◆作者：王敏 陳書琴 杜紅方 李陽源 馮新雨 楊博 郭玉光

◆單位：1.廣東溢多利生物科技股份有限公司；2.華南理工大學生物科學與工程學院

抗生素在飼糧中添加起到降低仔豬發(fā)病率，提高仔豬生長性能的雙重效果（CROMWELL，2006）。但濫用抗生素導致的食品安全和生態(tài)安全方面的問題引起社會廣泛關注。農業(yè)農村部第194 號公告正式宣布，自2020年7 月1 日起，我國飼料生產企業(yè)將停止生產含有促生長類藥物飼料添加劑（中藥類除外）的商品飼料。因此，尋找能夠緩解禁用抗生素后帶來的發(fā)病率提高和生長性能下降等方面的問題的方案成為目前行業(yè)關注的焦點。

博落回散為博落回提取物，屬國家二類新中獸藥。研究表明，飼糧中添加博落回提取物（MCE）能夠促進前腸有益菌乳桿菌屬的增加，通過占位效應抑制病原菌的定植（LEE 等，2015；胡貴麗等，2018）。同類研究證實，MCE 能夠提高盲腸有益菌數(shù)量和揮發(fā)性脂肪酸濃度，提升腸道屏障功能，改善黃羽肉雞生長性能（柴毛毛等，2020）。葡萄糖氧化酶（Glucose oxidase,GOD）是一種需氧脫氫酶，能專一地氧化β-D- 葡萄糖生成葡萄糖酸，與酸化劑在腸道中的作用相似。過往研究證實，GOD 作為一種健康的添加劑能夠維持肉雞腸道健康并提高生產性能，除此之外，飼糧中添加GOD 還能夠提高腸道免疫功能和機體抗氧化能力。

近年來，在畜禽養(yǎng)殖中關于MCE 和GOD 研究的較多，但少見在仔豬養(yǎng)殖中聯(lián)合使用MCE和GOD 替代抗生素的報道。本試驗旨在研究MCE 和GOD 聯(lián)合使用替代抗生素對仔豬生長性能、血清生化指標和腸道形態(tài)的影響，為現(xiàn)實替抗提供理論基礎。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗材料

試驗用博落回散取自湖南美可達公司，血根堿含量為100g：0.375g。葡萄糖氧化酶取自廣東溢多利生物技術股份有限公司，酶活為10 000U/g。土霉素鈣、吉他霉素和喹烯酮均從市場獲取。

1.2 試驗設計及試驗飼糧

試驗選取360 頭35 日齡健康且長勢均勻的“杜×長×大”三元仔豬，按照體重相近、公母各半的原則，將其隨機分為對照組、抗生素組、試驗組，每個組6個重復，每重復20 頭仔豬。對照組飼喂基礎飼糧；抗生素組在基礎飼糧中添加1000mg/kg 土霉素鈣 +50mg/kg 吉他霉素+25mg/kg 喹烯酮；試驗組在基礎飼糧的中添加300mg/kg 博落回散+750U/kg 葡萄糖氧化酶。預試期3 天，正式試驗期為15 天?；A飼糧為粉料，參照NRC（2012）標準配置，組成及營養(yǎng)成分見表1。

表1 博落回散與葡萄糖氧化酶復合添加對仔豬的生長性能和腹瀉率的影響

1.3 測定指標及方法

1.3.1 生長性能

于試驗開始與結束時，稱量每頭空腹仔豬的初重和末重，計算平均日增重。試驗期間以重復組為單位，記錄投料量和余料量并計算平均日采食量、平均日增重和耗料增重比。

平均日增重= 增重/ （試驗天數(shù)×試驗豬頭數(shù)）；

平均日采食量= 耗料量/ （試驗天數(shù)×試驗豬頭數(shù)）；

耗料增重比= 耗料量/ 增重。

1.3.2 腹瀉率

試驗期間以重復組為單位，每天早上和下午定時觀察仔豬排糞情況，記錄腹瀉頭數(shù)，計算腹瀉率：

腹瀉率（%）=（試驗期腹瀉天數(shù)×腹瀉仔豬頭數(shù)）/（試驗仔豬頭數(shù)×試期天數(shù)）×100

1.3.3 營養(yǎng)物質的表觀消化率

試驗結束后，從每個重復組中選擇2 頭接近平均體重且健康的公豬，移入豬代謝籠中（購自北京環(huán)宇中科凈化工程有限公司），飼喂含0.25%二氧化鈦的對應組飼糧5 天后，于每天8:00、12:00 和16:00 按頭收集糞便，按糞樣重量10%加入6mol/L鹽酸，密封后置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆茫B續(xù)收集5 天的糞樣。將糞樣按重復組混合均勻后置于65℃烘箱烘至恒重，回潮24h后粉碎過40 目篩待測。采用指示劑法測定每組飼糧中干物質、粗蛋白、能量的消化率。飼糧和糞樣中的粗蛋白用凱氏定氮法測定，能量用全自動氧彈測熱儀測定。養(yǎng)分消化率計算公式如下：

某養(yǎng)分消化率（%）=[1- (b×c)/(a×d)]×100

式中：a 為飼糧中某養(yǎng)分含量（%），b為糞樣中某養(yǎng)分含量（%），c 為飼糧中鈦含量（%），d 為糞樣中鈦含量（%）。

1.3.4 血液生化指標

試驗結束后，每重復組挑選1 頭接近該組平均體重的仔豬，通過空腹前腔靜脈采集空腹血液樣本5 mL，3000 r/min 離心10 min分離血清分裝后存放于-20℃待測。使用日立7600 全自動生化儀測定谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、尿素氮（UREA）含量，采用豬免疫球蛋白酶聯(lián)免疫反應試劑盒檢測免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）含量，采用豬白細胞介素酶聯(lián)免疫反應試劑盒檢測白介素-2（IL-2）、白介素-6（IL-6）、白介素-10（IL-10）含量，采用丙二醛測試盒、總超氧化物歧化酶測試盒、谷胱甘肽過氧化物酶測試盒分別檢測丙二醛（MDA）含量、總超氧化物歧化酶（SOD）活力、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活力，上述試劑盒購于南京建成生物工程研究所，具體操作按試劑盒說明進行。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)經過Excel 初步處理后，利用SPSS 21.0 統(tǒng)計軟件進行方差分析，差異顯著時采用Duncan’s 方法對各組間平均數(shù)進行多重比較，結果以“平均值±標準差”表示。

2 結果

2.1 博落回散與葡萄糖氧化酶復合添加對仔豬生長性能和腹瀉率的影響

由表1 可知，在試驗期內，各組間仔豬的初重和日增重差異不顯著（P＞0.05）。與對照組相比，抗生素組和試驗組的耗料增重比分別降低了13.13% 和15.15%（P＜0.05），抗生素組末重提高9.75%（P＜0.05）、日采食量提高8.74%（P＜0.05），抗生素組和試驗組的腹瀉率分別降低39.29%、33.11%（P＜0.05）。

2.2 博落回散與葡萄糖氧化酶復合添加對仔豬養(yǎng)分消化率的影響

由表2 可知，與對照組相比，抗生素組和試驗組的干物質消化率分別顯著提高了21.39%和25.42%（P＜0.05），粗蛋白消化率分別顯著提高的30.02%和28.28%（P＜0.05），總能消化率分別顯著提高了13.96%和16.54%（P＜0.05）?？股亟M和試驗組的養(yǎng)分消化率差異不顯著（P＞0.05）。

表2 博落回散與葡萄糖氧化酶復合添加對仔豬養(yǎng)分消化率的影響

2.3 博落回散與葡萄糖氧化酶復合添加對仔豬血液生化指標的影響

由表3 可知，與對照組相比，試驗組的血清AST 含量顯著降低24.59%（P＜0.05）；試驗組的血清SOD 活力、GSH-Px 活力和IL-6、IL-10 分別提高26.16%、34.02%和42.56%、36.38%，均差異顯著（P＜0.05）；抗生素組和試驗組血清IgG 含量分別提高50.23%、64.24%（P＜0.01），其余指標各組間未發(fā)現(xiàn)顯著差異。

3 討論

3.1 博落回散與葡萄糖氧化酶復合添加對仔豬生長性能及養(yǎng)分消化率的影響

本試驗期內博落回散和葡萄糖氧化酶復合劑、抗生素均有提高仔豬日增重、顯著降低耗料增重比、顯著提高養(yǎng)分消化率的效果，博落回散和葡萄糖氧化酶復合劑與抗生素的效果差異不顯著。滿意等（2013）研究表明，添加博落回提取物對斷奶仔豬具有促生長效果，且效果要優(yōu)于抗生素（土霉素、抗敵素和黃霉素）。博落回的促生長效果的機制為血根堿能夠抑制膽堿酯酶活性、刺激唾液分泌等作用，提高動物采食量；博落回具有抗炎作用，能夠通過介導腸組織黏膜相關信號通路，修復和改善黏膜和絨毛，促進腸道健康，促進腸上皮細胞的增殖和分化，從而提高對營養(yǎng)物質的吸收。侯振平等（2017）研究發(fā)現(xiàn)，添加葡萄糖氧化酶不能提高斷奶仔豬的生產性能，但能夠提高干物質、粗蛋白和總能的消化率。諸多其他關于葡萄糖氧化酶對斷奶仔豬生產性能影響的研究結果表明，飼糧中添加葡萄糖氧化酶能夠提高斷奶仔豬的日增重、降低耗料增重比。大部分研究認為葡萄糖氧化酶具有益生和酸化的作用，能夠提高仔豬對營養(yǎng)物質的吸收和利用，同時提高腸道的健康水平。本研究結果表明，博落回散和葡萄糖氧化酶的添加顯著降低了耗料增重比、顯著提高干物質、粗蛋白和總能的消化率，促生長效果與前人研究結果基本一致。

3.2 博落回散與葡萄糖氧化酶復合添加對仔豬腹瀉率的影響

仔豬斷奶后常見腹瀉疾病，根據(jù)產生原因可分為營養(yǎng)性腹瀉和病理性腹瀉兩大類。過往報道顯示，斷奶仔豬腹瀉多與斷奶過程中受到的應激有關，其中食物由液體乳汁轉變?yōu)楣腆w飼糧而導致的營養(yǎng)性應激最為突出。此前研究中，湯海鷗等（2015）報道，在母豬飼糧中添加100mg/kg葡萄糖氧化酶，仔豬生長性能提高，腹瀉率降低（P＜0.05）；戴波（2015）研究表明在仔豬飼糧中添加0.5mg/kg 血根堿能有效預防由大腸桿菌、沙門氏菌引起的病理性腹瀉，1mg/kg 治療效果與硫酸慶大霉素相當，此結果與夏超篤等（2010）的結果相一致。博落回散和葡萄糖氧化酶復合添加能夠有效提高斷奶仔豬對固體飼糧中養(yǎng)分的消化率，降低營養(yǎng)性腹瀉，同時能夠改善腸道環(huán)境，預防和治療有害菌造成的病理性腹瀉。本試驗結果顯示，博落回散和葡萄糖氧化酶復合添加有顯著降低仔豬腹瀉率的效果，與抗生素添加的效果差異不顯著。

3.3 博落回散與葡萄糖氧化酶復合添加對仔豬血液生化指標的影響

谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶主要分布于動物肝細胞及其他組織細胞內，正常情況下這兩種酶在血液中的活性很低，但是當肝臟受到損傷時，這兩種酶會進入血液中，因此，血液中這兩種酶活性可反映肝臟功能狀況。本研究中，博落回散與葡萄糖氧化酶復合添加可降低血液中谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶活性，尤其是顯著降低谷草轉氨酶活性，表明博落回散與葡萄糖氧化酶復合添加對仔豬肝臟功能具有一定的保護作用。

機體內酶類氧自由基清除劑SOD 和GSH-Px 構成酶促抗氧化體系，MDA 是脂質過氧化的代謝產物，間接反映氧自由基對細胞的損傷程度，當機體內自由基增多，機體組織將使內源性抗氧化劑系統(tǒng)活力增強，防止自由基損傷產生。侯振平等（2017）發(fā)現(xiàn)，葡萄糖氧化酶能夠顯著提高仔豬血清SOD 活性，不同程度提高了血清GSH-Px 活性。夏超篤等（2018）研究表明，飼糧中添加0.1%的博落回提取物，顯著降低血清總MDA 含量，提高了血清總SOD 活性。本研究中，博落回散和葡萄糖氧化酶復合使用能顯著提高血清SOD 和GSH-Px活性，MDA 含量雖差異不顯著，但趨勢基本一致。

測定血清免疫球蛋白是檢查體液免疫功能最常用的方法，通常檢測IgA、IgG、IgM 可代表血清免疫球蛋白的水平。宋海彬等（2010）報道葡萄糖氧化酶顯著提高了42 日齡肉雞血清IgG水平。穆淑琴等（2018）研究發(fā)現(xiàn)，仔豬飼糧中添加400 g/t 的葡萄糖氧化酶后，仔豬血清IgA、IgG 和IgM含量顯著高于對照組和抗生素組。本研究中博落回散和葡萄糖氧化酶對仔豬血清IgG的含量有顯著的提高，提高效果大于抗生素。本研究結果與前人研究相同，表明葡萄糖氧化酶能提高仔豬免疫球蛋白水平，增強體液免疫能力，從而增強了仔豬的免疫功能。

細胞因子是一類具有激素樣活性的多肽分子，由免疫細胞及其相關細胞所產生，在免疫應答與免疫調節(jié)中發(fā)揮著重要作用。IL-6、IL-10 可刺激B 細胞、T細胞、干細胞和雜交瘤細胞增殖，促進B 細胞產生免疫球蛋白。陳瑾等（2020）研究發(fā)現(xiàn)葡萄糖氧化酶顯著提高了仔豬血清細胞因子IL-6，增強了仔豬的免疫功能。本研究發(fā)博落回散和葡萄糖氧化酶對仔豬血清細胞因子IL-6、IL-10 均有顯著提高，與前人研究基本相符。

4 結論

在本試驗條件下，仔豬飼糧中組合添加博落回散和葡萄糖氧化酶能夠增強仔豬抗氧化能力和免疫能力，降低腹瀉率，有效提高仔豬生長性能和養(yǎng)分消化率，其抗腹瀉和促生長效果與抗生素相當，能夠有效替代抗生素。

參考文獻：（略）