余道武，余天霧，茍 毅，楊陸蒙

胰腺癌是臨床常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，具有進(jìn)展快、病死率高的特點[1]。因其起病隱匿且早期無典型癥狀，導(dǎo)致多數(shù)患者就診時已進(jìn)展至中晚期，錯過根治性手術(shù)治療的最佳時期，故預(yù)后較差[2]。為改善胰腺癌患者的預(yù)后，延長生存期，急需尋找便捷、準(zhǔn)確的診斷方法，以提高早期診斷率[3]。目前，胰腺癌診斷除CT、MRI等影像學(xué)方法外，還常用癌胚抗原、糖類抗原199等腫瘤標(biāo)志物，但此類標(biāo)志物診斷胰腺癌的敏感度、特異度較差，早期通常無明顯升高，檢測到其異常升高時通常疾病已發(fā)展至中晚期[4]。因此，有必要尋找敏感度與特異度更高的生物標(biāo)志物，以提高胰腺癌的早期診斷率。胰腺癌具有較強的浸潤、轉(zhuǎn)移特性，是其預(yù)后較差的主要原因[5]。黏附分子異常表達(dá)在腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用，其中細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)是目前研究較多的黏附分子，在免疫應(yīng)答、腫瘤轉(zhuǎn)移等多種病理、生理過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[6]；富亮氨酸α2糖蛋白1(LRG1)是一種抗凋亡因子，其過度表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的遷移有關(guān)[7]；三結(jié)構(gòu)域蛋白14(TRIM14)屬三結(jié)構(gòu)域蛋白家族成員，能夠參與抗細(xì)胞凋亡、促進(jìn)血管生成、腫瘤轉(zhuǎn)移等諸多過程[8]。本研究通過檢測胰腺癌組織ICAM-1、LRG1、TRIM14表達(dá)情況，分析三者在胰腺癌中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 納入2016年3月—2018年3月我院收治的86例胰腺癌作為研究對象，其中男49例，女37例；年齡34～80(58.27±11.65)歲。導(dǎo)管腺癌46例，囊腺癌12例，黏液腺癌13例，鱗腺癌8例，低分化惡性內(nèi)分泌瘤7例。①納入標(biāo)準(zhǔn)：均符合胰腺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)手術(shù)后病理檢查確診；術(shù)前未接受任何抗腫瘤治療；對本研究知情同意；臨床資料完整。②排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他部位惡性腫瘤者；合并嚴(yán)重的肝腎功能損傷者；未接受定期隨訪者。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)執(zhí)行。

1.2方法 收集患者癌組織及距離癌灶2 cm的癌旁組織標(biāo)本，常規(guī)固定并經(jīng)石蠟包埋切片，用于免疫組織化學(xué)檢查。

1.2.1ICAM-1、LRG1、TRIM14表達(dá)檢測：采用免疫組織化學(xué)法檢測，石蠟切片常規(guī)脫蠟脫水；室溫下使用3%過氧化氫-PBS阻斷內(nèi)源性過氧化物酶15 min，PBS沖洗3次，每次3 min；95 ℃條件下將切片置于枸櫞酸鹽緩沖液10 min，室溫下冷卻30 min，PBS沖洗3次，每次3 min，濾紙吸干；滴加山羊血清封閉液，放置于37 ℃濕盒內(nèi)孵育30～60 min；濾紙吸取封閉液，加入一抗(1∶100)，4 ℃條件下過夜；PBS沖洗3次，每次3 min，加入生物素標(biāo)記的羊抗兔二抗，37 ℃條件下孵育30～60 min；PBS沖洗3次，每次3 min，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的三抗鏈霉卵白素35～50 μl，37 ℃條件下孵育30～60 min；PBS沖洗3次，每次3 min，滴加DAB，避光顯色，蒸餾水沖洗，10%蘇木精復(fù)染；梯度乙醇脫水、二甲苯透明、封片。陰性對照采用PBS，陽性對照購自濟(jì)南芯博生物科技有限公司。

1.2.2ICAM-1、LRG1、TRIM14表達(dá)陽性判定標(biāo)準(zhǔn)[9]：高倍鏡下隨機(jī)選取10個視野，依據(jù)染色強度及陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)進(jìn)行計分。①染色強度：未顯色0分，淡黃色1分，黃色2分，棕黃色3分。②陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)：<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。染色強度與陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)分值相加為總得分，1分為-，2～3分為+，4～5分為++，6～7分為+++；其中-和+記為低表達(dá)，++和+++記為高表達(dá)。

1.2.3神經(jīng)浸潤判定[10]：組織切片在100倍光學(xué)顯微鏡下觀察，若胰內(nèi)神經(jīng)纖維或胰周神經(jīng)干、神經(jīng)叢發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞則可判定為神經(jīng)浸潤。

1.3治療及隨訪 56例給予手術(shù)輔以放化療，30例給予手術(shù)輔以化療，根據(jù)腫瘤大小與位置選擇術(shù)式，胰頭癌實施胰十二指腸切除術(shù)聯(lián)合消化道重建，胰體尾部腫瘤實施胰腺遠(yuǎn)端切除術(shù)。所有患者均每2個月門診隨訪1次，隨訪時間為3年。

1.4觀察指標(biāo) 分別比較ICAM-1、LRG1、TRIM14在胰腺癌組織與癌旁組織中的表達(dá)情況，分析不同臨床病理特征胰腺癌患者ICAM-1、LRG1、TRIM14表達(dá)情況，觀察不同ICAM-1、LRG1、TRIM14表達(dá)胰腺癌患者的生存率，并分析三者與胰腺癌患者預(yù)后的關(guān)系。

2 結(jié)果

2.1胰腺癌組織與癌旁組織ICAM-1、LRG1、TRIM14表達(dá)比較 胰腺癌組織ICAM-1、LRG1、TRIM14高表達(dá)率均高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

表1 胰腺癌組織與癌旁組織ICAM-1、LRG1、TRIM14表達(dá)情況比較[例(%)]

2.2不同臨床病理特征胰腺癌患者ICAM-1、LRG1、TRIM14表達(dá)情況 TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤最大徑>2 cm、中低分化、有神經(jīng)浸潤、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胰腺癌患者ICAM-1、LRG1、TRIM14高表達(dá)率分別高于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、腫瘤最大徑≤2 cm、高分化、無神經(jīng)浸潤、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(P<0.05，P<0.01)。見表2。

表2 不同臨床病理特征胰腺癌患者ICAM-1、LRG1、TRIM14高表達(dá)率比較(例)

2.3不同ICAM-1、LRG1、TRIM14表達(dá)胰腺癌患者的生存分析 ICAM-1低表達(dá)胰腺癌患者的3年生存率為30.43%，高于ICAM-1高表達(dá)患者的14.29%(P<0.05)。LRG1低表達(dá)胰腺癌患者3年生存率為33.33%，高于LRG1高表達(dá)患者的12.90%(P<0.05)。TRIM14低表達(dá)胰腺癌患者3年生存率為32.00%，高于TRIM14高表達(dá)患者的13.11%(P<0.05)。見圖1。

圖1 不同ICAM-1、LRG1、TRIM14表達(dá)胰腺癌患者的生存曲線

2.4影響胰腺癌患者預(yù)后死亡的多因素Logistic回歸分析 ICAM-1、LRG1、TRIM14高表達(dá)是胰腺癌患者預(yù)后死亡的獨立危險因素(P<0.01)。見表3。

表3 影響胰腺癌患者預(yù)后死亡的多因素Logistic回歸分析

3 討論

胰腺屬腹膜后位器官，位置較為隱蔽，因此胰腺癌的早期診斷較困難。又因其周圍有重要器官及血管，對腹主動脈、門靜脈等大血管及膽總管具有較強侵襲性，故胰腺癌是一種預(yù)后較差的惡性腫瘤。

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是胰腺癌最主要的轉(zhuǎn)移方式，除此之外還可直接浸潤神經(jīng)束膜并沿束膜間隙轉(zhuǎn)移，這種浸潤轉(zhuǎn)移方式是導(dǎo)致臨床早期診斷、治療困難及預(yù)后較差的主要原因[11]。在胰腺癌的浸潤、轉(zhuǎn)移機(jī)制中，基因發(fā)揮著重要作用，但隨著研究深入，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)黏附分子在其中具有重要影響[12]。黏附分子是腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移的必要條件，其異常表達(dá)發(fā)揮著關(guān)鍵作用。ICAM-1屬免疫球蛋白超家族成員，為目前研究較多的黏附分子，除了參與細(xì)胞間的黏附作用外，還在多種炎癥細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞表面表達(dá)[13]。ICAM-1的正常表達(dá)對于免疫系統(tǒng)清除腫瘤細(xì)胞有一定的積極作用，但其持久、增強表達(dá)則對機(jī)體免疫系統(tǒng)有抑制作用，使腫瘤細(xì)胞能夠逃避免疫監(jiān)視[14]。根據(jù)既往研究，ICAM-1的表達(dá)與大腸癌、乳腺癌等惡性腫瘤的臨床分期有密切關(guān)系，且在有淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者中高表達(dá)率明顯升高[15]。本研究發(fā)現(xiàn)，胰腺癌組織ICAM-1高表達(dá)率高于癌旁組織，證實ICAM-1在胰腺癌組織中存在異常高表達(dá)。有研究證實，異常血管生成在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[16]。LRG1是中性粒細(xì)胞早期分化標(biāo)志物，可通過調(diào)控轉(zhuǎn)化生長因子-β信號通路促進(jìn)血管生成，參與細(xì)胞凋亡，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期[17]。除此之外，上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化是腫瘤細(xì)胞獲得侵襲與轉(zhuǎn)移能力的重要過程，轉(zhuǎn)化生長因子-β已被證實在此過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[18-19]。本研究顯示，胰腺癌組織LRG1高表達(dá)率高于癌旁組織，提示其可能與胰腺癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。TRIM14屬三結(jié)構(gòu)域蛋白家族成員，已被證實能夠參與免疫調(diào)節(jié)、血管生成、腫瘤轉(zhuǎn)移等諸多過程，關(guān)于其功能研究的報道較少，且主要集中于先天性免疫方面[20]。關(guān)于TRIM14在惡性腫瘤中的作用，僅在非小細(xì)胞肺癌、胃癌中有少量報道[21]。本研究發(fā)現(xiàn)，胰腺癌組織TRIM14高表達(dá)率高于癌旁組織，因此推測TRIM14高表達(dá)在胰腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。

本研究還發(fā)現(xiàn)，ICAM-1、LRG1、TRIM14在胰腺癌組織中的表達(dá)均與患者的主要惡性病理特征相關(guān)，具體表現(xiàn)為TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤最大徑>2 cm、中低分化、有神經(jīng)浸潤、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胰腺癌患者ICAM-1、LRG1、TRIM14高表達(dá)率分別高于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、腫瘤最大徑≤2 cm、高分化、無神經(jīng)浸潤、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，提示ICAM-1、LRG1、TRIM14可能參與胰腺癌的進(jìn)展、浸潤與轉(zhuǎn)移相關(guān)調(diào)控；進(jìn)一步多因素Logistic回歸分析顯示，ICAM-1、LRG1、TRIM14高表達(dá)是胰腺癌患者預(yù)后死亡的獨立危險因素；生存分析提示，ICAM-1、LRG1、TRIM14高表達(dá)胰腺癌患者3年生存率均顯著降低。以上結(jié)果證實，ICAM-1、LRG1、TRIM14在胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤、轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用，其在癌組織中的表達(dá)水平對患者預(yù)后具有一定評估價值。

綜上所述，胰腺癌組織ICAM-1、LRG1、TRIM14表達(dá)水平與患者的臨床病理特征密切相關(guān)，可作為患者預(yù)后評估的指標(biāo)，三者的作用機(jī)制有望為胰腺癌的治療提供新思路。