黃曉春a，莫秋玉a，黃銀燕b， 秦麗娟

(桂林市人民醫(yī)院a.血液科；b.檢驗(yàn)科，廣西 桂林 541002)

原發(fā)免疫性血小板減少癥(primary immune thrombocytopenia，ITP)是臨床最常見出血性疾病，是獲得性自身免疫性疾病。該病發(fā)病率為5～10/10萬(wàn)，60歲以上是高發(fā)群體[1]，其中難治性患者治療效果較差，有大出血風(fēng)險(xiǎn)。臨床病例常表現(xiàn)血清T淋巴細(xì)胞亞群異常和血清炎性因子水平升高。基于此，本研究探討益生菌治療難治性原發(fā)免疫性血小板減少癥的效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年1 月至 2020年8月桂林市人民醫(yī)院收治的符合成人難治性ITP 診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]的患者24例，按照隨機(jī)數(shù)字表法分為益生菌組和對(duì)照組，每組各12例。益生菌組男5例，女7例；年齡19～74歲，平均51.5歲。對(duì)照組男7例，女5例；年齡25～80歲，平均46.3歲。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 方法

對(duì)照組口服達(dá)那唑(江蘇聯(lián)環(huán)藥業(yè)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字：H20023116)治療，400 mg/d， 2次/d；口服環(huán)孢素(杭州中美華東制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字：H10960122)，3 mg·kg-1·d-1， 2次/d。益生菌組口服雙歧桿菌乳桿菌三聯(lián)活菌片(內(nèi)蒙古雙奇藥業(yè)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字：S19980004，規(guī)格：0.5 g/片)，2片/次，2次/d，口服達(dá)那唑400 mg/d，2次/d，口服環(huán)孢素3 mg·kg-1·d-1， 2次/d。兩組均連續(xù)治療8周。

1.3 觀察指標(biāo)

①血小板計(jì)數(shù)。采用DxFLEX流式細(xì)胞儀檢測(cè)。②血清T淋巴細(xì)胞亞群。治療前后抽取靜脈血標(biāo)本6 ml，以3 500 r/min的速度離心5 min，分離得到血清，采用免疫熒光法檢測(cè)兩組患者治療前后T淋巴細(xì)胞CD3+、CD4+、CD8+、 CD25+、CD19+水平。③血清炎性因子。血清檢測(cè)方法同上，采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 血小板計(jì)數(shù)

治療前，兩組血小板計(jì)數(shù)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后，益生菌組血小板計(jì)數(shù)高于對(duì)照組(P<0.05)，見表1。

表1 兩組血小板計(jì)數(shù)比較

2.2 血清T淋巴細(xì)胞亞群

治療前，兩組血清T淋巴細(xì)胞亞群水平比較差異無統(tǒng)計(jì)意義(P>0.05)；治療后，益生菌組CD3+、CD4+、CD25+水平高于對(duì)照組(P<0.05)，見表2。

表2 兩組血清T淋巴細(xì)胞亞群比較

續(xù)表

2.3 血清炎性因子

治療前，兩組血清炎性因子水平比較差異無統(tǒng)計(jì)意義(P>0.05)；治療后，益生菌組IL-12、TNF-α、IFN-γ水平低于對(duì)照組(P<0.05)，見表3。

表3 兩組血清炎性因子比較

3 討論

ITP是免疫功能紊亂導(dǎo)致的疾病，異常免疫活化介導(dǎo)破壞血小板加速和巨核細(xì)胞產(chǎn)生血小板不足[2]。治療關(guān)鍵是抑制異常免疫，其中細(xì)胞免疫是重點(diǎn)。難治性ITP存在持續(xù)免疫異常，常規(guī)治療效果差，血小板計(jì)數(shù)持續(xù)低于正常值，容易大出血，有生命危險(xiǎn)。難治性ITP治療藥物常選擇達(dá)那唑、環(huán)孢素等，但效果不理想。本研究中難治性ITP患者血小板嚴(yán)重減少，治療前血清CD3+、CD4+及CD25+淋巴細(xì)胞亞群的比例明顯下降，炎性因子IL-12、TNF-α、IFN-γ表達(dá)明顯升高。本研究用雙歧桿菌乳桿菌三聯(lián)活菌聯(lián)合達(dá)那唑、環(huán)孢素口服治療8周，觀察到加用益生菌治療后，血小板計(jì)數(shù)升高比對(duì)照組明顯；血清CD3+、CD4+及CD25+淋巴細(xì)胞亞群比例較對(duì)照組增加明顯；隨著病情好轉(zhuǎn)，血清IL-12、TNF-α、IFN-γ表達(dá)水平比對(duì)照組均下降明顯，以上提示益生菌可通過改善細(xì)胞免疫，提高治療效果。

觀察異常的T淋巴細(xì)胞亞群及炎性因子對(duì)機(jī)體細(xì)胞免疫的作用機(jī)制發(fā)現(xiàn)，當(dāng)CD4+亞群下降常出現(xiàn)免疫反應(yīng)過度時(shí)，CD4+淋巴細(xì)胞可分化為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cells，Treg)，該亞群常表達(dá)CD25+，具有強(qiáng)大的免疫抑制性，在維持自身免疫耐受、免疫穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要作用[3]。炎性因子IL-12、TNF-α、IFN-γ等由淋巴細(xì)胞分泌參與細(xì)胞免疫[4]，淋巴細(xì)胞亞群異常導(dǎo)致炎性因子也處于異常表達(dá)水平，對(duì)機(jī)體細(xì)胞進(jìn)行破壞。T淋巴細(xì)胞的損傷、血清炎性因子失衡成為ITP重要特點(diǎn)[2]。所以，改善淋巴細(xì)胞亞群失衡和降低炎性細(xì)胞因子有利于改善ITP的病情。

益生菌是指在攝入足夠量的條件下對(duì)宿主產(chǎn)生有益作用的活微生物，主要包括雙歧桿菌、乳酸桿菌、乳酸球菌及鏈球菌[5]。本研究用的雙歧桿菌乳桿菌三聯(lián)活菌片是益生菌。機(jī)體的腸道菌群能夠與宿主免疫系統(tǒng)互相作用[6]，健康狀態(tài)下，協(xié)助維持機(jī)體正常免疫功能。在疾病狀態(tài)下，腸道菌群發(fā)生失衡，益生菌減少，可以激活效應(yīng)T細(xì)胞，破壞免疫抑制調(diào)節(jié)T細(xì)胞平衡，同時(shí)，炎性因子升高，形成惡性循環(huán)[7]。已有報(bào)告指出，用益生菌治療和免疫異常相關(guān)的疾病[8-9]，與本研究結(jié)果一致。益生菌可以降低炎性因子，包括TNF-α、IL-12[10]。目前，認(rèn)為腸道菌群的代謝產(chǎn)物，如短鏈脂肪酸，乙酸丙酸丁酸通過不同的通路作用于T淋巴細(xì)胞，參與免疫狀態(tài)的改變[11]。

綜上所述，難治性ITP患者的血清CD3+、CD4+、CD25+淋巴細(xì)胞亞群比例持續(xù)下降，血清炎性因子IFN-γ、TNF-α、IL-12表達(dá)持續(xù)增高，在益生菌聯(lián)合常規(guī)藥物治療后，與對(duì)照組比較，異常免疫指標(biāo)改善明顯，血小板計(jì)數(shù)有升高，未觀察到明顯不良反應(yīng)。