楊勝元 任永超 許倩

（黔南州檢驗(yàn)檢測(cè)院 貴州黔南州 558000）

1 前言

奶漿菌的特點(diǎn)是，折斷或戳刺其任意部位，都會(huì)流出如牛奶般的乳白色液體，其生長(zhǎng)環(huán)境較為特殊，具有很強(qiáng)的地域性和季節(jié)性。奶漿菌含有多種人體內(nèi)無(wú)法自行合成的氨基酸、蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、維生素，以及鈣、磷、鉀、鐵、鋅、硒等微量元素，是一種可以食用且美味的菌種，據(jù)相關(guān)研究報(bào)道，其有抗癌、降壓、降脂，護(hù)心、健胃、助消化、止咳平喘、祛痰、保肝、解毒、降血糖、通便利尿、提高免疫力和抗逆能力的作用。

奶漿菌的學(xué)名為多汁乳菇（Lactarius volemusFr.），是共生類食用大型真菌，分布于海拔1600~2800m的溫帶，在松林或針闊葉混交林地上，常與松樹或針闊葉混交林形成外生菌根菌，青岡櫟是奶漿菌常見的共生植物，屬于偏性共生（奶漿菌為獲利方）。出菇時(shí)間為夏季的7~9月，天氣炎熱，若遇上短時(shí)陣雨，蘑菇會(huì)雨后春筍般長(zhǎng)出。成長(zhǎng)周期短，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，但因其屬于偏性共生，生長(zhǎng)環(huán)境具有很強(qiáng)的地域性和季節(jié)性，現(xiàn)階段還無(wú)法實(shí)現(xiàn)人工栽培，只能在特定的時(shí)間段在野外采集，其無(wú)法如香菇、凍菌類腐生大型真菌般方便易得，其味美而稀有，故具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和獨(dú)特的市場(chǎng)需求。若奶漿菌實(shí)現(xiàn)了實(shí)驗(yàn)室（大棚或野外人工基地）的人工栽培，將實(shí)現(xiàn)奶漿菌的經(jīng)濟(jì)利益最大化和可持續(xù)化。

本文通過(guò)在生物實(shí)驗(yàn)室模擬奶漿菌的野外生長(zhǎng)環(huán)境，搭建實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)奶漿菌及其共生宿主（青岡櫟）的種植平臺(tái)，在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行人工育種接種，并在野外生存地點(diǎn)進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)，初步探索奶漿菌共生體系的機(jī)制，以期為實(shí)現(xiàn)人工栽培提供技術(shù)支持。

2 菌種的采集、分離、培養(yǎng)

中秋時(shí)節(jié)，野外的溫度和濕度利于奶漿菌的生長(zhǎng)，9月是采集奶漿菌的最佳時(shí)間，在此期間，到針闊葉混交林青岡櫟森林奶漿菌野外自熱生長(zhǎng)區(qū)（黔南州都勻市平浪鎮(zhèn)某野外森林）采集新鮮奶漿菌。

在實(shí)驗(yàn)室選取菌齡適宜的奶漿菌菌菇清洗干凈，采用組織分離法，分別取菌蓋與菌柄的內(nèi)部交接處和菌褶作為2組試驗(yàn)的原始材料，分別接種于通過(guò)商品化的PDA培養(yǎng)基和改良MMN培養(yǎng)基（商品化的MMN培養(yǎng)中加入比例為15%的瓊脂粉，固化此培養(yǎng)基，稱改良MMN培養(yǎng)基）中，在25~30℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)5~7 d，觀察各培養(yǎng)皿的生長(zhǎng)情況，并對(duì)各培養(yǎng)皿的生長(zhǎng)菌落進(jìn)行顯微觀察，對(duì)照奶漿菌子實(shí)體的顯微結(jié)構(gòu)，初步確定奶漿菌的菌種分離情況，通過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，基本確定奶漿菌的菌絲體在培養(yǎng)基中呈白色氣生菌絲，邊緣較整齊，菌絲較密，菌落直徑約2 cm。

挑取菌絲體，在無(wú)菌狀態(tài)下接種于MMN培養(yǎng)基中制作菌懸液，25~30℃搖床培養(yǎng)3~5d，定義為I號(hào)倍增菌種；把多個(gè)奶漿菌生長(zhǎng)茂盛的培養(yǎng)皿，連同培養(yǎng)基一同取下，在無(wú)菌狀態(tài)下，人工攪碎后集中在大三角瓶中，加入無(wú)菌水，25~30℃搖床培養(yǎng)3~5d，定義為II號(hào)倍增菌種；用于接種青岡櫟樹苗苗盤，觀察生長(zhǎng)（出菇）情況。

借鑒中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所劉培貴先生采用菌根合成和特制菌種及菌劑等，通過(guò)外生菌根技術(shù)和人工保育促繁等新技術(shù)和新方法，將新鮮奶漿菌（菌齡適中的奶漿菌）子實(shí)體風(fēng)干，粉碎，與固體培養(yǎng)基（玉米、胡蘿卜、松根、洋蔥、平菇、土豆、蔗糖）混合，加入菌絲激化液（PH值為5.8的尿素、食鹽、抗生素1支，稀釋1 000倍的溶液），靜置10 h育種激活子實(shí)體，25~30℃搖床培養(yǎng)2 d，制成對(duì)照I號(hào)菌種。

將在野外采集的新鮮奶漿菌（菌齡適中的奶漿菌）子實(shí)體通過(guò)風(fēng)干，粉碎，備用，定義為II號(hào)對(duì)照菌種。

3 實(shí)驗(yàn)室青岡櫟苗盤的制作

由于奶漿菌野外自熱生長(zhǎng)的特殊性，以及采集菌種的季節(jié)限制，需要提前制作好青岡櫟的苗盤，成功種植或移栽好青岡櫟樹苗。在奶漿菌野生采集地，采集青岡櫟的種子和當(dāng)?shù)氐耐寥廊舾蓚溆?，將采集地的土壤鋪設(shè)于苗盤（泡沫盤和泡沫箱）中，土層厚度約25 cm。實(shí)驗(yàn)室設(shè)置溫度25℃左右，種子用清水浸泡膨脹后，篩選有發(fā)芽跡象的種子均勻播種于苗盤中（在分析土壤無(wú)機(jī)鹽成分前，不添加無(wú)機(jī)肥，保持原始土壤的特性），縱橫間隔距離10 cm，間斷性澆水，保持水土濕潤(rùn)，青岡櫟生根發(fā)芽成苗?；蛘咴谀虧{菌野生采集地，采集青岡櫟的小樹苗若干和當(dāng)?shù)氐耐寥廊舾?，移栽至?shí)驗(yàn)室苗盤中，實(shí)驗(yàn)的條件模擬野外的溫度和濕度。

4 菌種播種

使用注射器（去掉針頭），將奶漿菌的I號(hào)倍增菌菌懸液和II號(hào)倍增菌菌懸液分別注射于青岡櫟的苗盤中，將接種苗盤實(shí)驗(yàn)室的溫度、濕度和光照等環(huán)境條件模擬為野外環(huán)境，用空調(diào)調(diào)節(jié)溫濕度，通過(guò)澆水的方式模擬雨水充沛和氣候濕潤(rùn)，促使菌種在青岡櫟根部特定營(yíng)養(yǎng)素的激活下，菌種細(xì)胞分化與青岡櫟樹根形成菌根菌，促使再生出菇。

借鑒中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所劉培貴先生的方法和胡先運(yùn)老師等的《多汁乳菇的研究及應(yīng)用》方法，將上述（2.2）的I號(hào)對(duì)照菌種和II對(duì)照菌種分別播種于青岡櫟苗盤中，培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)室條件等同于4.1的實(shí)驗(yàn)室條件，在實(shí)驗(yàn)室開展對(duì)照栽培。

在奶漿菌的自然盛產(chǎn)期間，將奶漿菌的I號(hào)倍增菌菌懸液、II號(hào)倍增菌菌懸液、I號(hào)對(duì)照菌種、II對(duì)照菌種，分別注射或播種于奶漿菌的野外生長(zhǎng)地青岡櫟樹下（樹根處）和野外非生長(zhǎng)地的青岡櫟樹下（樹根處），在野外非生長(zhǎng)地設(shè)置2處對(duì)照，一處設(shè)在野外生長(zhǎng)地的附近（環(huán)境土壤極為接近），定義為野外非生長(zhǎng)地I號(hào)，一處設(shè)在從未有奶漿菌生長(zhǎng)過(guò)的青岡櫟針闊林下（黔南州福泉市龍昌鎮(zhèn)某野外森林地），定義為野外非生長(zhǎng)地II號(hào)，標(biāo)記好地點(diǎn)，不改變現(xiàn)場(chǎng)的環(huán)境，讓其自身分化出菇。

5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)的開展情況和結(jié)果觀察，得出以下結(jié)果

表1 奶漿菌的人工栽培實(shí)驗(yàn)記錄數(shù)據(jù)

6 鑒定

菌懸倍增菌種和固體粉碎激活的菌種在實(shí)驗(yàn)室均未出菇，菌懸倍增菌種和固體粉碎激活的菌種在野外森林均能出菇。實(shí)驗(yàn)中雖然未有條件開展rDNA基因序列的檢測(cè)和鑒定奶漿菌的菌絲體，但是是通過(guò)肉眼識(shí)別和挑取培養(yǎng)皿中干凈純凈的菌絲體制作菌懸菌種，采取對(duì)照實(shí)驗(yàn)的交叉驗(yàn)證，菌懸菌種在野外能出菇，足以證明奶漿菌的菌絲體形態(tài)學(xué)是白色氣生菌絲，質(zhì)地較密，邊緣較圓。

7 展望

在人工模擬環(huán)境的條件下（實(shí)驗(yàn)室）雖然均未出菇，本文初步探索共生體系未能成功，表明了奶漿菌和青岡櫟的共生體系，除氣候環(huán)境、土壤差別、溫度、濕度和青岡樹齡等因素的制約，還存在許多未知原因，共同制約和相互制衡與補(bǔ)充，才形成了和諧共生的關(guān)系。但為下一步深入研究共生機(jī)制的原理提出了苗盤種植的設(shè)想，通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)室苗盤青岡櫟根表面和野外青岡櫟根表面的顯微觀察，鑒別兩者的區(qū)別，重點(diǎn)開展形成菌根菌根段和無(wú)菌根菌根段有機(jī)化合物的圖譜分析，尋找菌根菌特有的有機(jī)成分，研究多汁乳菇與其共生樹木的依存關(guān)系。