張淑正，張效娟，張占蛟

幽門螺桿菌(helicobacter pylori, HP)是主要存在于胃黏膜上皮和胃腺體黏膜之間的一種細(xì)菌，是短桿狀、兩端微彎的革蘭陰性桿菌。HP與慢性胃炎、消化性潰瘍、胃癌等關(guān)系密切。隨著免疫組化和分子病理技術(shù)的迅猛發(fā)展，部分病理學(xué)檢查中常用的特殊染色方法和項目漸漸被取代或作用被弱化，但顯示HP的特殊染色方法仍然被廣泛應(yīng)用，且其特染方法種類較多，其中以亞甲藍染色法的HP陽性檢測率相對較高[1-2]。我科室長期對亞甲藍染色法檢測HP進行深入探索和實踐，并在操作細(xì)節(jié)上進行改進，找到了一種提升HP切片染色質(zhì)量的簡便方法，現(xiàn)介紹如下。

1 材料與方法

1.1 材料收集2021年6月5日～6月20日南京金域醫(yī)學(xué)檢驗所有限公司病理科胃鏡活檢標(biāo)本100例，均經(jīng)10%中性福爾馬林固定4～8 h。行常規(guī)活檢取材，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，浸蠟，石蠟包埋。每例標(biāo)本均制作成1個蠟塊，每個蠟塊制成3 μm厚白片2張，其中1張設(shè)為實驗組(100張)；另1張設(shè)為對照組(100張)。

1.2 染液配制亞甲藍染液：亞甲藍0.5 g，硼酸0.5 g溶于100 mL蒸餾水中，充分溶化后，加入亞甲藍0.5 g，再次充分混勻溶化。

1.3 方法

1.3.1傳統(tǒng)方法 切片脫蠟至水，自來水沖洗，置于亞甲藍染液中浸染5 min，自來水洗凈，吹風(fēng)機冷風(fēng)吹干，二甲苯透明，中性樹膠封固。

1.3.2改良法 切片脫蠟至水，自來水沖洗，置于亞甲藍染液染缸中時，旋轉(zhuǎn)染色架30 s，再靜止于染缸中浸染4.5 min，自來水洗凈，高濃度梯度乙醇(95%、100%、100%)快速脫水各10 s，二甲苯透明，中性樹膠封固。

1.3.3操作步驟 (1)兩組切片以同樣條件進行前處理：70 ℃恒溫烤箱烤片20 min，二甲苯Ⅰ和Ⅱ各5 min，梯度乙醇(100%、95%、90%、85%、75%)脫二甲苯至水，自來水沖洗。(2)對照組使用傳統(tǒng)方法操作進行染色，實驗組使用改良法操作進行染色。

2 結(jié)果

100例標(biāo)本分成的兩組切片合計200張，均經(jīng)兩名高年資病理醫(yī)師采用雙盲法閱片。(1)兩種方法之間的診斷結(jié)果一致性比較：對照組HP陽性43例，陰性57例；實驗組HP陽性43例，陰性57例。結(jié)果顯示：對照組與實驗組的HP陽性率診斷結(jié)果完全一致。(2)兩種方法之間的切片質(zhì)量差異比較：對照組切片透明度一度，背景清潔度一般，見大量散在、彌漫強折光紫黑色小點污染(圖1)；實驗組切片透明度良好，背景清潔，無散在折光小點污染(圖2)。結(jié)果顯示：兩者在切片質(zhì)量上差異有顯著性，改良法優(yōu)于傳統(tǒng)方法。

圖1 傳統(tǒng)方法染色：切片透明度一度，背景清潔度一般，見大量散在、彌漫強折光紫黑色小點污染 圖2 改良法染色：切片透明度良好，背景清潔，無散在折光小點污染

3 討論

HP與消化道多種疾病的發(fā)生相關(guān)，臨床診療過程中常需行HP檢測。組織學(xué)活檢中，胃鏡活檢組織使用HE染色不易使HP著色，診斷難度大，需使用特殊染色或免疫組化染色才能清晰地顯示HP，從而明確診斷。

HP的檢測方法有多種，組織學(xué)檢查中有W-S銀染色法、Giemsa染色法、亞甲藍染色法[3]、BASO染色法[4]、快速尿素酶法[2]、免疫組化法等。亞甲藍法又稱硼酸美藍法，其原理是亞甲藍可溶于水，電離成有色的陽離子，與帶陰離子的HP相結(jié)合著藍色[3]。該方法檢測HP陽性率高，操作步驟簡單，試劑來源方便，價格便宜，染液使用壽命長，染色結(jié)果可靠，被各醫(yī)院病理科廣泛應(yīng)用。傳統(tǒng)的亞甲藍法在染色完成后，未進行脫水處理，直接吹風(fēng)機吹干或自然晾干后封固，導(dǎo)致切片透明度不足，組織上常布滿強折光紫黑色小點或類晶體樣物，增加了診斷難度。

本科室在多年的探索過程中，發(fā)現(xiàn)亞甲藍染液隨著靜止時間的延長，其染液缸底部逐漸產(chǎn)生沉淀物，隨著沉淀物產(chǎn)生的增多，其染色效價開始下降，從而使HP陽性率降低。我科室通過在染色前或染色時進行染液的充分混勻，可使沉淀物重新溶化于染液中，促使染色效價開始回升，HP陽性率得到提升；同時發(fā)現(xiàn)此時使用高濃度乙醇(95%、100%)進行脫水，并不會洗脫或極少洗脫已結(jié)合于HP上的染料，其著色強度與傳統(tǒng)方法差異無顯著性；而經(jīng)過高濃度乙醇(95%、100%)脫水后的組織切片再經(jīng)二甲苯透明，可使組織切片在整個實驗過程中均保持濕潤狀態(tài)，組織和細(xì)胞未暴露在空氣中，其切片透明度比傳統(tǒng)方法顯著提升，且組織上無干擾診斷(甚至可能引起誤診)的強折光小點樣物，無“碳核”現(xiàn)象。