傅雅麗

（黃石市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，湖北黃石 435000）

磺胺類藥物是指具有對(duì)氨基苯磺酰胺結(jié)構(gòu)的一類藥物的總稱，是一類用于預(yù)防和治療細(xì)菌感染性疾病的化學(xué)治療藥物[1]。磺胺類藥物抗菌譜較廣，被廣泛地用于獸醫(yī)臨床和畜牧養(yǎng)殖業(yè)中動(dòng)物疾病治療?；前奉悮埩裟芷茐娜说脑煅到y(tǒng)，磺胺二甲嘧啶等甚至有潛在致癌性，人體中長期存在磺胺會(huì)導(dǎo)致許多細(xì)菌對(duì)磺胺藥物產(chǎn)生抗藥性[1]。因此，針對(duì)動(dòng)物組織及牛奶中的磺胺類抗生素，歐盟規(guī)定其最大殘留量為100 μg·kg-1[2]；日本規(guī)定食品中不得檢出磺胺類藥物[1]。我國國家標(biāo)準(zhǔn)GB 31650—2019 制訂了在動(dòng)物性食品中磺胺二甲嘧啶的限量為25 ～100 μg·kg-1，其他磺胺類抗生素殘留總和為100 μg·kg-1[3]。

目前，GB/T 21316—2007 檢測(cè)動(dòng)物源性食品中磺胺藥物殘留的方法是采用微波提取法，使用不方便；GB 31658.17—2021 中只包含16 種磺胺藥物殘留的檢測(cè)方法，范圍比較局限。為了提高檢測(cè)效率，本文建立了一種超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)檢測(cè)動(dòng)物源性食品中23 種磺胺藥物殘留含量的分析方法，該方法簡單快速、靈敏度高。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

乙腈中23 種磺胺溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司）；甲醇（質(zhì)譜純，默克公司）；甲酸（色譜純，安譜科技）；乙腈（分析純，國藥集團(tuán)）；實(shí)驗(yàn)室用水來自Milli-Q 超純水系統(tǒng)。

1.2 儀器與設(shè)備

Waters Xevo TQD 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀（沃特斯公司）；超聲儀（鼎泰恒勝）；離心機(jī)（Backman coulter）。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

精密量取0.100 mL 乙腈中23 種磺胺溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（100 μg·mL-1），用乙腈定容至10 mL 容量瓶中，作為1 000 ng·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液。分別精密量取上述混合標(biāo)準(zhǔn)中間液0.05 mL、0.10 mL、 0.25 mL、0.50 mL、0.75 mL 和1.00 mL，用經(jīng)提取和凈化的空白試樣基質(zhì)定容至10 mL 容量瓶中，配制的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度為5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、25 ng·mL-1、50 ng·mL-1、75 ng·mL-1和100 ng·mL-1。

1.4 儀器條件

1.4.1 色譜條件

色譜柱：Waters Acquity UPLC BEH C18（2.1 mm ×50 mm，1.7 μm）；進(jìn)樣量：5μL；柱溫：40 ℃；流動(dòng)相：A為0.1%甲酸水溶液，B為甲醇；梯度洗脫：0～ 0.3 min 95%A；0.3 ～8.0 min 95%A ～50%A；8.0 ～ 9.0 min 50%A ～0%A；9.5 ～9.6 min 0%A ～95%A；9.6 ～13.0 min 95%A；流速：0.2 mL·min-1。

1.4.2 質(zhì)譜條件

離子源：ESI；掃描方式：正離子掃描；毛細(xì)管電壓：3.0 kV；源溫度：150 ℃；脫溶劑溫度： 450 ℃；錐孔氣體流量：50 L·Hr-1；脫溶劑氣體流量：1 000 L·Hr-1；檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式（MRM）。

1.5 樣品處理

稱取試料5 g（準(zhǔn)確至0.01 g），加入0.1%甲酸乙腈10 mL，渦旋1 min，超聲20 min，于4 ℃以下、10 000 r·min-1離心5 min，收集上清液。取上述上清液5 mL 過固相萃取柱（6 cc，Oasis PRiME HLB），收集洗脫液，45 ℃水浴氮?dú)獯到?。加?.1%甲醇-甲醇（95 ∶5）1 mL，渦旋溶解殘余物，0.22 μm 微孔濾膜過濾，待測(cè)。23 種磺胺類化合物MRM 模式質(zhì)譜優(yōu)化參數(shù)及保留時(shí)間見表1。

表1 23 種磺胺類化合物MRM 模式質(zhì)譜優(yōu)化參數(shù)及保留時(shí)間

2 結(jié)果與分析

2.1 提取方法的選擇

目前，國標(biāo)中檢測(cè)動(dòng)物源性食品中磺胺藥物殘留的提取方法有微波提取法[4]、液-液萃取法[5]和QuEChERS 法[6]等，但操作步驟多。本次采用Oasis PRiME HLB 這種填料的SPE，能清除樣品中99%的磷脂和脂肪，且無需活化，處理過程簡單、方便、快速。

（續(xù)表1）

2.2 各物質(zhì)線性范圍及檢出限

各目標(biāo)物質(zhì)在5 ～100 ng·mL-1，線性相關(guān)良好，相關(guān)系數(shù)均≥0.995 0，滿足日常檢測(cè)濃度的需求。以信噪比（S/N）為3 計(jì)算檢出限，結(jié)果見表2。

表2 23 種磺胺類化合物的線性方程、相關(guān)系數(shù)及方法檢出限

2.3 方法回收率及精密度

在空白豬肉中添加磺胺混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，按1.5 法處理，進(jìn)行添加回收率測(cè)定，添加水平分別為 2 μg·kg-1、20 μg·kg-1、32 μg·kg-1，每份樣品分別測(cè)定6 次。由表3 可知，23 種磺胺類化合物的回收率在75.6%～101.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.0%～11.8%。

表3 空白樣品中添加23 種磺胺類化合物回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）

（續(xù)表2）

3 結(jié)論

本文建立了同時(shí)檢測(cè)動(dòng)物源性食品中23 種磺胺類化合物殘留量的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法，該方法快速、高效、準(zhǔn)確，檢出限和檢測(cè)范圍均滿足《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中獸藥最大殘留限量》（GB 31650—2019）對(duì)23 種磺胺類化合物的要求，可滿足日常檢測(cè)，為監(jiān)管部門提供了強(qiáng)有力的技術(shù) 支撐。