劉倩 張興利(通信作者) 徐靜

215300 江蘇省昆山市第三人民醫(yī)院血液科，江蘇昆山

骨髓增殖性腫瘤(MPN)常由各種因素導(dǎo)致患者骨髓血細(xì)胞過(guò)度增殖而發(fā)病，其病因復(fù)雜，在各系統(tǒng)疾病中可引起血細(xì)胞繼發(fā)性增多的疾病種類繁多，故增加了MPN 的診斷難度。血栓為MPN 常見(jiàn)并發(fā)癥之一，嚴(yán)重者可導(dǎo)致患者癱瘓甚至死亡，故MPN 的早期診斷對(duì)治療、預(yù)后均有很大的幫助。骨髓檢查結(jié)果雖然為確診MPN 的主要診斷標(biāo)準(zhǔn)，但該檢查結(jié)果耗時(shí)長(zhǎng)，因此需探討更為便捷、快速的鑒別診斷方法[1]。中性粒細(xì)胞中的堿性磷酸酶(NAP)為成熟粒細(xì)胞S 顆粒釋放的一種酶，其活性高低與成熟粒細(xì)胞成熟程度及功能相關(guān)，因此經(jīng)常被用于作為細(xì)胞功能的衡量手段。隨著對(duì)NAP 的深入研究，發(fā)現(xiàn)在許多疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，都可能檢測(cè)到NAP 活性的升高或降低，而其活性是否在MPN 中具有特異性改變，值得深入研究，本研究分析NAP 陽(yáng)性率和NAP 積分在MPN 中的診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

資料與方法

我院自2020年11月11日-2021年4月11日收治的MPN患者23例作為試驗(yàn)組，年齡18～78歲，年齡中位數(shù)為48歲；其中慢性粒細(xì)胞性白血病(CML)患者5例，占21.74%，骨髓纖維化(MF)患者5例，占21.74%，原發(fā)性血小板增多癥(ET)患者8例，占34.78%，真性紅細(xì)胞增多癥(PV)患者5例，占21.74%。繼發(fā)性紅細(xì)胞增多患者10例和繼發(fā)性血小板增多患者14 例，總計(jì)24 例作為對(duì)照組1，年齡22～76 歲，年齡中位數(shù)為39 歲；其中繼發(fā)性紅細(xì)胞增多患者占41.67%，繼發(fā)性血小板增多患者占58.33%。同期健康體檢者26 例作為對(duì)照組2，年齡21～72 歲，統(tǒng)計(jì)年齡中位數(shù)為43 歲。三組受檢者一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。本研究通過(guò)昆山市第三人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，入組者知情同意。

試劑與方法：①試劑：臺(tái)灣貝索公司NAP 免疫組化檢測(cè)試劑。②測(cè)定方法：用清潔玻片推制新鮮血膜，晾干，用臺(tái)灣貝索公司NAP 免疫組化檢測(cè)試劑進(jìn)行染色處理，嚴(yán)格按照該試劑說(shuō)明書(shū)操作，成片后在油鏡下進(jìn)行鏡檢，選擇分布均勻的細(xì)胞部位，進(jìn)行NAP 陽(yáng)性率測(cè)定，并計(jì)算NAP 積分。③NAP 陽(yáng)性率及積分計(jì)算方法：在油鏡下進(jìn)行中性分葉核粒細(xì)胞觀察，計(jì)數(shù)100 個(gè)，將其作為判斷其陽(yáng)性率的依據(jù)，具體為：(-)：細(xì)胞漿內(nèi)未發(fā)現(xiàn)黑色的物質(zhì)；(+)：細(xì)胞漿內(nèi)發(fā)現(xiàn)有棕黑色或是黑色的顆粒，占細(xì)胞漿內(nèi)的1/4 以內(nèi)面積；(++)：細(xì)胞漿內(nèi)發(fā)現(xiàn)有灰黑色的顆粒，占細(xì)胞漿內(nèi)的1/2 以內(nèi)面積；(+++)：細(xì)胞漿內(nèi)發(fā)現(xiàn)有致密的黑色沉淀物，占細(xì)胞漿內(nèi)的3/4 以內(nèi)面積；(++++)：細(xì)胞漿內(nèi)發(fā)現(xiàn)有致密的黑色的顆粒，幾乎將胞核完全覆蓋；積分計(jì)算：(+)細(xì)胞數(shù)×1+(++)細(xì)胞數(shù)×2+(+++)細(xì)胞數(shù)×3+(++++)細(xì)胞數(shù)×4。

觀察指標(biāo)：觀察三組NAP 陽(yáng)性率和積分檢測(cè)結(jié)果，并對(duì)比試驗(yàn)組內(nèi)CML、MF、ET、PV 患者的NAP 檢測(cè)結(jié)果，包括NAP 陽(yáng)性率及NAP 積分。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以n(%)表示，組間χ2檢驗(yàn)，計(jì)量以(±s)表示，組間t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

試驗(yàn)組MF、ET、PV患者NAP陽(yáng)性率和積分均顯著高于對(duì)照組1和對(duì)照組2，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。試驗(yàn)組CML患者NAP陽(yáng)性率和積分均低于對(duì)照組1和對(duì)照組2，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。試驗(yàn)組CML、ET、MF患者NAP陽(yáng)性率和積分均顯著低于PV患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。試驗(yàn)組MF患者NAP陽(yáng)性率和積分均顯著高于ET患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 三組NAP檢測(cè)結(jié)果對(duì)比(±s)

表1 三組NAP檢測(cè)結(jié)果對(duì)比(±s)

注：與對(duì)照組比較，①P＜0.05；與PV比較，②P＜0.05；與ET比較，③P＜0.05；與MF比較，④P＜0.05

組別 項(xiàng)目 NAP陽(yáng)性率(%) NAP積分試驗(yàn)組 CML(n=5) 8.20±2.79①②③④ 11.50±3.41①②③④(n=23) MF(n=5) 76.40±7.89① 206.90±31.98①③ET(n=8) 69.88±9.37①② 87.56±18.91①②PV(n=5) 86.74±5.98① 211.10±39.56①對(duì)照組1(n=24) 36.29±8.76 58.44±13.75對(duì)照組2(n=26) 30.77±5.07 45.61±14.52

討 論

MPN是腫瘤樣增殖癥，屬于多功能干細(xì)胞克隆性疾病，可能由粒細(xì)胞、紅細(xì)胞以及巨核細(xì)胞增殖而成，也可能由骨細(xì)胞和原纖維細(xì)胞增生導(dǎo)致[2]。該類疾病主要包括CML、PV、ET、PMF 等，各種疾病在臨床表現(xiàn)上存在相當(dāng)程度的重疊，如都可能出現(xiàn)乏力、盜汗、腹脹、體重減輕，外周血一系或者多系細(xì)胞計(jì)數(shù)的增高，同時(shí)可伴有肝臟腫大、脾臟腫大、血栓形成等。

不同的細(xì)胞導(dǎo)致了疾病增生速度不同，同時(shí)臨床癥狀也有差異，從而導(dǎo)致診斷及鑒別存在困難[3]。同時(shí)，因?yàn)闆](méi)有特異性臨床癥狀，明確診斷均需要依靠活檢、骨髓細(xì)胞以及免疫遺傳檢查。其中骨髓穿刺、活檢意義重大，但為有創(chuàng)操作且耗時(shí)較長(zhǎng)，尋求更為快捷、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的檢查方法顯得十分有意義[4]。

NAP是中性粒細(xì)胞成熟顆粒釋放的一種酶，根據(jù)目前的研究，該酶的活性可與多種因素相關(guān)，其中免疫、感染、創(chuàng)傷或者中毒均可能影響該酶活性，而內(nèi)分泌功能和激素也可能產(chǎn)生影響[5-9]。同時(shí)其在堿性環(huán)境下可具有殺菌作用，其活性也與機(jī)體所感染的病毒種類、嚴(yán)重程度相關(guān)[10]。

有研究顯示，NAP 可能隨著病情的變化增加或者降低活性[11]，患者如果是粒細(xì)胞白血病、單核細(xì)胞性白血病、紅白血病或陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥，其NAP 均可能檢測(cè)到活性降低，而在出血類疾病、細(xì)菌感染、手術(shù)感染、急性淋巴細(xì)胞白血病以及再生障礙性貧血等疾病中，可檢測(cè)到其活性增高。

王錦等[12]收集了200 例腫瘤化療后合并感染患者臨床資料，將患者分為真菌組、細(xì)菌組和病毒組。對(duì)所有患者進(jìn)行NAP 檢測(cè)，并對(duì)各組患者體內(nèi)NAP 水平進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)菌組患者NAP 水平最高，真菌組和病毒組患者體內(nèi)NAP 水平較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

梁崇等[13]將150 例兒童根據(jù)病情分為正常對(duì)照組、單純手足口病(HFMD)組及HFMD 合并感染組，對(duì)其分別進(jìn)行白細(xì)胞形態(tài)學(xué)分類及NAP 檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HFMD 合并感染組NAP 陽(yáng)性率及積分均顯著高于正常對(duì)照組、單純HFMD 組，HFMD 合并感染組患兒經(jīng)治療后該組患兒的NAP 陽(yáng)性率及積分顯著下降，與治療前比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這提示通過(guò)對(duì)HFMD 合并感染患兒的NAP 陽(yáng)性率及積分監(jiān)測(cè)有助于臨床醫(yī)生對(duì)疾病的診斷、預(yù)后進(jìn)行判斷。

NAP 的含量以活性直接標(biāo)志中性粒細(xì)胞的成熟度，因此經(jīng)常被作為衡量細(xì)胞功能的一種手段，并且該實(shí)驗(yàn)也相對(duì)快速、簡(jiǎn)便，應(yīng)用前景廣闊[14]。在本研究結(jié)果中，試驗(yàn)組MF、ET、PV 患者NAP 陽(yáng)性率和積分均顯著高于對(duì)照組1 和對(duì)照組2，試驗(yàn)組CML患者NAP陽(yáng)性率和積分均顯著低于對(duì)照組1和對(duì)照組2，說(shuō)明了相較于繼發(fā)性紅細(xì)胞增多或者繼發(fā)性血小板增多的患者，以及健康體檢者，MF、ET、PV 患者NAP 陽(yáng)性率普遍更高，NAP 積分也表現(xiàn)出了差異，而CML 患者的NAP 陽(yáng)性率和積分普遍降低，說(shuō)明了NAP 陽(yáng)性率和NAP 積分在鑒別MPN 中有一定的意義，但目前仍然不具有明確診斷的能力，期待后續(xù)研究深入觀察NAP在種類不同的MPN中的表現(xiàn)。

而試驗(yàn)組CML、ET、MF患者的NAP陽(yáng)性率和積分均低于PV患者。試驗(yàn)組CML患者NAP陽(yáng)性率和積分低于ET、MF患者，MF患者NAP積分和陽(yáng)性率高于ET患者。由于CML的NAP陽(yáng)性率和積分相較于正常對(duì)照組1 和對(duì)照組2 更低，且與MF、ET、PV 也表現(xiàn)出了顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可以認(rèn)為，NAP 可以作為診斷CML的優(yōu)秀診斷指標(biāo)。

綜上所述，NAP 染色簡(jiǎn)便、快速，且其陽(yáng)性率與積分在MPN 患者中可出現(xiàn)變化，與其他因素引起繼發(fā)性血細(xì)胞增多的患者及正常體檢者不同。同時(shí)，在不同種類的MPN 中也有不同的表現(xiàn)，是診斷與鑒別MPN的重要指標(biāo)。