李本淳 馬彧 程焱

（四平市食品藥品檢驗所 吉林四平 136000）

1 前言

人參健脾丸為《中國藥典》2020年版一部收載的中藥成方制劑[1]，由人參、白術(shù)（麩炒）、炙黃芪等11味中藥材組成，具有健脾益氣，和胃止瀉的功效，用于治療脾胃虛弱所致的飲食不化、脘悶嘈雜、惡心嘔吐、腹痛便溏、不思飲食、體弱倦怠。中藥資源復(fù)雜，農(nóng)藥的濫用導致環(huán)境污染，殘留的農(nóng)藥長期存在于土壤中，中藥材在貯存過程中為了防蟲蛀而噴灑農(nóng)藥也可能成為重要的污染途徑?！吨袊幍洹?020年版雖然規(guī)定了人參和黃芪的有機氯類農(nóng)藥殘留[1]，并沒有控制含人參和黃芪中成藥的農(nóng)藥殘留。通過前期的實驗和調(diào)研[2-8]，市售的人參和黃芪均存在農(nóng)藥殘留超標的現(xiàn)象。本實驗采用GC-ECD法測定人參健脾丸中17種有機氯類農(nóng)藥殘留[9-13]，以期為人參健脾丸農(nóng)藥殘留安全性評價提供參考。

2 儀器與試藥

2.1 儀器

7890B型氣相色譜儀（美國安捷倫），EV321旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（萊伯泰科），TDL-5-A臺式離心機（上海安亭科學儀器廠），KQ-300型超聲清洗機（昆山市超聲儀器有限公司），BT125D型電子天平（賽多利斯）。

2.2 試藥

有機氯農(nóng)藥混合對照品溶液（中國食品藥品檢定研究院，批號：610005-202003，特性量值：約10 μg/mL），水為自制超純水，丙酮、二氯甲烷、正己烷、硫酸均為色譜純；氯化鈉、無水硫酸鈉均為分析純。人參健脾丸來源為市售不同廠家，A廠家批號為：20190101，B廠家批號為：20200101，C廠家批號為：20200101。

3 方法與結(jié)果

3.1 色譜條件

分析柱為DB-1701（30 m×0.32 mm×0.25μm）毛細管色譜柱，驗證柱為DB-5（30m×0.32mm×0.25μm）毛細管色譜柱；檢測器為63Ni-ECD電子捕獲檢測器；載氣為N2；進樣口溫度：230℃；檢測器溫度：300℃；升溫程序：初始60℃，保持0.3 min，以60℃/min升至170℃，再以10℃/min升至220℃，保持10 min，再以1℃/min升至240℃，15℃/min升至280℃，保持5 min；流速為1.5 mL/min；進樣方式：不分流進樣；進樣量為1μL。

3.2 混合對照品溶液的制備

精密量取有機氯農(nóng)藥混合對照品溶液1 mL，至10 mL的量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，制得對照品貯備液；再精密量取貯備液至同一量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，即得約1 ng/mL～50 ng/mL的17種有機氯農(nóng)藥混合對照溶液。

3.3 供試品溶液的制備

取供試品約6 g，剪碎，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加水30 mL，振搖10 min，再超聲30 min，使分散，精密加丙酮50 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用丙酮補足減失的重量，再加氯化鈉約8 g，精密加二氯甲烷25 mL，稱定重量，超聲處理15 min，再稱定重量，用二氯甲烷補足減失的重量，振搖使氯化鈉充分溶解，靜置，轉(zhuǎn)移至離心管中，離心（3 000r/min），3 min，使完全分層，將有機相轉(zhuǎn)移至裝有適量無水硫酸鈉的具塞錐形瓶中，放置30min。精密量取15 mL。置40℃水浴中減壓濃縮至1 mL，加正己烷約5 mL，減壓濃縮至近干，用正己烷溶解并轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，轉(zhuǎn)移至離心管中，緩緩加入硫酸溶液（9→10）1 mL，振搖1 min，離心（每分鐘3000轉(zhuǎn)）10 min，分取上清液，加水1 mL，振搖，取上清液，即得。

3.4 空白溶液的制備

除不添加樣品外，按“3.3”項下方法制備空白溶液，即得。

3.5 專屬性試驗

分別吸取對照品混合溶液、供試品溶液和空白溶液1μL，在“3.1”項色譜條件下測定，結(jié)果各色譜峰分離良好，而空白溶液則無相同色譜峰出現(xiàn)，表明空白無干擾，見圖1。

3.6 線性關(guān)系考察

精密量取17種有機氯農(nóng)藥混合對照品貯備液適量，用正已烷逐級稀釋制成線性關(guān)系溶液，在“3.1”項色譜條件下測定，以峰面積為縱坐標（y），溶液質(zhì)量濃度為橫坐標（x）進行回歸計算，各成分在線性范圍內(nèi)均呈良好的線性關(guān)系。將17種有機氯農(nóng)藥對照品溶液加入空白樣品進行分析，以基線噪聲（S/N=3）確定方法檢出限，見表1。

表1 17機氯農(nóng)藥對照品線性關(guān)系及檢出限

3.7 重復(fù)性考察

精密稱取同一不含17種有機氯農(nóng)藥的人參健脾丸6份，每份9 g，分別精密加入對照品貯備液適量，按“3.3”項下方法制備供試品溶液，在“3.1”項色譜條件下測定，測得17種有機氯農(nóng)藥的含量的RSD均在3.0%以內(nèi)，表明方法重復(fù)性良好。

3.8 穩(wěn)定性實驗

分別于0、2、4、8、12和24 h精密吸取重復(fù)性考察項同一供試品溶液1μL，在“3.1”項下色譜條件測定，計算17種農(nóng)藥峰面積的RSD均小于2.5%，表明供試品溶液中17種農(nóng)藥在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.9 隨行回收實驗

精密稱取同一不含17種有機氯農(nóng)藥的人參健脾丸6份，每份9 g，分別精密加入對照品貯備液適量，按“3.3”項下方法制備供試品溶液，在“3.1”項色譜條件下測定，計算加樣回收率，結(jié)果見表2，表明方法回收率良好。

表2 隨行回收實驗結(jié)果

（續(xù)表2）

3.10 樣品的農(nóng)藥殘留量測定

取11批人參健脾丸，按“3.3”項下方法制備供試品溶液，在“3.1”項色譜條件下測定，計算各農(nóng)藥的含量。參考人參中五氯硝基苯的限值，結(jié)果有2批五氯硝基苯的含量大于0.1 mg/kg，分別為0.19 mg/kg和0.18 mg/kg。

4 討論

目前，《中國藥典》2020版僅對人參、紅參、甘草、黃芪、西洋參中有機氯類農(nóng)藥殘留量進行了控制，另外通則中對33種禁用農(nóng)藥作出了規(guī)定。但在中成藥的農(nóng)藥殘留控制還是真空區(qū)域，特別是全粉入藥的人參類中成藥存在較大安全隱患。假設(shè)人參健脾丸中五氯硝基苯只為人參引入的話，按照處方量折算，人參中五氯硝基苯含量將達到20 mg/kg，大大超過了0.1 mg/kg的合格限度，應(yīng)考慮加強對中成藥中農(nóng)藥殘留的監(jiān)督。