劉旭春 姚羽 張玲變 劉亞妮 王丹 周曉溪

(山西省食品藥品檢驗所，太原 030031)

克拉霉素為大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，主要適用于呼吸道感染、皮膚軟組織感染、根除幽門螺桿菌等[1-3]。目前國內(nèi)市場上克拉霉素口服固體制劑主要有克拉霉素片、分散片、膠囊、顆粒和緩釋片5種劑型?？死顾仄?、膠囊、顆粒主要執(zhí)行《中國藥典》2015年版標準，克拉霉素分散片執(zhí)行標準為《中國藥典》2010年版第二增補本，克拉霉素緩釋片目前沒有統(tǒng)一的標準，2020年國家藥品抽檢抽取到5家企業(yè)的樣品，執(zhí)行標準分別為YBH06702003-2016Z、YBH15382006-2016Z、YBH17582005-2016Z、YBH25772005-2016Z和YBH01642018。

本次國家藥品抽檢共抽取到249批次克拉霉素口服固體制劑，涉及49家生產(chǎn)企業(yè)、58個批準文號。其中，克拉霉素片95批次，克拉霉素分散片55批次，克拉霉素膠囊51批次，克拉霉素顆粒12批次，克拉霉素緩釋片36批次。依據(jù)現(xiàn)行質(zhì)量標準檢驗并結(jié)合探索性研究，本文對國內(nèi)市場上不同克拉霉素口服固體制劑的關(guān)鍵質(zhì)量屬性進行比較分析，探討產(chǎn)品存在的主要質(zhì)量問題，尋求提高產(chǎn)品質(zhì)量的方向，并對完善現(xiàn)行標準提出建議。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-20AT高效液相色譜儀；賽多利斯CPA225D電子天平；梅特勒V30水分滴定儀；戴安U3000/QE液質(zhì)聯(lián)用儀；SOTAX AT自動溶出儀；戴安U3000高效液相色譜儀；超純水機。

1.2 試藥

克拉霉素對照品(批號：130558-201904，含量：86.6%)由中國食品藥品檢定研究院提供；克拉霉素雜質(zhì)鑒別對照品為EP對照品；克拉霉素雜質(zhì)J對照品由J2企業(yè)提供。乙腈為色譜純；磷酸二氫鉀、氫氧化鉀、氫氧化鈉為分析純；水為超純水。

2 試驗方法

2.1 法定標準檢驗

按照法定標準[4-15]，對克拉霉素片、分散片、膠囊、顆粒以及緩釋片分別進行檢驗。

2.2 探索性研究

根據(jù)本品自身特點，結(jié)合法定檢驗中出現(xiàn)的問題，通過文獻檢索[16，17]、企業(yè)調(diào)研等，對產(chǎn)品的雜質(zhì)譜、溶出曲線、影響藥物穩(wěn)定性的因素等進行研究。

2.2.1 雜質(zhì)譜分析

《中國藥典》2015年版二部克拉霉素片、膠囊，《中國藥典》2010年版第二增補本克拉霉素分散片，H1、H2、H3企業(yè)克拉霉素緩釋片有關(guān)物質(zhì)檢測方法均采用等度洗脫，僅控制單個雜質(zhì)或總雜質(zhì)，且限度較寬；H4企業(yè)克拉霉素緩釋片有關(guān)物質(zhì)檢測方法采用TLC法，只能進行半定量；克拉霉素顆粒無有關(guān)物質(zhì)檢查項。參考EP10.0克拉霉素標準建立了本品雜質(zhì)譜的分析方法。

(1)色譜條件：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠(4.6 mm×250 mm，5 μm)為填充劑；以磷酸鹽緩沖液(取4.76 g/L磷酸二氫鉀溶液，用10%磷酸或45%氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)pH值至4.4)為流動相A；乙腈為流動相B；按表1進行線性梯度洗脫；檢測波長為205 nm；柱溫為40℃；流速為1.2 mL/min；進樣體積為10 μL。

表1 梯度洗脫程序Tab.1 Gradient elution procedure

(2)雜質(zhì)的確證：采用LC-MS雙三元柱切換技術(shù)在線脫鹽進行雜質(zhì)確證。一維色譜條件同上，二維色譜以10 mmol/L碳酸氫銨溶液為流動相A；乙腈為流動相B；按表2進行線性梯度洗脫。根據(jù)一維液相出峰時間，設(shè)置質(zhì)譜閥切換參數(shù)，進行二級質(zhì)譜掃描。

表2 梯度洗脫程序Tab.2 Gradient elution procedure

2.2.2 溶出曲線研究

以上海雅培克拉霉素片(原研地產(chǎn)化品種，國家藥品監(jiān)督管理局公布的仿制藥參比制劑目錄第十一批)為參比制劑，選取大于6批次的10家企業(yè)0.25 g規(guī)格的樣品，采用槳法，分別以pH4.5、pH6.0和pH6.8磷酸鹽緩沖液900 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50 r/min依法測定，繪制溶出曲線。其中P1、P2、P3、P4企業(yè)樣品為克拉霉素片，F(xiàn)1、F2、F3、F4企業(yè)為克拉霉素分散片，J1、J2企業(yè)為克拉霉素膠囊。

2.2.3 影響藥物穩(wěn)定性的因素

(1)加速試驗條件 選取不同劑型12批樣品，于溫度40℃，相對濕度75%條件下分別放置0、20、40和60 d，考察樣品的性狀、雜質(zhì)、堿度和水分等的變化。

(2)高溫試驗 選取加速試驗條件下能檢出克拉霉素雜質(zhì)I的1批樣品，于60℃條件下分別放置0、5和10 d，比較克拉霉素雜質(zhì)I變化情況。

(3)高濕試驗 選取不同劑型10批樣品，于相對濕度92.5%的條件下分別放置0、5和10 d，比較其性狀、雜質(zhì)、堿度和水分等的變化情況。

3 結(jié)果與討論

3.1 法定標準檢驗結(jié)果

按照現(xiàn)行法定標準檢驗，249批次樣品中，有1批次不符合規(guī)定，合格率99.6%。

不合格樣品為H1企業(yè)的克拉霉素緩釋片，不合格項目為干燥失重。不合格原因分析：客觀上與樣品接近效期有關(guān)。該企業(yè)克拉霉素緩釋片有效期為24個月，檢驗日期距離效期約為5個月。比較該企業(yè)9批次樣品的干燥失重測定結(jié)果與生產(chǎn)日期，發(fā)現(xiàn)距離失效日期越近，干燥失重越大，二者顯著相關(guān)；但其本質(zhì)是該企業(yè)樣品受環(huán)境的影響較大，將本品于相對濕度92.5%的條件下分別放置10和20 d，其干燥失重隨放置時間逐漸增大(圖1)。

圖1 高濕條件下干燥失重變化情況Fig.1 Trend of loss on drying under high humidity

3.2 探索性研究結(jié)果

3.2.1 雜質(zhì)譜分析

采用新建立的分析方法共檢出16個雜質(zhì)(圖2)，與《中國藥典》2015年版克拉霉素有關(guān)物質(zhì)檢測方法比較，各雜質(zhì)峰分離更好，雜質(zhì)個數(shù)和雜質(zhì)總量均明顯增加。

圖2 克拉霉素口服固體制劑有關(guān)物質(zhì)典型色譜圖Fig.2 Typical chromatograms of related substances of clarithromycin oral solid preparations

利用克拉霉素雜質(zhì)鑒別對照品、克拉霉素雜質(zhì)J對照品確證了其中的13個雜質(zhì)；通過LC-MS雙三元柱切換技術(shù)，參照EP10.0收載的克拉霉素已知雜質(zhì)，并結(jié)合克拉霉素合成路徑、原料藥雜質(zhì)檢測情況及質(zhì)譜裂解規(guī)律[18-19]，推測了3個雜質(zhì)結(jié)構(gòu)，雜質(zhì)名稱見表3。

表3 克拉霉素口服固體制劑雜質(zhì)歸屬Tab.3 The ascription of impurities in clarithromycin oral solid preparations

參照EP10.0克拉霉素原料和通過一致性評價樣品的質(zhì)量標準設(shè)定本品有關(guān)物質(zhì)的限度，249批次樣品均符合該限度。不同劑型樣品的雜質(zhì)譜基本一致，僅F2企業(yè)的克拉霉素分散片和H1、H3企業(yè)的克拉霉素緩釋片檢出雜質(zhì)I。比較不同劑型樣品的雜質(zhì)總量，克拉霉素顆粒中所含雜質(zhì)總量較其他劑型的高(圖3)。建議克拉霉素顆粒增訂有關(guān)物質(zhì)檢查項，對單個雜質(zhì)、總雜質(zhì)和特定雜質(zhì)均進行控制。

圖3 不同劑型克拉霉素總雜質(zhì)量比較Fig.3 Comparison of the total impurities of clarithromycin in different dosage forms

進一步比較原料質(zhì)量對制劑的影響。結(jié)果顯示，Y企業(yè)原料雜質(zhì)較高，H2企業(yè)1批克拉霉素緩釋片使用Y企業(yè)原料，雜質(zhì)也較高，表明原料藥的質(zhì)量影響制劑質(zhì)量，企業(yè)對進廠原料的控制是保證制劑質(zhì)量的關(guān)鍵。

3.2.2 溶出曲線研究

口服固體制劑的溶出特征是其重要的關(guān)鍵質(zhì)量屬性。參比制劑和10家企業(yè)樣品的溶出曲線見圖4～6，僅P1、P2企業(yè)的克拉霉素片以及F1、F2企業(yè)的克拉霉素分散片溶出曲線與參比制劑相似，2家膠囊生產(chǎn)企業(yè)產(chǎn)品均與參比制劑不相似。2家膠囊生產(chǎn)企業(yè)樣品從15 min開始，在3種溶出介質(zhì)中各取樣點的溶出量較其他劑型樣品均偏低。原料來源相同的不同企業(yè)樣品的溶出曲線也各不相同，提示制劑處方與工藝是影響制劑溶出的關(guān)鍵。仿制藥質(zhì)量和療效一致性中，通過對處方工藝的合理優(yōu)化，是保證溶出曲線與參比制劑相似的關(guān)鍵。

圖4 溶出曲線(pH4.5磷酸鹽緩沖液)Fig.4 Dissolution curves(pH4.5 phosphate buffer)

《中國藥典》2015版二部克拉霉素膠囊溶出方法為槳法、克拉霉素片為籃法，《中國藥典》2010年版第二增補本克拉霉素分散片溶出方法為籃法。建議參照參比制劑溶出度測定法[6]，將三者溶出方法統(tǒng)一為槳法，并將限度修訂為標示量的85%。

圖5 溶出曲線(pH6.0磷酸鹽緩沖液)Fig.5 Dissolution curves(pH6.0 phosphate buffer)

圖6 溶出曲線(pH6.8磷酸鹽緩沖液)Fig.6 Dissolution curves(pH6.8 phosphate buffer)

按上述方法進行試驗，克拉霉素膠囊平均溶出量略低于片和分散片(圖7)?？死顾胤稚⑵推谄骄艹隽糠矫鏌o明顯差異，分散片中雖然大量使用了羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素或交聯(lián)羧甲基纖維素鈉等優(yōu)質(zhì)崩解劑，分散較快，但因克拉霉素為BCSⅡ類，溶解性較差，導(dǎo)致克拉霉素分散片在溶出行為方面并未體現(xiàn)出其優(yōu)勢。

圖7 不同劑型克拉霉素平均溶出量比較Fig.7 Comparison of the average dissolution of clarithromycin in different dosage forms

3.2.3 影響藥物穩(wěn)定性的因素

在各種加速試驗條件下按現(xiàn)行法定標準及《中國藥典》2015年版四部通則要求檢測樣品的性狀、水分和堿度(僅顆粒劑測定)，并采用新建立的雜質(zhì)譜分析方法檢測樣品中雜質(zhì)。在溫度40℃，相對濕度75%條件下，樣品的性狀無明顯變化；克拉霉素雜質(zhì)I增大(圖8A)，其他雜質(zhì)無明顯變化；顆粒劑堿度無明顯變化；F5企業(yè)克拉霉素分散片和H1、H3企業(yè)克拉霉素緩釋片水分增，見圖8B；在60℃高溫條件下，隨著放置時間延長，克拉霉素雜質(zhì)I增大(圖8C)；在相對濕度92.5%的高濕條件，隨著放置時間延長，部分企業(yè)的樣品水分會增大(圖8D)。H1企業(yè)樣品在此條件放置10 d后，雜質(zhì)I無明顯變化。

圖8 各種加速試驗中克拉霉素制劑關(guān)鍵指標的變化Fig.8 Variation of key characteristics of clarithromycin preparations in accelerated stability test

加速試驗和高溫、高濕試驗表明，克拉霉素口服固體制劑的主要降解雜質(zhì)是雜質(zhì)I?？死顾仉s質(zhì)I為3-O-去克拉定糖基-6-O-甲基紅霉素A，是克拉霉素的水解產(chǎn)物，固體條件下主要受溫度的影響，并與樣品的水分含量有關(guān)。由于高濕條件下部分樣品水分增大，保證產(chǎn)品貯存期不吸潮，并控制貯存溫度是保證產(chǎn)品穩(wěn)定性的關(guān)鍵。

上述試驗顯示，克拉霉素片、膠囊和顆粒均較穩(wěn)定。部分企業(yè)克拉霉素分散片和緩釋片水分增大。H1企業(yè)和H3企業(yè)克拉霉素緩釋片中雜質(zhì)I增大。

4 結(jié)論

本次國家藥品抽檢結(jié)果顯示，克拉霉素口服固體制劑總體質(zhì)量較好，合格率99.6%。

探索性研究結(jié)果表明，不同企業(yè)樣品的溶出曲線存在較大差異，建議企業(yè)盡早開展仿制藥質(zhì)量和療效一致性評價。高溫條件下克拉霉素雜質(zhì)I增大，高濕條件下部分樣品水分增大，建議在藥品生產(chǎn)、流通、貯藏各環(huán)節(jié)均嚴格控制環(huán)境溫濕度。

K2企業(yè)克拉霉素顆粒處方中的甜味劑為糖精鈉，糖精鈉的安全性一直飽受爭議[20]，由于其潛在的風險，《GB 2760-2014食品安全國家標準食品添加劑使用標準》不允許在嬰幼兒配方食品中使用。雖然國家藥品監(jiān)督管理局2019年第56號公告附件3《可免登記的產(chǎn)品目錄》中列有糖精鈉，但克拉霉素顆粒主要受眾者為幼兒及兒童，故克拉霉素顆粒處方中糖精鈉的合理性有待商榷。

克拉霉素口服固體制劑質(zhì)量標準有待提高，建議克拉霉素顆粒增訂有關(guān)物質(zhì)檢查項，并統(tǒng)一克拉霉素口服固體制劑有關(guān)物質(zhì)檢驗方法為梯度洗脫，對單個雜質(zhì)、總雜質(zhì)和特定雜質(zhì)均進行控制；并將克拉霉素片、分散片、膠囊的溶出檢測方法統(tǒng)一修訂為槳法，限度修訂為標示量的85%。