■鐘 光 朱沛霽* 賈代漢 齊玉凱 施壽榮

（1.江蘇立華牧業(yè)股份有限公司，江蘇 常州 231000；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所，江蘇 揚州 225125）

高溫是造成動物產(chǎn)生熱應(yīng)激的主要原因，尤其是隨著近些年“溫室效應(yīng)”的不斷嚴重，熱應(yīng)激帶來的問題成為當前畜禽生產(chǎn)中的一大難題[1]。熱應(yīng)激會造成動物采食量減少，組織和器官損傷，能破壞腸道黏膜形態(tài)，造成絨毛高度降低等問題，給畜禽生產(chǎn)造成巨大損失[2-4]。因此，緩解乃至解決熱應(yīng)激及其帶來的問題，對畜禽的規(guī)?；a(chǎn)具有劃時代的意義。其次，從營養(yǎng)學(xué)角度著手解決熱應(yīng)激及其造成的問題，是兼顧可行性和經(jīng)濟性的最佳選擇之一[5]。礦物元素鉻，無論是有機形態(tài)還是無機形態(tài)，研究均已發(fā)現(xiàn)其有緩解肉雞熱應(yīng)激的作用。Rao 等[6]給予1 日齡肉雞1、2 mg/kg 的有機鉻，而后開展熱應(yīng)激試驗，發(fā)現(xiàn)有機鉻可提高熱應(yīng)激下肉雞的生長性能，降低肝臟過氧化程度，從而保護了肝臟健康。Ghazi 等[7]給予1日齡肉雞0.6、1.2 mg/kg 的三氯化鉻和蛋氨酸鉻而后給予熱應(yīng)激處理，發(fā)現(xiàn)兩者都可顯著提高機體的初級和次級抗體反應(yīng)，以及胸腺和脾臟相對比重。王鈺等[8]也證實，飼糧中補充鉻元素能提高熱應(yīng)激下蛋雞空腸的絨毛高度和腸腺的長度，鉻具有緩解高溫帶來的熱應(yīng)激問題。黃羽肉雞是華東、華南地區(qū)廣泛分布的配套系，出欄量大，但其抗熱應(yīng)激添加劑的相關(guān)研究和報道較少。其次，黃羽肉雞體型小、生長速度慢，生理特點較白羽肉雞也可能存在差異，因此研究黃羽肉雞的抗熱應(yīng)激添加劑，對指導(dǎo)其生產(chǎn)有著積極的作用。本試驗參考白羽肉雞的研究結(jié)果，在飼糧中添加1.2 mg/kg的有機鉻，研究其對熱應(yīng)激狀態(tài)下黃羽肉雞生長性能、免疫器官發(fā)育和腸道形態(tài)的作用，為黃羽肉雞的規(guī)?；a(chǎn)中合理使用有機鉻緩解熱應(yīng)激損傷提供一定的指導(dǎo)作用。

1 材料與方法

黃羽肉雞（“優(yōu)黃”系列，中速型，購自揚州立華畜禽有限公司）；有機鉻[吡啶甲酸鉻（chromium picolinate，CrPic），純度＞96%]、鉻（Cr）含量為12.43%，購自江蘇易實生物科技有限公司。

1.1 試驗設(shè)計

選擇體重相近、健康的32 d雄性黃羽肉雞180只，隨機分為常溫組（CN）、熱應(yīng)激組（HS）和有機鉻組（HS+Cr），每組6 個重復(fù)，每重復(fù)10 只雞。常溫組和熱應(yīng)激組飼喂基礎(chǔ)飼糧，有機鉻組在基礎(chǔ)飼糧中添加1.2 mg/kg的有機鉻。常溫組環(huán)境為26 ℃，熱應(yīng)激組和有機鉻組環(huán)境溫度為35 ℃，試驗設(shè)計與處理見表1。試驗共14 d。

表1 試驗設(shè)計與處理

1.2 飼養(yǎng)管理

試驗采用三層籠養(yǎng)，雞籠底面規(guī)格為120 cm×80 cm，以保證飼養(yǎng)密度在0.1 m2/只左右。使用北京庫藍科技有限公司生產(chǎn)的動物營養(yǎng)代謝環(huán)控倉控制溫、濕度，濕度為55%～60%。為避免高溫環(huán)境（35 ℃）降低肉雞采食量造成有機鉻的攝入不足，正式試驗前7 d（25 d）開始飼喂對應(yīng)的試驗飼糧。自由采食和飲水，24 h光照，其他管理措施同黃羽肉雞飼養(yǎng)標準。按照1.20 mg/kg 的鉻元素添加量，試驗用吡啶甲酸鉻的純度為96%，在飼糧中添加10 mg/kg 的吡啶甲酸鉻。基礎(chǔ)飼糧按照我國《雞飼養(yǎng)標準》（NY/T 33—2004）進行配制并制粒，基礎(chǔ)飼糧組成與營養(yǎng)水平見表2。

表2 基礎(chǔ)飼糧組成與營養(yǎng)水平（風干基礎(chǔ)）

1.3 測定指標和方法

1.3.1 生長性能

試驗開始和結(jié)束時統(tǒng)計每個重復(fù)的體重、初始料重和余料重，計算32～45 d的平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）、料重比（F/G）和死淘率（Mortality）。

1.3.2 血液指標

熱應(yīng)激14 d，從每個重復(fù)中隨機選取2 只雞，翅下靜脈采血并置于促凝管中，靜置離心并分離血清。采用UniCel D×C 800 Synchron 全自動生化分析系統(tǒng)（Beckman Coulter，美國）測定血清中丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT，又稱谷丙轉(zhuǎn)氨酶）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST，又稱谷草轉(zhuǎn)氨酶）、乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸激酶（CK）的活力。試劑盒購自廣東省中山標佳生物科技有限公司。

1.3.3 腸道形態(tài)

將采樣雞宰殺，打開腹腔并分離整個腸段，而后懸空剪取空腸和回腸中間約1 cm 腸段并置于4%的甲醛溶液中，快速固定24 h，然后用連續(xù)濃度的乙醇脫水。標本在二甲苯中清除，并在56 ℃的熱風爐中放入石蠟中24 h。石蠟組織塊用切片機（徠卡手動旋轉(zhuǎn)切片機，RM-2235型，德國徠卡微系統(tǒng)有限公司）制備用于橫切片。在玻片上采集組織切片、脫蠟、蘇木精和伊紅染色，然后分別在光學(xué)顯微鏡下（50倍，DM-1000 型，德國徠卡微系統(tǒng)有限公司）檢查組織學(xué)特征。利用Leica X 應(yīng)用軟件，對每張切片測量絨毛高度和隱窩深度。絨毛高度是從隱窩-絨毛交界處到絨毛頂?shù)拈L度，而隱窩深度是從肌肉黏膜到隱窩-絨毛交界處的長度，計算絨毛高度、隱窩深度比（V/C）。

1.4 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2013軟件進行統(tǒng)計和簡單處理后，用SPSS 20.0 軟件進行單因素方差分析（one-way-ANOVA），均值顯著性分析用LSD和Duncan’s法進行多重比較，結(jié)果以“平均值±標準誤（Mean±SE）”表示，并以P＜0.05作為顯著差異，同時根據(jù)LSD的組間顯著性，分別以P1、P2作為“溫度”因素和“有機鉻”因素的顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼糧添加有機鉻對熱應(yīng)激下黃羽肉雞生長性能的作用（見表3）

由表3可知，HS組黃羽肉雞的45 d BW、32～45 d ADG、ADFI 顯著低于CN 組（P＜0.05），32～45 d F/G 和死亡率顯著高于CN組（P＜0.05）；與HS組相比，HS+Cr組黃羽肉雞45 d BW 顯著提高了4.5%（P＜0.05），32～45 d ADG、ADFI 分別顯著提高了45.8%和22.6%（P＜0.05），F(xiàn)/G顯著降低了16%（P＜0.05）。

表3 飼糧添加有機鉻對熱應(yīng)激下黃羽肉雞生產(chǎn)性能的作用（N=6）

2.2 飼糧添加有機鉻對熱應(yīng)激下黃羽肉雞血清酶活力的作用（見表4）

由表4 可知，HS 組黃羽肉雞的血清ALT、AST、LDH、CK 活力顯著高于CN 組（P＜0.05）；與HS 組相比，HS+Cr 組黃羽肉雞的AST 和CK 活力分別顯著降低了33.3%和44.4%（P＜0.05）。

表4 飼糧添加有機鉻對熱應(yīng)激下黃羽肉雞血清酶活力的作用（U/L）

2.3 飼糧添加有機鉻對熱應(yīng)激下黃羽肉雞腸道形態(tài)的作用（見表5）

表5 飼糧添加有機鉻對熱應(yīng)激下黃羽肉雞腸道形態(tài)的作用

由表5 可知，HS 組的空腸和回腸的絨毛高度、絨毛高度/隱窩深度顯著低于對照組（P＜0.05）；與HS 組相比，HS+Cr 組的空腸絨毛高度顯著提高了6.7%（P＜0.05），回腸絨毛高度/隱窩深度顯著提高了55.1%（P＜0.05）。

3 討論

3.1 飼糧添加有機鉻對熱應(yīng)激下黃羽肉雞生長性能的作用

鉻是一種金屬元素，能參與機體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成和核酸、脂肪代謝，降低體內(nèi)脂肪含量，提高機體對不良狀況的抵抗力，從而提高應(yīng)激狀態(tài)下機體的生長性能[9]。Jahanian 等[10]發(fā)現(xiàn)，給予450 日齡的羅斯308 肉雞1 mg/kg的蛋氨酸鉻，而后熱應(yīng)激處理，發(fā)現(xiàn)肉雞的采食量、增重和飼料轉(zhuǎn)化率顯著提高，血漿中皮質(zhì)酮的水平顯著降低。Hajializadeh 等[11]給予熱應(yīng)激狀態(tài)下的21 日齡羅斯308 肉雞0.5、1.0、1.5 mg/kg 的吡啶甲酸鉻和納米鉻，發(fā)現(xiàn)兩種鉻均能提高肉雞的增重和飼料轉(zhuǎn)化效率。而Zheng 等[12]將含有2 mg/kg 鉻元素的丙酸鉻、吡啶甲酸鉻和三氯化鉻分別給予1日齡肉雞，兩周后給予熱應(yīng)激處理。結(jié)果表明，不同形式的鉻都可以顯著提高熱應(yīng)激狀態(tài)下肉雞的體重和平均日增重。本試驗以吡啶甲酸鉻的形式補充有機鉻。結(jié)果表明，熱應(yīng)激顯著降低了肉雞的平均采食量、體重和平均增重，顯著增加了料重比和死淘率，說明本試驗的熱應(yīng)激模型構(gòu)建成功；以吡啶甲酸鉻的形式補充1.2 mg/kg飼糧的鉻元素，發(fā)現(xiàn)其能顯著提高熱應(yīng)激狀態(tài)下黃羽肉雞的增重、采食量，顯著降低料重比，說明飼糧中添加1.2 mg/kg 的有機鉻能提高黃羽肉雞的生長性能，抵抗熱應(yīng)激環(huán)境造成的不良影響，這與前人研究結(jié)果相一致，說明有機鉻也能夠緩解熱應(yīng)激對黃羽肉雞生長性能的不良影響。

3.2 飼糧添加有機鉻對熱應(yīng)激下黃羽肉雞血清酶活力的作用

動物機體中有些酶類屬于細胞內(nèi)酶，如ALT、AST、LDH、CK等，正常情況下血液中幾乎不存在。只有當組織、器官受損、細胞破裂時，這類酶才會釋放入血，因此檢測這類酶在血液中的活性通常被視為能夠反映組織、器官損傷程度的重要指標之一[13]。而大量研究均已證實，高溫環(huán)境會損傷機體的組織器官，從而升高血清中這些酶的活力[14]。而有學(xué)者提出，鉻能夠緩解高溫造成組織、器官損傷的程度。但對此觀點，不同學(xué)者有不同的看法。程玉芳等[15]發(fā)現(xiàn)，給予熱應(yīng)激狀態(tài)下的種公雞0.6、0.8、1.0 mg/kg 酵母鉻，其血清中CK、LDH、ALT 和AST 活力均有所下降，且作者認為鉻增強機體免疫功能，降低細胞膜的通透性，對機體組織細胞具有一定的保護作用是其降低酶活力的原因之一。但王剛等[16]研究發(fā)現(xiàn)，給予AA 肉雞0.6 mg/kg的鉻（以三氯化鉻和吡啶羧酸鉻的形式），其血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、磷酸肌酸激酶活力未見明顯改變。本試驗結(jié)果表明，熱應(yīng)激顯著提高了血清ALT、AST、LDH、CK 的活力，說明本試驗構(gòu)建的熱應(yīng)激模型成功，飼糧中添加1.2 mg/kg 有機鉻顯著降低了血清中AST 和CK 活力，說明在本試驗條件下，有機鉻可降低熱應(yīng)激導(dǎo)致黃羽肉雞組織、器官受損的程度。與前人結(jié)果相比較，可能是添加量不同的原因造成結(jié)果不一致，具體的原因需要進一步的研究證實。

3.3 飼糧添加有機鉻對熱應(yīng)激下黃羽肉雞腸道形態(tài)的作用

腸道是機體消化吸收的最重要場所，良好的腸道黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)對保持家禽健康及維持正常生產(chǎn)性能具有重要意義[17]。而當機體發(fā)生熱應(yīng)激時，腸道黏膜形態(tài)往往會造成損傷，且研究表明，這可能與熱應(yīng)激產(chǎn)生過量的氧自由基有關(guān)[18]。而飼糧補充鉻可改善熱應(yīng)激狀態(tài)下雞的腸道黏膜形態(tài)也有相關(guān)的報道[8]。李燕[19]的試驗也證實，飼糧添加0.2 mg/kg的吡啶甲酸鉻可緩解熱應(yīng)激狀態(tài)下肉鴨的腸道黏膜形態(tài)。本試驗結(jié)果表明，熱應(yīng)激顯著降低了黃羽肉雞空腸和回腸的絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度值，飼糧添加1.2 mg/kg的有機鉻可提高空腸絨毛高度和回腸的絨毛高度/隱窩深度值，與前人研究相比，使用的試驗動物和添加量均不相同，但均發(fā)現(xiàn)了鉻改善腸道黏膜形態(tài)的作用，說明有機鉻有改善熱應(yīng)激狀態(tài)下黃羽肉雞腸道黏膜形態(tài)的作用，這可能與鉻的抗氧化功能有關(guān)[19]。

4 結(jié)論

綜上所述，在本試驗條件下，飼糧中添加1.2 mg/kg的有機鉻可提高熱應(yīng)激下黃羽肉雞32～45 日齡的生長性能，改善腸道黏膜形態(tài)，降低血液酶活力，緩解熱應(yīng)激對黃羽肉雞生長性能和腸道形態(tài)的不良影響。