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        蒸制和浸泡對四制益母草藥效成分的影響*

        2022-03-15 08:08:24龍國斌甘國興向燕芬朱衛(wèi)星陳小銳李潤虹陳海明

        龍國斌 甘國興※ 向燕芬 朱衛(wèi)星 陳小銳 李潤虹 陳海明

        (1.清遠(yuǎn)市中醫(yī)院廣東省鮮藥民族醫(yī)藥工程技術(shù)研究中心,廣東 清遠(yuǎn) 511500;2.清遠(yuǎn)市中醫(yī)院藥學(xué)部,廣東 清遠(yuǎn) 511500;3.清遠(yuǎn)市食品藥品檢驗所,廣東 清遠(yuǎn) 511500)

        四制益母草是嶺南特色炮制中藥飲片,清代何克諫撰寫的《生草藥性備要》中記載四制益母草的炮制方法為“加童便米醋黃酒姜汁同浸也”[1]。《廣東省中藥炮制規(guī)范》記載四制益母草炮制方法為“取凈益母草,用鹽、醋、姜和酒混合液拌勻吸盡后,蒸2 小時,曬干……”[2]。2 種炮制方法所用輔料和工藝均存在差異,工藝的差異主要是蒸制和浸泡這2 個關(guān)鍵環(huán)節(jié)。前期研究發(fā)現(xiàn),童便、米醋、黃酒、姜汁混合液炮制的四制益母草中鹽酸益母草堿含量明顯高于鹽、米醋、黃酒、姜汁混合液炮制的四制益母草,而二者鹽酸水蘇堿含量相當(dāng)。本文以童便、米醋、黃酒、姜汁為輔料,考察蒸制和浸泡對四制益母草中藥效成分鹽酸益母草堿和鹽酸水蘇堿含量的影響,為優(yōu)化四制益母草炮制方法提供參考。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1 藥材與輔料 凈制益母草飲片(廣州市志寧藥業(yè)有限公司生產(chǎn),產(chǎn)地:湖北,批號:190601)經(jīng)清遠(yuǎn)市中醫(yī)院朱衛(wèi)星主任中藥師鑒定為唇形科植物益母草Leonurusja ponicas Houtt.的干燥地上部分,黃酒(紹興吳越釀酒有限公司釀造,酒精度15%vol),9°米醋(山西老陳醋集團有限公司生產(chǎn)),食用鹽(廣東省鹽業(yè)集團有限公司專營),生姜購自清遠(yuǎn)市先鋒市場,童便取自一名5 歲健康男童。

        1.1.2 儀器設(shè)備 2695-2489 型高效液相色譜儀(Waters公司)、WT3002 型電子天平(杭州萬特衡器有限公司監(jiān)制)、Agilent 1260 InfinityⅡ蒸發(fā)光高效液相檢測器(安捷倫公司)、XMTD-7000 型電熱恒溫水浴鍋(北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司)、DHG-9023A 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實驗設(shè)備有限公司)、XS205 型十萬分之一分析天平(梅特勒-托利多公司)、DFT-100 型100 克手提式高速粉碎機(溫嶺市林大機械有限公司)等。

        1.1.3 試劑 鹽酸益母草堿(中國食品藥品檢定研究院,批號:111823-201704)、鹽酸水蘇堿(中國食品藥品檢定研究院,批號:110712-201916)、1-辛烷黃酸鈉(河南省萬佳首化生物科技有限公司,批號:DE821040)、乙醇(廣州化學(xué)試劑廠,批號:2019030118,分析純)、磷酸(天津市富宇精細(xì)化工有限公司,批號:20150804B,分析純)、乙腈(默克股份兩合公司,色譜純)、超純水等。

        1.2 方法

        1.2.1 輔料制備 取童便530 g,米醋530 g,黃酒530 g,生姜汁160 g(530 g 生姜榨汁所得),混勻即得。

        1.2.2 炮制方法

        1.2.2.1 潤1 h 取凈制益母草飲片300 g,平均分為6份,每份50 g。取上述益母草飲片1 份,加入混合輔料16.5 g,拌勻悶潤1 h,置電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中50 ℃干燥。

        1.2.2.2 潤1 h+蒸2 h 取上述益母草飲片1 份,加入混合輔料16.5 g,拌勻悶潤1 h,置蒸鍋中蒸2 h,取出放涼,置電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中50 ℃干燥。

        1.2.2.3 浸泡1 h 取上述益母草飲片1 份,加入混合輔料250 g(預(yù)實驗提示5 倍量的輔料才能完全浸泡藥材)浸泡1 h,取出益母草飲片,收集浸泡液,益母草飲片置電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中50 ℃干燥。

        1.2.2.4 浸泡1 h+蒸2 h 取上述益母草飲片1 份,加入混合輔料250 g 浸泡1 h,取出益母草飲片,收集浸泡液,益母草飲片置蒸鍋中蒸2 h,取出放涼,置電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中50 ℃干燥。

        1.2.2.5 浸泡3 h 取上述益母草飲片1 份,加入混合輔料250 g 浸泡3 h,取出益母草飲片,收集浸泡液,益母草飲片置電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中50 ℃干燥。

        1.2.2.6 浸泡3 h+蒸2 h 取上述益母草飲片1 份,加入混合輔料250 g 浸泡3 h,取出益母草飲片,收集浸泡液。益母草飲片置蒸鍋中蒸2 h,取出放涼,置電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中50 ℃干燥。

        1.2.3 水分測定 分別取1.2.2 項下益母草炮制品和凈制益母草飲片粉碎,按照《中華人民共和國藥典》(以下簡稱《中國藥典》)[3]2015 年版四部水分測定法第二法(烘干法)測定其水分。

        1.2.4 水溶性浸出物測定 分別取1.2.2 項下益母草炮制品和凈制益母草飲片粉碎,按照《中國藥典》[3]2015 年版四部浸出物測定法(通則2201)項下熱浸法測定不同益母草炮制品水溶性浸出物含量:取藥材粉末約2 g,置100 mL 錐形瓶中,精密加水50 mL,密塞,稱定重量,靜置1 h,連接回流冷凝管,加熱至沸騰,并保持微沸1 h,放冷后,取下錐形瓶,密塞,再稱定重量,用水補足減失的重量,搖勻,用干燥濾器濾過,精密量取濾液25 mL,置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中,在水浴上蒸干后,于105 ℃干燥3 h,置干燥器中冷卻30 min,迅速精密稱定重量,以干燥品計算供試品中水溶性浸出物含量(%)。

        1.2.5 鹽酸水蘇堿測定

        1.2.5.1 供試品溶液的制備 按照《中國藥典》[4]2015 年版中的方法,分別取1.2.2 項下益母草炮制品20 g,用手提式高速粉碎機粉碎,過3 號篩,取粉末約1 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入70 %乙醇25 mL,稱定重量,加熱回流2 h,放冷,再稱定重量,用70 %乙醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。

        1.2.5.2 對照品溶液的制備 取鹽酸水蘇堿對照品適量,精密稱定,加70%乙醇制成每1 mL 含0.5 mg 的溶液,即得。

        1.2.5.3 含量測定 按照《中國藥典》[4]2015 年版中高效液相色譜法(通則0512)測定。以丙基酰胺鍵合硅膠為填充劑,以乙腈-0.2%冰醋酸溶液(80∶20)為流動相,用蒸發(fā)光散射檢測器檢測,理論塔板數(shù)按鹽酸水蘇堿峰計算應(yīng)不低于6000。分別取對照品溶液5、10 μL,供試品溶液20 μL,注入高效液相色譜儀,測定,用外標(biāo)兩點法對數(shù)方程計算,即得。

        1.2.6 鹽酸益母草堿含量測定

        1.2.6.1 對照品溶液的制備 取鹽酸益母草堿對照品適量,精密稱定,加70%乙醇制成每1 mL 含30 μg 的溶液,即得。

        1.2.6.2 含量測定 按照《中國藥典》[4]2015 年版中高效液相色譜法(通則0512)測定。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,以乙腈-0.4%辛烷磺酸鈉的0.1% 磷酸溶液(24∶76)為流動相,檢測波長為277 nm,理論塔板數(shù)按鹽酸益母草堿峰計算應(yīng)不低于6000。分別精密吸取鹽酸益母草堿對照品溶液和1.2.5.1 項下供試品溶液各10 μL,注入高效液相色譜儀,測定,即得。

        2 結(jié)果

        2.1 四制益母草水分及水溶性浸出物含量 益母草水分含量為10.46%,符合2015 年版《中國藥典》的要求,不同炮制方法制備的四制益母草水分含量在5.96%~7.63%。益母草的水溶性浸出物含量為24.93%,符合2015 年版《中國藥典》的要求,不同炮制方法制備的四制益母草的水溶性浸出物含量在23.50%~26.70%,最高的是浸泡1 h+蒸制2 h 的四制益母草,最低的是浸泡3 h的四制益母草。浸泡后蒸制的四制益母草水溶性浸出物含量增加。結(jié)果見表1。

        表1 四制益母草水分及水溶性浸出物含量 (n=3)

        2.2 不同炮制方法對四制益母草中鹽酸水蘇堿含量的影響 益母草中鹽酸水蘇堿含量為0.980%,符合2015 年版《中國藥典》的要求。不同炮制方法制備的四制益母草中鹽酸水蘇堿含量在0.367%~0.933%,最高的是潤1 h 的四制益母草,最低的是浸泡3 h+蒸制2 h 的四制益母草。蒸制會導(dǎo)致四制益母草中鹽酸水蘇堿含量減少,浸泡會導(dǎo)致四制益母草中鹽酸水蘇堿含量明顯減少。結(jié)果見表2,圖1。

        圖1 鹽酸水蘇堿高效液相色譜圖

        表2 不同炮制方法對四制益母草中鹽酸水蘇堿含量的影響(n=3)

        2.3 不同炮制方法對四制益母草中鹽酸益母草堿含量的影響 益母草中鹽酸益母草堿含量為0.139%,符合2015年版《中國藥典》的要求。不同炮制方法制備的四制益母草中鹽酸益母草堿含量在0.070%~0.120%,最高的是潤1 h 的四制益母草,最低的是浸泡3 h+蒸制2 h 的四制益母草。蒸制會導(dǎo)致四制益母草中鹽酸益母草堿含量減少,浸泡會導(dǎo)致四制益母草中鹽酸益母草堿含量明顯減少。結(jié)果見表3,圖2。

        圖2 鹽酸益母草堿高效液相色譜圖

        表3 不同炮制方法對四制益母草中鹽酸益母草堿含量的影響(n=3)

        3 討論

        中藥炮制與其臨床療效密切相關(guān)。宋代《太平圣惠方》就提出:“炮制失其體性,篩羅粗惡,分劑差殊,雖有療疾之名,永無必愈之效,是以醫(yī)者必須殷勤注意”。明代《本草蒙筌》又載:“凡藥制造,貴在適中,不及則功效難求,太過則氣味反失……”。清代《修事指南》又載:“炮制不明,藥性不確,則湯方無準(zhǔn),而病癥不驗也”。益母草始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,具有活血調(diào)經(jīng),利尿消腫,清熱解毒等作用,用于月經(jīng)不調(diào),痛經(jīng)經(jīng)閉,惡露不盡,水腫尿少,瘡瘍腫毒。歷代醫(yī)方本草對益母草炮制方法記載頗多,包括炒制、制炭、酒制、醋制、蜜制和四制等。

        四制益母草是嶺南特色炮制中藥飲片,四制能夠增強祛瘀生新作用。藥理研究表明,益母草活血化瘀的主要成分是鹽酸益母草堿和鹽酸水蘇堿。本研究中,潤法炮制的四制益母草,蒸制與未蒸制對水溶性浸出物基本無影響,蒸制后鹽酸水蘇堿含量略微減少,鹽酸益母草堿含量明顯減少。浸泡炮制的四制益母草,蒸制后水溶性浸出物增加,鹽酸水蘇堿含量和鹽酸益母草堿含量均減少。與潤法相比,浸泡炮制的四制益母草鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿含量均明顯減少。研究結(jié)果表明,蒸制對鹽酸益母草堿影響較大,浸泡會造成鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿明顯減少。

        《生草藥性備要》中記載四制益母草的炮制方法為“加童便米醋黃酒姜汁同浸也”。本研究結(jié)果表明,浸泡會造成益母草主要藥效成分鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿明顯減少,因此認(rèn)為浸泡法炮制四制益母草是不合理的。《廣東中藥炮制規(guī)范》記載四制益母草炮制方法為“取凈益母草,用鹽、醋、姜和酒混合液拌勻吸盡后,蒸2 小時,曬干……”。本研究結(jié)果提示,蒸制對鹽酸益母草堿影響較大,蒸制后鹽酸益母草堿含量明顯減少,馬恩耀[5]研究發(fā)現(xiàn)蒸制超過1 h 的四制益母草中鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿均減少,因此認(rèn)為蒸制2 h 是不合理的。本研究只是初步探討蒸制和浸泡對四制益母草鹽酸水蘇堿、鹽酸益母草堿和水溶性浸出物的影響,研究結(jié)果可能沒有全面系統(tǒng)地反映蒸制和浸泡對四制益母草質(zhì)量的影響,今后將進一步深入研究闡明蒸制和浸泡對四制益母草質(zhì)量的影響,為優(yōu)化四制益母草炮制方法提供參考。

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