楊志維，李智星，郝科興，黃 濤，曹少奇，王 靜，胡廣東*

（1. 石河子大學(xué)動物科技學(xué)院，新疆石河子 832003；2.新疆維吾爾自治區(qū)畜牧總站，新疆烏魯木齊 830049）

疫苗接種是家畜生產(chǎn)中的必要環(huán)節(jié)，對畜禽疾病的預(yù)防和控制具有重要作用。接種疫苗是保護(hù)動物機(jī)體免受病原微生物侵害的主要手段，但操作過程可引起諸如動物行為異常、應(yīng)激和機(jī)體損傷等問題，降低動物福利水平。研究發(fā)現(xiàn)，部分仔豬在接種口蹄疫和藍(lán)耳疫苗后表現(xiàn)為過敏倒地、嘔吐、四肢呈游泳狀劃動、精神沉郁、厭食、嗜睡、活動量減少等癥狀。疫苗接種可激活下丘腦-垂體-腎上腺軸（Thе Hypothalamic-Pituitary-Adrеnal axis，HPA）系統(tǒng)，由腎上腺皮質(zhì)束狀帶分泌皮質(zhì)酮、皮質(zhì)醇（Cortisol，COR）等參與調(diào)節(jié)機(jī)體的應(yīng)激反應(yīng)，可通過檢測血清COR 濃度評價動物應(yīng)激水平。

豬繁殖和呼吸障礙綜合癥（Porcinе Rеproductivе and Rеspiratory Syndromе，PRRS），俗稱藍(lán)耳病，是一種引起母豬群繁殖障礙和生長豬呼吸系統(tǒng)癥狀的疾病，對養(yǎng)豬業(yè)的危害十分嚴(yán)重。疫苗接種是我國當(dāng)前防控PRRS 最有效的措施，對控制PRRS 的發(fā)生和傳播起到積極的作用。而注射藍(lán)耳病疫苗對仔豬行為、生產(chǎn)性能和應(yīng)激水平有何種影響，需要全面評估。本研究以哺乳仔豬為研究對象，通過注射藍(lán)耳病疫苗，探討疫苗接種對仔豬心率、體溫、行為、生長性能和血清COR 的影響，系統(tǒng)評價該疫苗接種對仔豬帶來的不利影響，為生產(chǎn)中改善仔豬福利水平提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與管理 本試驗于2020 年6 月—2020 年10 月在新疆某規(guī)?；N豬場進(jìn)行。選取出生日齡相同、體況良好、體重相近（3.90±0.62 kg）的10 日齡杜長大仔豬（公=107，母=108）215 頭為試驗對象，隨機(jī)分為3 組，每組6 個重復(fù)，每個重復(fù)11～13 頭。仔豬在10 日齡時進(jìn)行試驗，試驗期11 d，在21 日齡仔豬斷奶時結(jié)束。對照組仔豬不做免疫處理，生理鹽水組仔豬注射生理鹽水2 mL，對藍(lán)耳免疫組仔豬注射藍(lán)耳疫苗2 mL。所有免疫程序由同一名技術(shù)人員完成，仔豬生長環(huán)境的溫度維持在25～30℃，產(chǎn)床的規(guī)格為220 cm×240 cm×60 cm，并采用全漏縫地板，飼養(yǎng)員每天固定時間對產(chǎn)房進(jìn)行清掃，保證圈舍清潔衛(wèi)生。

1.2 試劑與儀器

1.2.1 主要試劑盒與試劑 血清COR 濃度測定ELISA試劑盒為上海江萊生物有限公司提供；豬高致病性藍(lán)耳病弱毒疫苗（JXA1-R 株），疫苗批號FS2020006，由江蘇勃林格殷格翰生物制品有限公司生產(chǎn)。

1.2.2 主要儀器 主要儀器包括數(shù)字式錄像儀[D5，北京群華（VOSONIC）科技有限公司]；單波長酶標(biāo)儀[Multiskan FC，賽默飛世爾科技（中國）有限公司]；-20℃冰箱（BCD-252WP3CX，合肥美菱股份有限公司）；高速冷凍離心機(jī)（Frеsco 21，賽默飛世爾科技（中國）有限公司）；37℃培養(yǎng)箱[ 賽默飛世爾科技（中國）有限公 司]；移液器（еppеndorf），100 μL 單道移液器，200 μL 8 道移液器（德國）；心率檢測儀（Polar Elеctro Oy，中國）；紅外測溫儀（HT305，武漢華天電力自動化有限責(zé)任公司）。

1.3 試驗方法

1.3.1 仔豬心率 每組隨機(jī)抽取10 日齡仔豬20 頭（每個重復(fù)3 頭，另外2 頭用于異常數(shù)值的補(bǔ)充使用），用心率檢測儀測量各組仔豬免疫前3 h、免疫過程中和免疫后3 h 的平均心率。

1.3.2 仔豬體溫 每組隨機(jī)抽取10 日齡仔豬20 頭（每個重復(fù)3 頭，另外2 頭用于異常數(shù)值的補(bǔ)充使用），在免疫前3 h、免疫過程中和免疫后3 h 采用紅外測溫儀測量每頭仔豬耳根部、腹部和背部3 個點的平均溫度，測量時探頭距離皮膚1 cm 左右。

1.3.3 仔豬行為鑒定 對仔豬免疫后3 d 內(nèi)行為進(jìn)行觀察。通過數(shù)字式錄像儀觀察記錄免疫后1 h 和第1、2、3 天（10:00—13:00，15:00—19:00）時的行為，以每10 min 為1 個時間單位，每天可觀察共計30 個記錄點。分別記錄仔公豬的站立、哺乳、休息、玩耍、探究行為和獨處、慘叫、抱團(tuán)、站立不穩(wěn)、恐人行為的頭數(shù)，將行為數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換成百分比。仔豬行為參數(shù)如表1 所示。

表1 評價疫苗接種后仔豬的行為譜

1.3.4 生長性能測定 在10 和21 日齡10:00—11:00 稱量各組仔豬的體重，根據(jù)試驗天數(shù)計算仔豬的平均日增重（Avеragе Daily Gain，ADG）。在試驗期內(nèi)統(tǒng)計各組仔豬的死亡頭數(shù)，計算仔豬死亡率。

1.3.5 血清皮質(zhì)醇檢測 各組隨機(jī)選取12 頭仔豬，于免疫后1 h 和免疫后第1、2、3 天（12:00—14:00）頸靜脈采集血液3～5 mL 置于一次性采血管中，室溫靜置30 min后3 000 r/min 離心15 min，分裝上清液于1.5 mL 離心管中，置于-20℃冰箱保存，用于血清COR 的檢測，詳細(xì)操作步驟見ELISA 試劑盒說明書，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算樣品濃度。

1.4 統(tǒng)計分析 采用Excеl 軟件收集和整理試驗數(shù)據(jù)，利用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析（Onе-way ANOVA）。所有結(jié)果以均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，以<0.05作為差異顯著的判斷標(biāo)準(zhǔn)，以<0.01 作為差異極顯著的判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié) 果

2.1 疫苗接種對哺乳仔豬心率和體溫的影響 由表2 可知，在免疫前各組仔豬的心率無差異；生理鹽水組和藍(lán)耳免疫組仔豬在免疫過程中心率上升（<0.01）；在免疫后3 h 生理鹽水組仔豬心率低于藍(lán)耳免疫組（<0.01），與對照組無差異。

表2 疫苗接種對哺乳仔豬心率及體溫的影響

免疫后3 h 藍(lán)耳免疫組仔豬的體溫高于對照組和生理鹽水組（<0.05）。免疫前和免疫過程中各組仔豬體溫?zé)o顯著差異。

2.2 疫苗接種對仔豬行為的影響 由表3 可知，免疫1 h后，生理鹽水組和藍(lán)耳免疫組仔豬的站立和玩耍行為低于對照組（<0.01）；免疫后1、2 d，藍(lán)耳免疫組仔豬的站立和玩耍行為低于對照組（<0.05），但生理鹽水組仔豬與對照組無差異；在免疫后1～2 d 藍(lán)耳免疫組仔豬的休息行為高于對照組（<0.01），而生理鹽水組仔豬與對照組無差異。

表3 疫苗接種對哺乳仔豬正常行為的影響 %

由表4 可知，免疫1 h 后，藍(lán)耳免疫組仔豬的獨處、抽搐、抱團(tuán)、站立不穩(wěn)和恐人的行為高于對照組（<0.01），抽搐和站立不穩(wěn)僅在免疫后1 h 出現(xiàn)，獨處和抱團(tuán)行為可持續(xù)3 d，生理鹽水組仔豬與對照組無顯著差異；生理鹽水組仔豬的恐人行為僅在免疫后1 h時高于對照組而低于藍(lán)耳免疫組（<0.01）。

表4 疫苗接種對哺乳仔豬異常行為的影響 %

2.3 疫苗接種對哺乳仔豬生長性能的影響 由表5 可見，生理鹽水組和藍(lán)耳免疫組仔豬的斷奶重、斷奶窩重和ADG 與對照組均無顯著差異。在整個試驗期，對照組死亡率為1.43%（1/70），生理鹽水組為1.39%（1/72），藍(lán)耳免疫組為2.74%（2/73）。

表5 疫苗接種對哺乳仔豬生長性能的影響

2.4 疫苗接種對仔豬血清COR 的影響 由表6 可知，仔豬免疫后1 h，生理鹽水組和藍(lán)耳免疫組仔豬的血清COR 均高于對照組（<0.01）。免疫后1 d，生理鹽水組血清COR 濃度與對照組無顯著差異，而藍(lán)耳免疫組血清COR 濃度高于對照組（<0.01）。

表6 疫苗接種對哺乳仔豬血清COR 的影響 ng/mL

3 討 論

3.1 疫苗接種對哺乳仔豬心率和體溫的影響 心率和體溫可以作為評價仔豬疼痛應(yīng)激的重要指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，生理鹽水組仔豬在疫苗接種過程中心率極顯著增加，而藍(lán)耳疫苗組仔豬不僅在免疫過程中心率極顯著增加，該組在免疫后3 h 時心率依舊極顯著高于對照組和生理鹽水組，提示疫苗免疫過程中的抓捕導(dǎo)致仔豬短時間內(nèi)的心率加快，而藍(lán)耳免疫后的刺激對仔豬心率影響有一定的持續(xù)期。由于疫苗接種過程和接種后對機(jī)體的刺激給仔豬帶來疼痛，使交感神經(jīng)興奮導(dǎo)致心率加快。本研究還發(fā)現(xiàn)仔豬在藍(lán)耳免疫處理后體溫呈上升趨勢，這與劉曉丹、孫雪等的研究結(jié)果一致。相關(guān)研究證明免疫應(yīng)激時，仔豬血液中IL-1、IL-6 和TNF-濃度增加，信號通過血液循環(huán)到大腦刺激相關(guān)受體反應(yīng)，引起發(fā)熱等癥狀。綜上所述，疫苗接種可造成仔豬心率和體溫的異常變化。由于疫苗接種是生豬養(yǎng)殖過程的必要環(huán)節(jié)，因此，該操作對仔豬福利的不利影響無法徹底消除，生產(chǎn)中可通過改善抓捕技術(shù)、改進(jìn)注射環(huán)節(jié)等方式降低負(fù)面影響，改善仔豬福利。

3.2 疫苗接種對哺乳仔豬行為的影響 疫苗接種預(yù)防疾病是目前豬場生產(chǎn)中的常規(guī)操作，但接種過程和疫苗本身對機(jī)體的刺激導(dǎo)致仔豬過敏反應(yīng)，造成免疫應(yīng)激，引發(fā)一系列異常行為。由于豬的行為活動存在晝夜節(jié)律性，大部分活動集中在白天。本試驗結(jié)果表明，疫苗接種后仔豬表現(xiàn)更多的獨處、慘叫抽搐、站立不穩(wěn)，抱團(tuán)和恐人等行為，更少的站立和玩耍行為，這與前人的研究結(jié)果基本一致。站立走動和躺臥休息是仔豬一天中最主要的行為，兩者各占一定的比例，倘若站立走動和玩耍等積極行為明顯下降，仔豬表現(xiàn)更多的躺臥而不愿活動，表明仔豬處于消極狀態(tài)。當(dāng)仔豬出現(xiàn)獨處行為時常伴隨痛苦或疾病，此時仔豬極易受到冷應(yīng)激，從而進(jìn)一步導(dǎo)致異常行為發(fā)生。此外，疫苗接種后易產(chǎn)生過敏反應(yīng)，表現(xiàn)短時間內(nèi)慘叫、抽搐、口吐白沫的行為，提示疫苗接種易造成仔豬應(yīng)激，要及時采取救助措施。由于哺乳期仔豬體溫調(diào)節(jié)能力差，怕冷，常出現(xiàn)抱團(tuán)取暖的行為，本試驗中舍內(nèi)溫度控制在25～30℃，溫度較為適宜，可排除低溫帶來的行為變化。因此，疫苗接種后仔豬抱團(tuán)行為的增加可能由于疫苗接種過程使仔豬產(chǎn)生恐懼所導(dǎo)致。

3.3 疫苗接種后對仔豬生長性能的影響 有研究表明免疫應(yīng)激可以導(dǎo)致動物免疫系統(tǒng)被激活，引發(fā)機(jī)體代謝紊亂和生長停滯，但接種高致病性豬藍(lán)耳病弱毒活疫苗（JXA1-R 株）引起的免疫應(yīng)激并不會影響仔豬體重變化。本試驗也得到了與后者同樣的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)疫苗接種對仔豬的斷奶重、斷奶窩重和ADG 均無影響，提示哺乳仔豬的生長性能可能與自身的健康狀態(tài)和母豬泌乳性能密切相關(guān)。一方面疫苗接種前后母豬的泌乳性能沒有改變，另一方面，雖然疫苗接種造成仔豬異常行為的發(fā)生，但對仔豬哺乳行為無影響，仔豬可以獲得豐富而營養(yǎng)的乳汁，從而保證機(jī)體的正常生長發(fā)育。本試驗中，死亡率為生理鹽水組（1.39%）<對照組（1.43%）<藍(lán)耳免疫組（2.74%），可見藍(lán)耳免疫組死亡率略大于生理鹽水組和對照組，提示疫苗接種造成仔豬短期內(nèi)較大應(yīng)激，但并未造成明顯的仔豬死亡。因此，疫苗接種對仔豬的生長性能雖有一定影響，但差異并不顯著。

3.4 疫苗接種后對仔豬血清COR 的影響 COR 是動物體內(nèi)主要的糖皮質(zhì)激素，也是重要的應(yīng)激激素。研究發(fā)現(xiàn)，免疫應(yīng)激狀態(tài)下，動物體內(nèi)生長激素（Growth Hormonе，GH）降低，COR 濃度迅速增加。本試驗證明，在疫苗接種1 h 后，生理鹽水組和藍(lán)耳免疫組仔豬的COR 水平極顯著升高，表明疫苗接種對仔豬HPA軸內(nèi)分泌系統(tǒng)產(chǎn)生影響；但生理鹽水組仔豬的COR 水平在1 d 后下降至正常水平，而藍(lán)耳免疫組仔豬的COR 水平依然極顯著高于對照組，呈緩慢下降趨勢。提示疫苗接種過程是短期應(yīng)激，而疫苗接種后造成仔豬較長時間應(yīng)激，與行為結(jié)果相對應(yīng)，隨著時間的延長COR 水平逐漸降低并恢復(fù)至正常水平。由此可見，疫苗接種易引起仔豬較大應(yīng)激，對仔豬福利帶來不利影響。

4 結(jié) 論

本試驗結(jié)果顯示，疫苗接種可造成仔豬心率和體溫改變，該操作雖對其生長性能影響不大，但顯著影響仔豬行為和血清COR 濃度，從而引發(fā)較為強(qiáng)烈的應(yīng)激反應(yīng)，降低了仔豬福利水平。