu)域(CBD)的重組蛋白 V12CBD 可通過多種方式減弱金黃色葡萄球菌的毒力，并增強(qiáng)宿主的免疫防御能力。2019 年，Lehman 等[16]將 3 種肌尾噬菌體制成噬菌體制劑AB-SA01，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，該制劑在體外和小鼠模型中都能顯著減少耐藥金黃色葡萄球菌數(shù)目。Fabijan 等[17]給金黃色葡萄球菌感染的患者靜脈注射噬菌體雞尾酒制劑 AB-SA01，均無不良反應(yīng)，證實(shí)了噬菌體治療的安全性。噬菌體的獨(dú)特屬性給應(yīng)用噬菌體治療超級(jí)耐藥菌感染提供了廣闊的前景。

本研究以金黃色葡萄球菌 K84 為宿主，從環(huán)境污水中分離得到噬菌體 SAK84P，對(duì)其進(jìn)行生物學(xué)特性及基因組學(xué)分析。裂解譜實(shí)驗(yàn)顯示其可侵染耐甲氧西林金黃色葡萄球菌，具有臨床價(jià)值，為探索噬菌體治療耐藥菌感染提供了理論基礎(chǔ)，為應(yīng)對(duì)超級(jí)耐藥菌提供了新的抗菌藥物和治療方案。

2 材料與方法

2.1 菌株、樣品來源和主要試劑和儀器

本研究所使用的菌株為金黃色葡萄球菌K84，SA 為實(shí)驗(yàn)室保存菌株(ATCC29213)，SA1～SA11 為深圳市人民醫(yī)院分離金黃色葡萄球菌；水樣采自深圳市西麗農(nóng)貿(mào)市場。其中，K84、SA、SA1～SA5 為甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌(Methicillin-susceptibleStaphylococcus aureus，MSSA)；SA6～SA11 為 MRSA。

LB 液體培養(yǎng)基：胰蛋白胨 10.0 g，酵母提取物 5.0 g，NaCl 5.0 g，1 L dd H2O，121 ℃，滅菌 30 min。LB 固體培養(yǎng)基：按上述液體培養(yǎng)基的配方，加入 1.2% 技術(shù)瓊脂粉，作為下層瓊脂平板；按上述液體培養(yǎng)基的配方，加入 0.7% 技術(shù)瓊脂粉，作為上層瓊脂平板。SM 緩沖液：NaCl 5.8 g，MgSO4?7H2O 2 g，50 mL 1 mol/L Tris-HCl，1 L dd H2O，121 ℃，滅菌 30 min。

0.22 μm 濾膜產(chǎn)自 Millipore 公司，2×Ex Taq酶產(chǎn)自 TaKaRa 公司，2000 DNA Marker 產(chǎn)自生工(上海)股份有限公司，落地離心機(jī)為 Thermo ST40R，超速離心機(jī)為 Himac CP 80NX，電泳儀為 BIO-RAD PowerPac，透射電鏡為 JEM-F200。

2.2 噬菌體的分離純化

噬菌體的分離純化采用雙層平板法[18]。將采集的污水與金黃色葡萄球菌 K84 共同培養(yǎng) 12 h 后8 000 rpm 離心 10 min，取上清液，作為第一次富集液，連續(xù) 3 次富集，將富集后的溶液離心收集上清液，過濾除菌，采用雙層平板法進(jìn)行噬菌體的分離純化。將金黃色葡萄球菌 K84 與 0.7% 的LB 固體培養(yǎng)基混勻鋪板，取 10 mL 濾液點(diǎn)板，放入 37 ℃ 培養(yǎng)箱，倒置培養(yǎng)，待有噬菌斑長出后，取單個(gè)噬菌斑浸泡于 SM 緩沖液中，加入K84 菌液與 0.7% LB 固體培養(yǎng)基混勻涂板，進(jìn)行3 次純化，直至噬菌斑形態(tài)單一。

2.3 噬菌體的裂解譜測定

本文選取 SA、臨床分離甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌菌株(SA1～SA5)和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌菌株(SA6～SA11)，采用雙層平板法進(jìn)行噬菌體宿主范圍測定。將 K84、SA和 SA1～SA11 等金黃色葡萄球菌培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期(OD600＝0.5)后，與 LB 固體培養(yǎng)基混勻鋪板，然后將 SAK84P 噬菌體稀釋不同的梯度進(jìn)行點(diǎn)板，觀察有無噬菌斑出現(xiàn)。

2.4 噬菌體溫度敏感性測定

取 100 μL(起始量為 108PFU/mL)的噬菌體液加入 EP 管中，分別放入 37 ℃、50 ℃、60 ℃、70 ℃ 的水浴鍋中孵育，在 20 min、40 min、60 min各時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行取樣，測試噬菌體滴度。同時(shí)設(shè)置3 個(gè)平行實(shí)驗(yàn)。

2.5 噬菌體 pH 耐受度測定

取 10 μL 稀釋過的噬菌體液，按 1∶9 的體積比分別加入 pH 為 1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、11.0、13.0 的 SM 緩沖液中，然后放入 37 ℃ 的水浴鍋中孵育 1 h，進(jìn)行噬菌體滴度測試。每個(gè)實(shí)驗(yàn)同時(shí)設(shè)置 3 個(gè)平行實(shí)驗(yàn)。

2.6 噬菌體抑菌曲線測定

取對(duì)數(shù)期(OD600＝0.5)的金黃色葡萄球菌加入 LB 培養(yǎng)基中，按感染復(fù)數(shù)(Multiplicity of Infection，MOI) 分別為 0.001、0.01、0.1、1、10、100 加入噬菌體，用 96 孔板放置 37 ℃ 酶標(biāo)儀中連續(xù)震蕩培養(yǎng)，間隔 10 min 測量 OD600的吸光值。用 LB 培養(yǎng)基作為空白對(duì)照，陽性對(duì)照為只加入金黃色葡萄球菌的 LB 培養(yǎng)基，每個(gè)實(shí)驗(yàn)設(shè)置 3 個(gè)平行實(shí)驗(yàn)。

2.7 噬菌體一步生長曲線測定

本實(shí)驗(yàn)采用的一步生長曲線的測定方法是基于 Pajunen 等[19]的方法，并對(duì)該方法略有改動(dòng)。取100 μL 對(duì)數(shù)期(OD600＝0.5)的金黃色葡萄球菌(約107PFU/mL)，按 MOI＝0.01 加入稀釋后的噬菌體(約 105PFU/mL)，混勻后取樣作為第一次測量值，然后放入 37 ℃ 搖床中，轉(zhuǎn)速為 220 rpm，每10 min 進(jìn)行一次取樣，共測量 80 min，采取雙層平板測定各時(shí)間點(diǎn)的噬菌體滴度，設(shè)置 3 個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，根據(jù)測試結(jié)果繪制出一步生長曲線。

2.8 噬菌體形態(tài)鑒定

噬菌體的形態(tài)可通過透射電子顯微鏡進(jìn)行觀察[20]。先將富集后的噬菌體用 CsCl 梯度密度離心，取純化后的噬菌體滴于銅網(wǎng)上，吸附 10 min，用濾紙小心擦去多余液體，再在銅網(wǎng)上滴加 2%磷鎢酸，染色 2 min，靜置于陰涼干燥處，24 h后用透射電子顯微鏡觀察。

2.9 噬菌體全基因組測序

將富集后的噬菌體基因組用天根基因組提取試劑盒進(jìn)行提取，文庫構(gòu)建采用 Illumina Nextera DNA Flex Library Prep，全基因組測序采用Illumina 平臺(tái)。序列組裝采用 SOAPdenovo[21]，開放閱讀框預(yù)測采用 GeenMark[22]，使用 Blastp工具進(jìn)行序列相似性分析，序列注釋主要使用 NCBI 數(shù)據(jù)庫——NR(Non-Redundant Protein Sequence Database)，tRNA 預(yù)測使用 tRNAscan-SE 工具[23]，使用 CGView 在線軟件對(duì)全基因組圖譜進(jìn)行繪制[24]。本文選擇較為保守的主要衣殼蛋白、末端大亞基、DNA 聚合酶 3 種蛋白，用Clustal W 進(jìn)行蛋白序列比對(duì)[25]，并用 MEGA X軟件[26]進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建。

3 結(jié)果分析

3.1 噬菌體裂解譜

對(duì)于金黃色葡萄球菌臨床分離菌株，SAK84P 呈現(xiàn)不同的裂解能力(表 1)。由表 1 可知，SAK84P 可侵染甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌，也可侵染耐甲氧西林金黃色葡萄球菌，具有臨床價(jià)值。

表1 噬菌體 SAK84P 的宿主譜Table 1 Host range of phage SAK84P

3.2 噬菌體溫度穩(wěn)定性

實(shí)驗(yàn)通過在不同溫度的不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)噬菌體的滴度進(jìn)行測定，測定結(jié)果如圖 1 所示。由圖 1可知，金黃色葡萄球菌噬菌體 SAK84P 在 37 ℃時(shí)能保持很好的活性，具有繁殖能力；當(dāng)溫度為50 ℃ 時(shí)，噬菌體仍能存活且保持 108PFU/mL 滴度；但當(dāng)溫度高于 50 ℃時(shí)，噬菌體迅速失活。

圖1 噬菌體 SAK84P 的熱穩(wěn)定性Fig. 1 Temperature stability of phage SAK84P

3.3 酸堿耐受度

將噬菌體稀釋液分別加入 pH 為 1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、11.0、13.0 的 SM 緩沖液中，在 37 ℃ 的水浴鍋中孵育 1 h 后對(duì)噬菌體進(jìn)行滴度測定，測定結(jié)果如圖 2 所示。由圖 2 可知，SAK84P 在 pH 3.0～11.0 環(huán)境下具有生物學(xué)活性，其中，pH 為 5.0～7.0 是最適合噬菌體生長的環(huán)境；當(dāng) pH＜5.0 或 pH＞7.0 時(shí)，噬菌體活性急劇下降；在 pH＜3.0 或 pH＞11.0 時(shí)，噬菌體幾乎無裂解能力。

圖2 噬菌體 SAK84P 的酸堿穩(wěn)定性Fig. 2 pH stability of phage SAK84P

3.4 抑菌曲線

將噬菌體與宿主菌以不同的 MOI 比例混合后共同培養(yǎng)，噬菌體 SAK84P 的抑菌曲線如圖 3所示。當(dāng) MOI 為 0.001 時(shí)，加入 SAK84P 與只加入宿主菌 K84 的生長趨勢幾乎一致，表明若按此MOI 加入噬菌體，則無法抑制宿主菌的生長；當(dāng)MOI 為 0.01 和 0.1 時(shí)，對(duì)金黃色葡萄球菌 K84 的裂解能力較強(qiáng)，在 OD600大于 1 時(shí)，即菌液較濃時(shí)仍可以顯著抑制宿主菌的生長；當(dāng) MOI 為 1、10、100 時(shí)，可對(duì)宿主菌產(chǎn)生一段時(shí)間的抑制，但在 360 min 后，抗性菌出現(xiàn)。因此，當(dāng) MOI 為0.01 和 0.1 時(shí)，可有效起到殺菌作用，并抑制細(xì)菌不再生長，所以其為最佳感染復(fù)數(shù)。

圖3 噬菌體 SAK84P 抑菌曲線Fig. 3 Killing curve of phage SAK84P

3.5 一步生長曲線

對(duì) SAK84P 進(jìn)行一步生長曲線測定。在各時(shí)間點(diǎn)測得噬菌體計(jì)數(shù)除以起始點(diǎn)計(jì)數(shù)，即為平均每個(gè)噬菌體產(chǎn)生的子代數(shù)目(Burst Size)[27]，用Burst Size 繪制出噬菌體 SAK84P 的一步生長曲線圖如圖 4 所示。由圖 4 可知，SAK84P 的潛伏期為 20 min，裂解時(shí)間為 40～70 min，Burst Size 為100 PFU/cell。該噬菌體裂解能力較強(qiáng)，平臺(tái)期較短，在 70 min 后噬菌體便進(jìn)入下一階段的裂解。

圖4 噬菌體 SAK84P 一步生長曲線Fig. 4 One-step growth curve of phage SAK84P

3.6 噬菌體形態(tài)學(xué)鑒定

本實(shí)驗(yàn)以金黃色葡萄球菌 K84 為宿主菌，從污水中分離純化得到一株烈性噬菌體 SAK84P，雙層平板顯示該噬菌體呈現(xiàn)透明的噬菌斑，直徑約為 1～1.5 mm，邊界清晰(圖 5(a))。

由透射電鏡結(jié)果(圖 5(b))可觀察到，噬菌體 SAK84P 的頭部為多邊形(近似六邊形)，其直徑為 112 nm，尾巴長 200 nm，寬為 29 nm，且尾巴粗壯。根據(jù)國際病毒分類委員會(huì)的新國際病毒分類方法，該噬菌體屬于有尾噬菌體目(Caudovirales)，螺旋噬菌體科(Herelleviridae)[28]。

圖5 噬菌體 SAK84P 的形態(tài)Fig. 5 Morphology of phage SAK84P

3.7 噬菌體全基因組測序

SAK84P 全基因組大小為 141 535 bp，GC含量為 30%，Blastn 結(jié)果顯示與 Staphylococcus phage VB_ScoM-PSC1 (GenBank: MZ573923.1)最為相似，其中，98% 的覆蓋度中有 99.96% 的序列一致性。SAK84P 全基因組的預(yù)測結(jié)果為，共有 224 個(gè)開放閱讀框(Open Recording Frame，ORF)和 4 個(gè) tRNA，且含有多個(gè)末端重復(fù)序列編碼的蛋白。

3.7.1 基因功能預(yù)測

使用 GeenMark 對(duì)噬菌體基因組 ORF 進(jìn)行預(yù)測，使用 NCBI 數(shù)據(jù)庫——NR 進(jìn)行 ORF 注釋，注釋結(jié)果用 CGView 軟件進(jìn)行噬菌體全基因組圖譜繪制(圖 6)。其中，62 個(gè) ORF 在反義鏈上，162 個(gè) ORF 為正義鏈編碼的蛋白質(zhì)。將預(yù)測結(jié)果中已知蛋白功能的 ORF 分為：DNA 復(fù)制和代謝相關(guān)的蛋白、結(jié)構(gòu)相關(guān)的蛋白、裂解相關(guān)的蛋白、DNA 包裝相關(guān)的蛋白，以及未知功能的蛋白。

圖6 噬菌體 SAK84P 全基因組圖譜Fig. 6 Genome map of phage SAK84P

在該噬菌體基因組中，與 DNA 復(fù)制和代謝相關(guān)的基因有 ORF46(DNA 連接酶)、ORF92(RNA聚合酶)、ORF127(DNA 聚合酶 I)、ORF112(重組外切酶)、ORF139(DNA 修復(fù)外切酶)[29]；與結(jié)構(gòu)相關(guān)的蛋白包括 ORF78(主要衣殼蛋白)、ORF85(尾鞘蛋白)、ORF86(尾管蛋白)、ORF99(基板蛋白)、ORF135(尾絲蛋白)等，負(fù)責(zé)噬菌體形態(tài)相關(guān)的蛋白組裝；裂解相關(guān)的蛋白主要有ORF58(裂解酶)，其作為噬菌體感染宿主后的晚期基因表達(dá)的水解酶，通過破壞細(xì)菌細(xì)胞壁肽聚糖，幫助子代噬菌體的釋放[30]；DNA 包裝相關(guān)的蛋白主要有 ORF69(末端大亞基蛋白)，其負(fù)責(zé)將病毒 DNA 包裝到空衣殼中[31]，該蛋白多為保守蛋白，可利用該蛋白構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。

3.7.2 噬菌體 SAK84P 系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建

針對(duì)噬菌體上的主要衣殼蛋白、末端大亞基、DNA 聚合酶等保守蛋白，構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，進(jìn)一步確定噬菌體 SAK84P 的分類，噬菌體 SAK84P 系統(tǒng)發(fā)育樹如圖 7 所示。由圖 7 可知，SAK84P 噬菌體與Kayvirus屬的噬菌體聚在一個(gè)分支上，且 SAK84P 與金黃色葡萄球菌噬菌體Staphylococcusphage G15 在這 3 種保守蛋白的氨基酸序列上較一致，與Staphylococcusphage LSA2308、Staphylococcusphage philPLAC1C 相距較遠(yuǎn)。與 SAK84P 噬菌體基因組核酸序列最為相似的是Staphylococcusphage VB_SavM_JYL01，其末端大亞基和主要衣殼蛋白都與 SAK84P 較相似，但 DNA 聚合酶存在差異。因此，SAK84P 的分類和Staphylococcusphage G15 一致，屬于有尾噬菌體目(Caudovirales)，螺旋噬菌體科(Herelleviridae)，Twortvirinae亞科，Kayvirus屬。該螺旋噬菌體家族由國際病毒分類委員會(huì)命名，具有肌尾噬菌體的形態(tài)[28]。

圖7 噬菌體 SAK84P 系統(tǒng)發(fā)育樹Fig. 7 Phylogeny tree of phage SAK84P

4 討論與結(jié)論

抗菌素耐藥性是一個(gè)全球關(guān)注的復(fù)雜問題，其可能會(huì)對(duì)人民健康和社會(huì)經(jīng)濟(jì)造成巨大影響。而金黃色葡萄球菌作為最棘手的細(xì)菌病原體之一，不僅對(duì)青霉素、甲氧西林不敏感，而且對(duì)其他抗生素(大環(huán)內(nèi)酯等)和萬古霉素也出現(xiàn)了耐藥性。

噬菌體療法在應(yīng)對(duì)金黃色葡萄球菌感染中扮演了重要角色。Dickey 等[32]發(fā)現(xiàn)噬菌體輔助治療可增強(qiáng)低濃度抗生素對(duì)金黃色葡萄球菌生物膜的殺菌作用；在金黃色葡萄球菌足部感染的小鼠模型中，Albac 等[33]使用 3 種噬菌體聯(lián)合利奈唑胺，在小鼠后爪單次注射中，噬菌體均顯示出良好的抗菌功效；Doub 等[34]使用 PM448 噬菌體成功治療了頑固性葡萄球菌表皮假肢膝關(guān)節(jié)感染；Chhibber 等[35]用脂質(zhì)體包裹噬菌體，治療金黃色葡萄球菌引起的糖尿病傷口感染小鼠模型，可顯著提高感染的治愈率、加快傷口愈合，且在包裹脂質(zhì)體的傷口部位上，檢測到噬菌體的存在更加持久。這些發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步支持噬菌體療法的臨床前和臨床研究。由于噬菌體對(duì)宿主的高度專一性，所以應(yīng)用噬菌體治療耐藥菌感染，不會(huì)引起菌群紊亂。噬菌體療法應(yīng)用已有 100 多年歷史[36]，臨床上也未發(fā)現(xiàn)有明顯的毒副作用[17]。

常規(guī)的噬菌體療法依賴于天然的噬菌體對(duì)感染部位的菌株進(jìn)行裂解，這需要針對(duì)不同耐藥菌株分離相應(yīng)的噬菌體，因此，治療效果受噬菌體實(shí)體庫容量的影響。而生物學(xué)特性是噬菌體能否作為生物制劑的先決條件，也是噬菌體未來應(yīng)用于臨床或生產(chǎn)的理論基礎(chǔ)。本研究發(fā)現(xiàn)，噬菌體 SAK84P 能侵染多株臨床分離的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌，且該噬菌體裂解能力極強(qiáng)。當(dāng)用 K84 作為宿主時(shí)，擴(kuò)大培養(yǎng)后噬菌體滴度能達(dá)到 1010PFU/mL，可作為治療 MRSA 的備用噬菌體。SAK84P 噬菌體在 50 ℃ 以下可穩(wěn)定存在，37 ℃ 時(shí)生物學(xué)活性強(qiáng)，可適用于治療人體耐藥菌感染。此外，該噬菌體對(duì) pH 有較大程度的耐受范圍，在 pH 為 3.0～11.0 內(nèi)都有裂解能力，在pH 為 5.0～7.0 時(shí)活性最高，說明該噬菌體對(duì)酸堿的耐受度廣，可治療細(xì)胞外感染和胞內(nèi)感染，有較強(qiáng)的應(yīng)用價(jià)值。本研究通過對(duì) SAK84P 噬菌體進(jìn)行抑菌曲線和一步生長曲線測定，得到最佳感染復(fù)數(shù)(MOI)為 0.01 或 0.1，可作為噬菌體雞尾酒療法中的添加比例，能更有效地抑制菌株生長[37]；該噬菌體潛伏期為 20 min，Burst Size 為100 PFU/cell，高于陳岡等[38]報(bào)道的金黃色葡萄球菌噬菌體 SP-2(80)，也顯著高于金黃色葡萄球菌噬菌體 qdsa001(32.2)[39]。該噬菌體具有較短的裂解周期，平臺(tái)期較短，在 70 min 完成第一階段裂解后迅速進(jìn)入下一個(gè)裂解周期，噬菌體的生長周期在臨床應(yīng)用中有重要意義。因此，該噬菌體在侵染宿主菌過程中可迅速產(chǎn)生大量子代，具有作為噬菌體生物制劑的潛力，也可用作消殺材料[38]，后續(xù)將繼續(xù)分離 MRSA 噬菌體，擴(kuò)大金黃色葡萄球菌噬菌體實(shí)體庫，通過噬菌體雞尾酒療法治療更多臨床中的耐藥細(xì)菌感染。

利用噬菌體進(jìn)行治療的另一途徑是利用生物技術(shù)等擴(kuò)大治療制劑范圍，包括使用工程化噬菌體或純化噬菌體裂解蛋白等策略[40]。Gu 等[41]使用純化的葡萄球菌噬菌體 GH15 的裂解酶在體外殺死多株金黃色葡萄球菌，包括 MRSA，該酶還可有效保護(hù)小鼠免于菌血癥。噬菌體 SAK84P 的基因組注釋顯示，該噬菌體中有編碼裂解酶的基因，且在基因組注釋中尚未發(fā)現(xiàn)已知的毒力和耐藥基因，后續(xù)可純化該噬菌體的裂解酶蛋白，進(jìn)行細(xì)菌生物膜降解實(shí)驗(yàn)[42]，為后續(xù)體外治療MRSA 感染奠定基礎(chǔ)，也可通過噬菌體改造技術(shù)，賦予該噬菌體更多功能，使其更好地在治療胞內(nèi)細(xì)菌感染中發(fā)揮作用，以及預(yù)防群體感染和其他超級(jí)耐藥細(xì)菌感染。