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        聚合酶鏈反應(yīng)檢驗(yàn)應(yīng)用于肺結(jié)核早期診斷的準(zhǔn)確性評(píng)價(jià)

        2022-03-12 13:22:26王瑜

        王瑜

        作者單位:264000 山東煙臺(tái),煙臺(tái)肺科醫(yī)院檢驗(yàn)科

        肺結(jié)核是一種常見的呼吸系統(tǒng)傳染性病變,主要由結(jié)核分枝桿菌感染所致,具有高發(fā)病率,患者發(fā)病后主要表現(xiàn)為低熱、乏力、盜汗等全身癥狀,還伴有咳嗽、咯痰、胸痛、咯血等呼吸系統(tǒng)癥狀,隨著病情進(jìn)展,還可能會(huì)累及其他部位,引發(fā)肺外結(jié)核,導(dǎo)致患者死亡風(fēng)險(xiǎn)增高,嚴(yán)重危害生命健康[1-2]。對(duì)于肺結(jié)核臨床上主張對(duì)患者盡早診斷,以明確病情,給予及時(shí)有效的治療。臨床用于肺結(jié)核診斷的手段主要包括痰涂片檢查、結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)等,其中痰涂片檢查和結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)在肺結(jié)核診斷時(shí)較常用,可在一定程度上檢出肺結(jié)核病灶,但存在部分漏診和誤診情況。近年來(lái),聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)檢驗(yàn)在肺結(jié)核的診斷中得到應(yīng)用,PCR檢驗(yàn)輔助診斷結(jié)核分枝桿菌引起的肺部感染效果良好[3-4]。為探討PCR檢驗(yàn)在肺結(jié)核診斷中的作用,本研究選擇2020年1月—2022年8月在煙臺(tái)肺科醫(yī)院就診的120例疑似肺結(jié)核患者作為研究對(duì)象,在患者中分別開展痰涂片檢查、結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)和PCR檢驗(yàn),比較3種方法對(duì)肺結(jié)核的診斷價(jià)值,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

        1 資料與方法

        1.1研究對(duì)象及一般資料 選擇2020年1月—2022年8月在本院就診的120例疑似肺結(jié)核患者作為研究對(duì)象,其中男性71例,女性49例;年齡35~87歲,中位年齡64歲。

        1.1.1納入標(biāo)準(zhǔn) ① 由于出現(xiàn)不明原因的低熱、乏力、咳嗽、咯痰、胸痛、咯血等癥狀而在醫(yī)院就診,就診后發(fā)現(xiàn)具有與結(jié)核病病例密切接觸史,懷疑發(fā)生肺結(jié)核;② 年齡≥18歲;③ 在檢查過(guò)程中患者意識(shí)始終保持清醒并自愿配合。

        1.1.2排除標(biāo)準(zhǔn) ① 既往有胸部手術(shù)史者;② 處于妊娠期或哺乳期的女性;③ 在認(rèn)知、精神等方面存在障礙者。

        1.1.3倫理學(xué) 本研究符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn),并經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批(審批號(hào):2022-11),患者均了解本研究方法及目的,同意參與研究。

        1.2研究方法 在所有患者中開展痰涂片檢查、結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)和PCR檢驗(yàn)。

        1.2.1痰涂片檢查 在清晨采集患者咽拭子痰液標(biāo)本,置于專用試管中,再將痰液標(biāo)本均勻涂抹在載玻片上,采用4%多聚賴氨酸對(duì)載玻片進(jìn)行固定,待痰液自然晾干后,對(duì)標(biāo)本進(jìn)行抗酸染色處理,在顯微鏡下觀察痰液標(biāo)本,如發(fā)現(xiàn)痰液中存在結(jié)核分枝桿菌即可判斷為陽(yáng)性。

        1.2.2結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn) 在患者前臂皮下注射結(jié)核菌素蛋白衍生物,注射劑量為0.1 mL,在注射后72 h內(nèi)觀察注射點(diǎn)部位的皮膚,根據(jù)患者既往是否有卡介苗接種史判斷不同情況下的陽(yáng)性表現(xiàn)。如患者既往有卡介苗接種史,當(dāng)注射點(diǎn)皮膚紅腫硬塊的直徑達(dá)到15 mm時(shí),即可判斷為陽(yáng)性;如患者既往未接種卡介苗,當(dāng)注射點(diǎn)皮膚紅腫硬塊的直徑達(dá)到5 mm時(shí),即可判斷為陽(yáng)性。

        1.2.3PCR檢驗(yàn) 在清晨采集患者深度咳嗽后的第一口痰液0.5 mL作為痰液標(biāo)本,在痰液標(biāo)本中加入5 μL濃度為1 mol/L的氫氧化鈉(NaOH)溶液,混合均勻后將其放置在37 ℃孵育箱中靜置40 min,再使用離心機(jī)對(duì)混合液進(jìn)行離心處理,離心速度為10 000 r/min(離心半徑為10 cm),持續(xù)離心5 min后將上清液去除,取底部沉淀物。采用生理鹽水洗脫液對(duì)沉淀物進(jìn)行洗脫處理,連續(xù)洗滌2次,得到沉淀物。采用QSDX實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)儀(購(gòu)自美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司)以及結(jié)核分枝桿菌PCR檢測(cè)試劑盒(由上??道噬锟萍加邢薰旧a(chǎn))對(duì)沉淀物標(biāo)本進(jìn)行PCR檢驗(yàn),嚴(yán)格按照儀器及檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作,如在實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)儀檢測(cè)時(shí)出現(xiàn)熒光帶,即可判斷為陽(yáng)性。

        1.3觀察指標(biāo) ① 以臨床綜合診斷結(jié)果作為“金標(biāo)準(zhǔn)”,比較痰涂片檢查、結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)、PCR檢驗(yàn)對(duì)肺結(jié)核的診斷效能,考察指標(biāo)包括敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值及陰性預(yù)測(cè)值,計(jì)算公式如下:敏感度=真陽(yáng)性例數(shù)/(真陽(yáng)性例數(shù)+假陰性例數(shù))×100%,特異度=真陰性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù))×100%,準(zhǔn)確度=(真陽(yáng)性例數(shù)+真陰性例數(shù))/總例數(shù)×100%,陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=真陽(yáng)性例數(shù)/(真陽(yáng)性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù))×100%,陰性預(yù)測(cè)值=真陰性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陰性例數(shù))×100%。② 分析結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)、痰涂片檢查和PCR檢驗(yàn)對(duì)肺結(jié)核的診斷結(jié)果與診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”結(jié)果的一致性。③ 將確診肺結(jié)核患者分為活動(dòng)期和好轉(zhuǎn)期,比較結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)、痰涂片檢查和PCR檢驗(yàn)對(duì)不同分期肺結(jié)核患者的診斷符合率。

        1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 22.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以例(%)表示,進(jìn)行組間比較采用χ2檢驗(yàn),P<0.05即差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用Kappa檢驗(yàn)對(duì)不同診斷方法對(duì)肺結(jié)核診斷結(jié)果進(jìn)行一致性分析,依據(jù)κ值來(lái)判斷診斷結(jié)果的一致性,κ值<0.4即存在低度一致性,0.4≤κ值<0.7即存在中度一致性,κ值≥0.7即存在高度一致性。

        2 結(jié)果

        2.1痰涂片檢查、結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)和PCR檢驗(yàn)對(duì)肺結(jié)核診斷的結(jié)果比較與分析 在120例疑似肺結(jié)核患者中,經(jīng)臨床綜合診斷,有80例患者確診肺結(jié)核,其余40例患者均證實(shí)非肺結(jié)核。在80例確診肺結(jié)核患者中,分期為活動(dòng)期59例,好轉(zhuǎn)期21例。依照診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”(臨床綜合診斷結(jié)果),在肺結(jié)核診斷時(shí),結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)和PCR檢驗(yàn)的敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值及陰性預(yù)測(cè)值均明顯高于痰涂片檢查,而PCR檢驗(yàn)的敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值及陰性預(yù)測(cè)值均明顯高于結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)(均P<0.05)。見表1~2。

        表1 痰涂片檢查、結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)和PCR檢驗(yàn)對(duì)肺結(jié)核的診斷結(jié)果比較

        2.2痰涂片檢查、結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)和PCR檢驗(yàn)對(duì)肺結(jié)核的診斷結(jié)果與“金標(biāo)準(zhǔn)”診斷結(jié)果的一致性分析 在肺結(jié)核診斷結(jié)果中,PCR檢驗(yàn)和結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)的診斷結(jié)果與臨床綜合診斷結(jié)果呈高度一致,κ值分別為0.892、0.745,而痰涂片檢查診斷結(jié)果與臨床綜合診斷結(jié)果的一致性為中度,κ值為0.561。

        2.3痰涂片檢查、結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)、PCR檢驗(yàn)對(duì)不同分期肺結(jié)核的診斷符合率比較 在活動(dòng)期和好轉(zhuǎn)期肺結(jié)核診斷中,PCR檢驗(yàn)和結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)的診斷符合率均明顯高于痰涂片檢查,PCR檢驗(yàn)的診斷符合率明顯高于結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。見表3。

        表3 結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)、痰涂片檢查和PCR檢驗(yàn)對(duì)不同分期肺結(jié)核的診斷符合率

        3 討論

        肺結(jié)核在臨床上屬于常見的傳染性疾病,主要由結(jié)核分枝桿菌感染所致[5]。結(jié)核分枝桿菌感染引起的結(jié)核病可在多器官及組織中分布,肺結(jié)核是其中最常見的一種類型,在發(fā)病后患者會(huì)伴有乏力、低熱、咳嗽、咯血等癥狀,隨著病情進(jìn)展,還可能影響肺功能[6-8]。由于肺結(jié)核的病程較長(zhǎng),病情常反復(fù)發(fā)作,嚴(yán)重影響患者日常生活和工作,還容易發(fā)生傳播,因此,在患者發(fā)病后需盡早診斷,以做好肺結(jié)核的防控工作[9-10]。

        對(duì)于肺結(jié)核,臨床診斷時(shí)常采用痰涂片檢查,痰涂片檢查是臨床對(duì)呼吸系統(tǒng)感染性疾病進(jìn)行診斷的最常用方法,主要是通過(guò)采集痰液標(biāo)本進(jìn)行抗酸染色,并在顯微鏡下對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行觀察,來(lái)判斷是否發(fā)生結(jié)核分枝桿菌感染。結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)是臨床診斷肺結(jié)核的常用方法,可通過(guò)對(duì)患者皮膚注射結(jié)核菌素蛋白衍生物,觀察注射后的皮膚是否出現(xiàn)紅腫硬塊及紅腫硬塊面積,判斷患者是否發(fā)生肺結(jié)核。痰涂片檢查與結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)均可在一定程度上檢出活動(dòng)期肺結(jié)核,但對(duì)好轉(zhuǎn)期的肺結(jié)核容易出現(xiàn)漏診[11]。

        近年來(lái),臨床上關(guān)于肺結(jié)核與PCR檢驗(yàn)的研究較多,PCR檢驗(yàn)是一種新型的快速核酸檢驗(yàn)技術(shù),主要是通過(guò)對(duì)痰液標(biāo)本的沉淀物進(jìn)行洗脫后,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)儀對(duì)結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行檢測(cè),這種檢測(cè)方法對(duì)結(jié)核分枝桿菌可進(jìn)行有效識(shí)別,其檢測(cè)準(zhǔn)確度較高,可避免檢測(cè)結(jié)果受到人為因素的影響[12-14]。本研究結(jié)果顯示,依照診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”,在肺結(jié)核診斷時(shí),結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)和PCR檢驗(yàn)的敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值及陰性預(yù)測(cè)值均明顯高于痰涂片檢查,而PCR檢驗(yàn)的敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值及陰性預(yù)測(cè)值均明顯高于結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn),且PCR檢驗(yàn)和結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)的診斷結(jié)果與病理診斷結(jié)果高度一致,痰涂片檢查的診斷結(jié)果與病理診斷結(jié)果的一致性為中度,表明PCR檢驗(yàn)對(duì)肺結(jié)核的診斷準(zhǔn)確度較高,可減少誤診和漏診。

        本研究還表明,在活動(dòng)期和好轉(zhuǎn)期肺結(jié)核診斷中,PCR檢驗(yàn)和結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)的診斷符合率均比痰涂片更高,PCR檢驗(yàn)的診斷符合率明顯高于結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn),表明PCR檢驗(yàn)不僅可準(zhǔn)確檢出活動(dòng)期肺結(jié)核,還可對(duì)好轉(zhuǎn)期肺結(jié)核進(jìn)行診斷,準(zhǔn)確率較高,推薦將其用于肺結(jié)核的病情及預(yù)后評(píng)估中。

        綜上所述,PCR檢驗(yàn)對(duì)肺結(jié)核具有良好的診斷價(jià)值,其診斷準(zhǔn)確度優(yōu)于痰涂片檢查和結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn),可更加靈敏、準(zhǔn)確地檢出肺結(jié)核,還可輔助鑒別和診斷肺結(jié)核的分期,為肺結(jié)核的臨床治療提供指導(dǎo)和借鑒。

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